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含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
李素芳
魏锐利
金玲
《国际眼科杂志》
CAS
2006年第4期781-782,共2页
目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双...
目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。
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关键词
抗凋亡基因BCL-2
逆转录
病毒
重组
体
酶切鉴定
基因
重组
逆转录
病毒
重组逆转录病毒载体
PCDNA3.1
包装细胞系
bcl-2基因
脂质体法
稳定表达
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职称材料
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
被引量：
2
2
作者
田宏
吴锦艳
+5 位作者
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期478-482,共5页
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒...
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。
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关键词
猪水疱病
病毒
P1基因
重组逆转录病毒载体
PK-15细胞
基因表达
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职称材料
题名
含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
李素芳
魏锐利
金玲
机构
武警上海总队医院眼科
第二军医大学长征医院眼科
出处
《国际眼科杂志》
CAS
2006年第4期781-782,共2页
基金
中国国家自然科学基金资助项目(No.30070800)~~
文摘
目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。
关键词
抗凋亡基因BCL-2
逆转录
病毒
重组
体
酶切鉴定
基因
重组
逆转录
病毒
重组逆转录病毒载体
PCDNA3.1
包装细胞系
bcl-2基因
脂质体法
稳定表达
Keywords
retrovirus, vector recombinant, gene bcl-2
分类号
R774.1 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
被引量：
2
2
作者
田宏
吴锦艳
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期478-482,共5页
基金
国家863高技术研究发展计划(2003AA241110)
文摘
从猪水疱病全长感染性cDNA中,应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK-15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞,发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达,而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别;同时应用PCR技术,可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白,而且可携带外源基因进行传代,具有良好的遗传稳定性。
关键词
猪水疱病
病毒
P1基因
重组逆转录病毒载体
PK-15细胞
基因表达
Keywords
SVDV P1 gene
retroviral vector
PK-15 cell
gene expression
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定
李素芳
魏锐利
金玲
《国际眼科杂志》
CAS
2006
1
在线阅读
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职称材料
2
稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立
田宏
吴锦艳
龚真莉
郑海学
孙世琪
尚佑军
刘湘涛
谢庆阁
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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