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K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
1
作者
喻华英
曾婷婷
+8 位作者
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
《中国家禽》
北大核心
2025年第7期47-55,共9页
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检...
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。
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关键词
家禽
K亚群禽白血病病毒
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
-
侧
流
层析
试纸
条
快速检测
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职称材料
鳗鲡疱疹病毒基础RPA及RPA-LFD检测方法的比较
被引量：
1
2
作者
林而舒
《渔业研究》
2024年第4期367-374,共8页
【目的】鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡“脱黏败血综合征”的主要病原,对鳗鲡养殖产业造成了严重的经济损失。为达到早期预警和防止病毒扩增蔓延的目的,建立一套AngHV快速检测技术对中国鳗鲡养殖疾病防控具有重要意...
【目的】鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡“脱黏败血综合征”的主要病原,对鳗鲡养殖产业造成了严重的经济损失。为达到早期预警和防止病毒扩增蔓延的目的,建立一套AngHV快速检测技术对中国鳗鲡养殖疾病防控具有重要意义。【方法】本研究根据AngHV ORF55设计了扩增引物和探针,建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)的基础RPA及RPA侧向流层析试纸条法(RPA-LFD)检测方法,探究了不同时间和温度对基础RPA和RPA-LFD扩增效果的影响,并比较了2种方法的灵敏度、特异性和临床应用效果。【结果】本研究建立的AngHV基础RPA及RPA-LFD快速检测方法扩增产物大小为394 bp;2种检测方法都仅需20~40 min即可完成检测过程;温度的变化对检测方法的影响不大,37~43℃范围内均能得到较好的扩增效果;2种检测方法均与鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus)和鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus)无交叉反应,表现出良好的特异性;RPA-LFD检测方法具有更高的检测灵敏度,检出限至1.32×10^(0)copies/mL,基础RPA检出限至1.32×10^(3)copies/mL;检测实验室保存的20份鳗鲡病料DNA,2种方法检测的结果一致,阳性率均为30%,表明AngHV基础RPA和RPALFD检测方法均具有良好的临床应用潜力。【结论】AngHV基础RPA和RPA-LFD检测方法十分适用于基层科研单位、鳗鲡产品加工场及养殖场的病毒检测,丰富了AngHV检测手段的可选性。
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关键词
鳗鲡
鳗鲡疱疹病毒(AngHV)
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
(RPA)
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
-
侧向
流
层析
试纸
条
法
(
rpa-lfd
)
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职称材料
题名
K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
1
作者
喻华英
曾婷婷
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
机构
广西大学动物科学技术学院
广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室
桂林力源粮油食品集团有限公司
出处
《中国家禽》
北大核心
2025年第7期47-55,共9页
基金
广西科技重大专项(桂科AA23062050)
国家现代农业产业技术体系广西家禽产业创新团队建设专项资金(nycytxgxcxtd2024-19-3)
广西八桂学者专项(2019A50)。
文摘
为满足基层实验室对K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup K,ALV-K)检测需求,研究建立了一种基于重组酶聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条(Recombinase polymerase amplifcation-lateral flow dipstick,RPA-LFD)的ALV-K快速检测方法。试验首先通过细胞培养分离鉴定出一株ALV-K,并以此分离株的前病毒DNA作为建立检测方法的模板;其次,针对ALV-K gp85基因保守位置设计引物和探针,优化反应体系的引物浓度、探针浓度和反应温度,在此基础上进行敏感性预试验并以预试验检测限优化反应时间;最后,以优化反应时间进行敏感性试验、稳定性试验及特异性试验。结果显示:建立的ALV-K RPA-LFD反应体系在引物浓度为0.45 mmol/L,探针浓度为0.14 mmol/L,39℃条件下反应21 min,其检测限为4.86×10^(2) copies/反应的ALV-K DNA,并且不与其他常见禽类病原体核酸发生非特异扩增反应;30份临床病料中有14份ALV-K阳性,与单重PCR方法结果一致。研究表明,建立的ALV-K RPA-LFD检测方法具有快速、特异、操作简单,不需要复杂仪器,能够直观地观察结果的优点,适用于临床快速检测ALV-K,特别是实验室条件有限的检测场景。
关键词
家禽
K亚群禽白血病病毒
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
-
侧
流
层析
试纸
条
快速检测
Keywords
poultry
avian leukosis virus subgroup K
recombinant polymerase amplification
-
lateral flow dipstick
rapid detection
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
鳗鲡疱疹病毒基础RPA及RPA-LFD检测方法的比较
被引量：
1
2
作者
林而舒
机构
福建省淡水水产研究所
出处
《渔业研究》
2024年第4期367-374,共8页
基金
福建省属公益类科研院所基本科研专项(2023R1013003)
国家大宗淡水鱼产业技术体系项目(CARS-45-41)
福建省属公益类科研院所基本科研专项(2022R1014005)。
文摘
【目的】鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡“脱黏败血综合征”的主要病原,对鳗鲡养殖产业造成了严重的经济损失。为达到早期预警和防止病毒扩增蔓延的目的,建立一套AngHV快速检测技术对中国鳗鲡养殖疾病防控具有重要意义。【方法】本研究根据AngHV ORF55设计了扩增引物和探针,建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)的基础RPA及RPA侧向流层析试纸条法(RPA-LFD)检测方法,探究了不同时间和温度对基础RPA和RPA-LFD扩增效果的影响,并比较了2种方法的灵敏度、特异性和临床应用效果。【结果】本研究建立的AngHV基础RPA及RPA-LFD快速检测方法扩增产物大小为394 bp;2种检测方法都仅需20~40 min即可完成检测过程;温度的变化对检测方法的影响不大,37~43℃范围内均能得到较好的扩增效果;2种检测方法均与鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus)和鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus)无交叉反应,表现出良好的特异性;RPA-LFD检测方法具有更高的检测灵敏度,检出限至1.32×10^(0)copies/mL,基础RPA检出限至1.32×10^(3)copies/mL;检测实验室保存的20份鳗鲡病料DNA,2种方法检测的结果一致,阳性率均为30%,表明AngHV基础RPA和RPALFD检测方法均具有良好的临床应用潜力。【结论】AngHV基础RPA和RPA-LFD检测方法十分适用于基层科研单位、鳗鲡产品加工场及养殖场的病毒检测,丰富了AngHV检测手段的可选性。
关键词
鳗鲡
鳗鲡疱疹病毒(AngHV)
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
(RPA)
重组
酶
聚合
酶
等温
扩
增
-
侧向
流
层析
试纸
条
法
(
rpa-lfd
)
Keywords
eel
Anguillid herpesvirus(AngHV)
recombinase polymerase amplification(RPA)
recombinase polymerase amplification
-
lateral flow dipstick(
rpa-lfd
)
分类号
S943 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
K亚群禽白血病病毒的分离鉴定及RPA-LFD快速检测方法的建立与应用
喻华英
曾婷婷
杨宗维
王粲
牙侯勋
万丽君
罗思思
李孟
谢芝勋
于美玲
谢丽基
《中国家禽》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
鳗鲡疱疹病毒基础RPA及RPA-LFD检测方法的比较
林而舒
《渔业研究》
2024
1
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职称材料
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