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以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定 被引量：2
1
作者 方希修 乐国伟 +2 位作者 王冬梅 刘建文 施用辉 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期98-102,共5页
采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的... 采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的稳定性,该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代。试验结果表明,携带HBsAg的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X8786/pcDNA3s已成功构建,为研究和应用人和动物治疗用乙型肝炎病毒口服基因工程活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 电转化 乙肝表面抗原 SDS—PAPG 基因序列分析
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细菌重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗研究进展 被引量：6
2
作者 李文桂 陈雅棠 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期49-53,共5页
鼠伤寒沙门氏菌 ( St)是一种肠道致病菌 ,通过基因突变可构建许多鼠伤寒沙门氏菌减毒株 ,例如 :X40 72、X42 17、X45 5 0、X4989、X4990、 X40 64、 SL 3 2 61、 GID10 1、 GID10 5、GID10 6和 BRD5 0 9等 ,它们均是两个或多个基因的精... 鼠伤寒沙门氏菌 ( St)是一种肠道致病菌 ,通过基因突变可构建许多鼠伤寒沙门氏菌减毒株 ,例如 :X40 72、X42 17、X45 5 0、X4989、X4990、 X40 64、 SL 3 2 61、 GID10 1、 GID10 5、GID10 6和 BRD5 0 9等 ,它们均是两个或多个基因的精确突变 ,其基因型和表型均很稳定 ,可用作构建细菌性疫苗的表达载体。国内外学者相继研制了肺炎链球菌、结核杆菌、百日咳杆菌、产单核细胞李斯特菌、鼠疫耶尔森菌、土拉弗郎西斯菌、铜绿假单胞菌、淋病奈瑟菌、牛布氏杆菌、破伤风梭菌、炭疽芽孢杆菌、沙眼衣原体和猪肺炎支原体等细菌的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗。文章着重讨论了这些疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展 。 展开更多
关键词 细菌重组减毒疫苗 鼠伤寒沙门氏菌 肠道致病菌 免疫机制 细菌性疾病
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鼠伤寒沙门氏菌CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用 被引量：1
3
作者 李丹 袁梦君 +3 位作者 王旭 李文豪 张鸿雁 王恬 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第12期143-150,共8页
目的建立快速、超灵敏检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法根据鼠伤寒沙门氏菌fliC基因保守片段设计并合成特异性CRISPR RNA(crRNA),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)... 目的建立快速、超灵敏检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法根据鼠伤寒沙门氏菌fliC基因保守片段设计并合成特异性CRISPR RNA(crRNA),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)特异性引物,利用RPA技术扩增样本核酸,并对扩增产物进行CRISPR/Cas12a荧光检测。结果该检测方法克服了传统鼠伤寒沙门氏菌检测方法的缺陷,耗时短且具有较高的灵敏度,对鼠伤寒沙门氏菌的检出限低至1copy/μL,与乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌等常见食源性致病菌核酸检测无交叉反应,且建立的方法在检测人工污染的食品样品时具有较高的灵敏度和准确性。结论本研究建立的检测方法耗时短、灵敏度高,可用于鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas12a 重组酶聚合酶扩增 鼠伤寒沙门氏菌 快速检测
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验 被引量：7
4
作者 许信刚 赵红妮 童德文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期955-962,共8页
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏... 本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5)。鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体。本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 PRRSV GP5蛋白 活载体疫苗
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减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展 被引量：4
5
作者 杨冬梅 王鹏雁 +1 位作者 王远志 陈创夫 《动物医学进展》 CSCD 2007年第4期85-88,共4页
活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以... 活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 活载体疫苗 重组减毒沙门菌 基因减毒
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携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达
6
作者 方希修 王冬梅 +3 位作者 杨晓志 管军军 孙进 乐国伟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期403-407,共5页
构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液... 构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液均呈淡绿色。流式细胞仪结果证实,减毒鼠伤寒沙门菌可以将pEGFP-C3转入脾脏细胞,并在其中表达。在体内稳定试验中,经雏鸡连续传代12次,从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色,证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。用免疫剂量的重组细菌接种雏鸡后,观察1个月未见有异常现象,同时剖检后也未见脏器有眼观病变。免疫一定时间后,在雏鸡肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠、肌肉等组织有荧光表达。表达PEGFP-C3的重组鼠伤寒沙门氏菌在鸡体产生荧光表达,为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗研制提供一个优良模型。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白C3(EGFP—C3) 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 荧光表达
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结核分支杆菌重组活疫苗研究进展 被引量：1
7
作者 李文桂 陈雅棠 《动物医学进展》 CSCD 2005年第2期1-5,共5页
结核分支杆菌(MTB)引起的结核病 是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化 疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该 病的惟一疫苗,但其免疫效果极不稳定。分 子生物学技术的发展为研制新型MTB疫苗 提供了理想方法,人们利用鼠伤寒沙门氏菌... 结核分支杆菌(MTB)引起的结核病 是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化 疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该 病的惟一疫苗,但其免疫效果极不稳定。分 子生物学技术的发展为研制新型MTB疫苗 提供了理想方法,人们利用鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium,St)减毒株作为 载体,将编码MTB保护性抗原的基因导入其 中,可构建重组St疫苗,如rSt Ag85B疫苗 和rSt ESAT 6疫苗;将编码MTB保护性抗 原的基因导入小鼠巨噬细胞或骨髓细胞可构 建MTB活细胞疫苗,如J774 HSP65疫苗和 BMC HSP65疫苗;利用基因诱变可构建 MTB减毒活疫苗,如MTB嘌呤营养缺陷株, ICL基因剔除株,VitB5营养缺陷株和十一萜 醇激酶基因变异株。文章介绍了结核分支杆 菌重组鼠伤寒沙门氏菌疫苗,活细胞疫苗和 减毒活疫苗的构建及其免疫机制等方面的研 究进展。 展开更多
关键词 结核分支杆菌 重组鼠伤寒沙门氏菌疫苗 活细胞疫苗 减毒活疫苗
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通过疫苗接种控制禽群的沙门氏菌病 被引量：1
8
作者 肖昌 陈琳 +1 位作者 Daniel Windhorst 孙建和 《国外畜牧学（猪与禽）》 2015年第3期53-56,共4页
食源性感染肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）和鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimuriun）会引发严重的公共卫生问题。在与沙门氏菌感染斗争10多年后,该菌仍是导致人类发生食物中毒的重要病原之一。最近的研究估计,全世界每年大约发生8 03... 食源性感染肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）和鼠伤寒沙门氏菌（S.Typhimuriun）会引发严重的公共卫生问题。在与沙门氏菌感染斗争10多年后,该菌仍是导致人类发生食物中毒的重要病原之一。最近的研究估计,全世界每年大约发生8 030万例与沙门氏菌感染有关的食源性疾病。在欧盟,沙门氏菌是继弯曲杆菌之后的第二种最重要的食源性感染病原（图1）。禽肉和禽蛋是全球许多地方质优价廉能量蛋白的主要来源,但它们被认为是人类感染沙门氏菌的主要原因。 展开更多
关键词 沙门氏菌感染 食源性感染 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗接种 食源性疾病 类感染 弯曲杆菌 肠炎沙门氏菌 SALMONELLA 减毒活疫苗
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减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究(英文) 被引量：4
9
作者 迪卡 陈雪燕 +2 位作者 帅江冰 陈宁 方维焕 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期237-244,共8页
本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于... 本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol?L-1,增加浓度至0.75 mmol?L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol?L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究. 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 大肠杆菌 重组质粒 增强型绿色荧光蛋白
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几种糖预防禽沙门氏菌感染的研究综述
10
作者 韦平 《广西畜牧兽医》 1991年第1期45-49,共5页
禽沙门氏菌感染这一古老的疾病目前仍是世界家禽业经济损失的主要原因之一。造成的危害主要包括:因感染所导致的家禽死亡、生产性能降低以及用于预防和治疗的巨额费用等方面。此外、因感染使禽肉、禽蛋等家禽产品的污染可造成人类食物... 禽沙门氏菌感染这一古老的疾病目前仍是世界家禽业经济损失的主要原因之一。造成的危害主要包括:因感染所导致的家禽死亡、生产性能降低以及用于预防和治疗的巨额费用等方面。此外、因感染使禽肉、禽蛋等家禽产品的污染可造成人类食物源性疾病的暴发。各国的研究者多年来为了对付这一问题,从各个方面进行了广泛而深入的研究,业已证明为行之有效的方法和措施包括:培育无沙门氏菌的种鸡群、竞争排斥法(或称Nurmi氏概念)、饲料颗粒化新工艺、饲料中添加有机酸以及发展新型疫苗等。一些国家采用上述方法的一项或多项、立法执行都已取得满意的成绩。目前。 展开更多
关键词 沙门氏菌感染 食物源性疾病 种鸡群 家禽业 颗粒化 新型疫苗 性能降低 鼠伤寒沙门氏菌 细菌数 竞争排斥
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