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实时重组酶辅助扩增技术快速检测狗源性成分
1
作者
刘明明
颜海燕
+3 位作者
周朝旭
叶语桦
李志刚
肖昭竞
《肉类研究》
北大核心
2025年第4期24-29,共6页
为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉...
为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉反应和重复性实验对该检测方法的特异性和稳定性进行评估,并将Rt-RAA方法灵敏度以及对混合模拟样品和市售样品的检测结果与相应的国标检测方法进行对比。结果表明,Rt-RAA检测方法特异性强、稳定性好,在30 min内可检测到目的序列,对狗源性成分的检出限为0.2%,明显优于实时荧光聚合酶链式反应检测方法,应用Rt-RAA方法与国标方法对模拟样品和市售实际样品检测结果完全一致。因此,本研究建立的Rt-RAA检测方法适用于狗源性成分的检测,为肉源性成分鉴定提供了另一种快速、准确的新方法。
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关键词
实时荧光
重组酶辅助扩增技术
狗源性成分
肉制品掺假
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职称材料
利用双重实时荧光重组酶辅助扩增技术快速检测肉制品中鼠源性成分
被引量：
1
2
作者
刘明明
周朝旭
+2 位作者
颜海燕
田碧英
李根容
《肉类研究》
北大核心
2024年第9期15-20,共6页
为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参...
为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参数的优化确定最佳双重Rt-RAA检测反应条件。进一步对建立的双重Rt-RAA检测方法进行特异性、灵敏度及稳定性评估,并应用该方法对模拟市售肉制品进行检测。结果表明,所建立的双重RtRAA检测方法特异性强、稳定性好,大鼠和小鼠源性成分的检出限分别为0.5%和0.2%,同步检测2种源性成分检出限为0.5%,同步检测混合模拟市售样品检出限仍低至0.5%,双重Rt-RAA与实时荧光定量聚合酶链式反应对市售样品和模拟样品检测结果高度一致。因此,本研究建立的双重Rt-RAA检测方法适用于大鼠和小鼠源性成分的检测,为肉制品掺假检测提供了一种快捷、高效及准确的新方法。
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关键词
大鼠
小鼠
肉制品
实时荧光
重组酶辅助扩增技术
肉制品掺假
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职称材料
非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用
被引量：
4
3
作者
岳怀宁
李艳蕊
+6 位作者
张亚楠
苏恺
袁晨
逯纪成
孙泰然
薛文阁
宋勤叶
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第5期19-25,共7页
为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系...
为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系和扩增条件;检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性,分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示,建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应;单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示,建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致,其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势,适合现场快速检测和诊断,具有进一步开发潜力。
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关键词
非洲猪瘟病毒
B646L基因
重组酶辅助扩增技术
可视化
核酸检测试纸条
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职称材料
题名
实时重组酶辅助扩增技术快速检测狗源性成分
1
作者
刘明明
颜海燕
周朝旭
叶语桦
李志刚
肖昭竞
机构
重庆市计量质量检测研究院(国家农副加工产品及调味品质量检验检测中心)
出处
《肉类研究》
北大核心
2025年第4期24-29,共6页
基金
重庆市市场监督管理局科研计划项目(CQSJKJDW2023006)。
文摘
为快速检测狗源性成分,针对cytb基因保守区域设计3对重组酶辅助扩增(recombinaseaided amplification,RAA)引物和1条核酸外切酶(exonuclease,exo)探针,通过引物和探针浓度的筛选,构建一种实时RAA(real-time RAA,Rt-RAA)方法。利用交叉反应和重复性实验对该检测方法的特异性和稳定性进行评估,并将Rt-RAA方法灵敏度以及对混合模拟样品和市售样品的检测结果与相应的国标检测方法进行对比。结果表明,Rt-RAA检测方法特异性强、稳定性好,在30 min内可检测到目的序列,对狗源性成分的检出限为0.2%,明显优于实时荧光聚合酶链式反应检测方法,应用Rt-RAA方法与国标方法对模拟样品和市售实际样品检测结果完全一致。因此,本研究建立的Rt-RAA检测方法适用于狗源性成分的检测,为肉源性成分鉴定提供了另一种快速、准确的新方法。
关键词
实时荧光
重组酶辅助扩增技术
狗源性成分
肉制品掺假
Keywords
real-time recombinase-aided amplification
dog-derived ingredients
meat adulteration
分类号
TS251.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
利用双重实时荧光重组酶辅助扩增技术快速检测肉制品中鼠源性成分
被引量：
1
2
作者
刘明明
周朝旭
颜海燕
田碧英
李根容
机构
重庆市计量质量检测研究院
出处
《肉类研究》
北大核心
2024年第9期15-20,共6页
基金
重庆市市场监督管理局科研计划项目(CQSJKJDW2023006)。
文摘
为实现肉制品中大鼠和小鼠源性成分的同步检测,基于实时荧光重组酶辅助扩增(real-time recombinase-aided amplification,Rt-RAA)技术,以大鼠COX3基因和小鼠16S rRNA基因序列保守区域为靶标,分别设计相应的Rt-RAA引物和探针,通过反应参数的优化确定最佳双重Rt-RAA检测反应条件。进一步对建立的双重Rt-RAA检测方法进行特异性、灵敏度及稳定性评估,并应用该方法对模拟市售肉制品进行检测。结果表明,所建立的双重RtRAA检测方法特异性强、稳定性好,大鼠和小鼠源性成分的检出限分别为0.5%和0.2%,同步检测2种源性成分检出限为0.5%,同步检测混合模拟市售样品检出限仍低至0.5%,双重Rt-RAA与实时荧光定量聚合酶链式反应对市售样品和模拟样品检测结果高度一致。因此,本研究建立的双重Rt-RAA检测方法适用于大鼠和小鼠源性成分的检测,为肉制品掺假检测提供了一种快捷、高效及准确的新方法。
关键词
大鼠
小鼠
肉制品
实时荧光
重组酶辅助扩增技术
肉制品掺假
Keywords
rats
mice
meat products
real-time recombinase-aided amplification
meat product adulteration
分类号
TS251.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用
被引量：
4
3
作者
岳怀宁
李艳蕊
张亚楠
苏恺
袁晨
逯纪成
孙泰然
薛文阁
宋勤叶
机构
河北农业大学动物医学院河北省兽医生物技术创新中心
保定市动物疫病预防控制中心
正大集团秦皇岛有限公司
出处
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023年第5期19-25,共7页
基金
河北省重点研发计划项目(21326613D)。
文摘
为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法,本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针,通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间,确定反应的最佳体系和扩增条件;检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性,分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示,建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应;单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示,建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致,其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势,适合现场快速检测和诊断,具有进一步开发潜力。
关键词
非洲猪瘟病毒
B646L基因
重组酶辅助扩增技术
可视化
核酸检测试纸条
Keywords
African swine fever virus
B 646 L gene
recombinase aided amplification technique
visualization
nucleic acid test strip
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
实时重组酶辅助扩增技术快速检测狗源性成分
刘明明
颜海燕
周朝旭
叶语桦
李志刚
肖昭竞
《肉类研究》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用双重实时荧光重组酶辅助扩增技术快速检测肉制品中鼠源性成分
刘明明
周朝旭
颜海燕
田碧英
李根容
《肉类研究》
北大核心
2024
1
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职称材料
3
非洲猪瘟病毒可视化重组酶辅助扩增检测方法的建立与初步应用
岳怀宁
李艳蕊
张亚楠
苏恺
袁晨
逯纪成
孙泰然
薛文阁
宋勤叶
《中国兽医杂志》
CAS
北大核心
2023
4
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职称材料
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