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盐穗木HcPS_H基因真核表达载体的构建及转化 被引量:1
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作者 郝晓燕 张毓露 +2 位作者 足木热木 刘小利 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2263-2268,共6页
【目的】盐穗木(Halostachys caspica)属藜科盐生植物,是广泛分布于新疆干旱或半干旱荒漠盐碱环境中的一种极端耐盐的多年生稀盐多汁半灌木,对盐分适应性极强。PS_H基因是一个参与光合反应光系统的基因,在植物光合作用中起着重要的作用... 【目的】盐穗木(Halostachys caspica)属藜科盐生植物,是广泛分布于新疆干旱或半干旱荒漠盐碱环境中的一种极端耐盐的多年生稀盐多汁半灌木,对盐分适应性极强。PS_H基因是一个参与光合反应光系统的基因,在植物光合作用中起着重要的作用。构建盐穗木HcPS_H基因真核表达载体对于了解该基因在盐穗木耐盐过程中的作用有着重要意义。【方法】利用PCR技术扩增得到大小为441 bp的盐穗木HcPS_H基因,经限制性内切酶SalI和NotI进行消化,将目的基因与真核表达质粒pREP-5N连接,获得重组真核表达质粒HcPS_H-5N。【结果】通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,重组真核表达质粒HcPS_H-5N构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电击转入酵母中,酵母菌落PCR结果显示电击转化成功。【结论】成功构建盐穗木HcPS_H基因真核表达载体,并且能在真核细胞中正常表达。 展开更多
关键词 盐穗木 HcPS_H基因 真核表达载体 重组质粒构建
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坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化
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作者 仪茜茜 杨锐 +2 位作者 刘伟 孙雪 赖晓娟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期89-92,97,共5页
坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,... 坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用。构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义。利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序。从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶SmaⅠ和NotⅠ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70。通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功。 展开更多
关键词 坛紫菜 HSP70基因 真核表达载体 重组质粒构建
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玉米ZmCPK12基因真核表达载体的构建及转化
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作者 张毓露 郝晓燕 +4 位作者 足木热木 刘小利 陈果 陈勋基 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1190-1196,共7页
[目的]CDPK是一类依赖于Ca^(2+)而不依赖CaM及磷脂的蛋白激酶,或类钙调素结构域的蛋白激酶,是植物和低等动物所特有。研究为玉米CDPK基因家族在抗逆中的作用提供基础。[方法]构建玉米ZmCPK12基因真核表达载体是了解玉米中该基因功能的... [目的]CDPK是一类依赖于Ca^(2+)而不依赖CaM及磷脂的蛋白激酶,或类钙调素结构域的蛋白激酶,是植物和低等动物所特有。研究为玉米CDPK基因家族在抗逆中的作用提供基础。[方法]构建玉米ZmCPK12基因真核表达载体是了解玉米中该基因功能的重要途径之一。实验利用RT-PCR技术扩增得到大小为1 533 bp的玉米ZmCPK12基因,经限制性内切酶SdI和NotI进行消化,将目的基因与真核表达质粒pREP-5N连接,获得重组真核表达质粒ZmCPK12-5N。[结果]通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,重组真核表达质粒ZmCPK12-5N构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电击转入酵母中,酵母菌落PCR结果显示电击转化成功。[结论]成功构建了玉米ZmCPK12基因真核表达载体,并且成功转化了酵母。 展开更多
关键词 玉米 基因 真核表达载体 重组质粒构建
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玉米ZmPsaH基因真核表达载体的构建及转化
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作者 刘小利 郝晓燕 +4 位作者 陈勋基 陈果 足木热木 邵琳 黄全生 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1192-1198,共7页
【目的】PsaH是光合系统Ⅰ(PSI)中的一个亚基,在植物光合系统中起着重要的作用。为研究玉米ZmPsaH基因在抗逆中的作用提供基础。【方法】构建玉米ZmPsaH基因真核表达载体是了解玉米中该基因功能的重要途径之一。利用RT-PCR技术扩增得到... 【目的】PsaH是光合系统Ⅰ(PSI)中的一个亚基,在植物光合系统中起着重要的作用。为研究玉米ZmPsaH基因在抗逆中的作用提供基础。【方法】构建玉米ZmPsaH基因真核表达载体是了解玉米中该基因功能的重要途径之一。利用RT-PCR技术扩增得到大小约为420 bp的玉米ZmPsaH基因,经限制性内切酶SalI和NotI进行消化,将目的基因与真核表达质粒pREP-5N连接,获得重组真核表达质粒ZmPsaH-5N。【结果】通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,重组真核表达质粒ZmPsaH-5N构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电击转入酵母中,酵母菌落PCR结果显示电击转化成功。【结论】成功构建了玉米ZmPsaH基因真核表达载体,并且成功转化了酵母。 展开更多
关键词 玉米 ZmPsaH 真核表达载体 重组质粒构建
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鸡Elovl2基因组织表达谱及脂代谢功能研究 被引量:1
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作者 徐钰芳 孙洁 +3 位作者 韩琪 郁建锋 徐璐 顾志良 《中国家禽》 北大核心 2022年第3期9-16,共8页
为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢... 为探究Elovl2基因在鸡体内的生物学功能,对鸡ELOVL2蛋白的理化性质进行分析,通过RT-qPCR技术检测该基因在鸡各组织中的表达情况。将Elovl2基因过表达重组质粒与最佳干扰片段分别转染鸡LMH细胞系,通过RT-qPCR技术检测Elovl2基因及脂代谢相关基因mRNA水平的变化,利用GC-MS技术检测细胞内相关脂肪酸含量的变化。结果显示:鸡ELOVL2蛋白属于稳定蛋白,该基因mRNA主要表达于脑和肝脏组织。转染pcDNA3.1-Elovl2后,基因相对表达水平显著上升,过表达重组质粒构建成功。三组siRNA均显著抑制Elovl2基因表达,抑制效果最佳的为siRNA-681。抑制Elovl2基因表达后,pck1基因的表达量较对照组相比上升2倍,但二者差异不显著。过表达Elovl2基因后,各种脂肪酸含量均有所增加,而经RNAi技术抑制Elovl2基因表达后,各种脂肪酸则有不同程度减少,受其影响最明显的为C22∶1N9。试验结果为进一步研究鸡Elovl2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Elovl2基因 过表达重组质粒构建 RNAI技术 RT-QPCR
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结核分枝杆菌分泌蛋白MPT51在原核表达载体中的克隆、表达、纯化与鉴定
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作者 王晓闻 蔡宏 朱玉贤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1031-1034,共4页
目的对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT51的基因进行克隆,表达,纯化与鉴定,为核酸疫苗的研制与应用打下基础。方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对编码MPT51蛋白的抗原基因进行扩增,产物克隆到表达载体pET22b中,构建了含mpt5... 目的对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT51的基因进行克隆,表达,纯化与鉴定,为核酸疫苗的研制与应用打下基础。方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对编码MPT51蛋白的抗原基因进行扩增,产物克隆到表达载体pET22b中,构建了含mpt51的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coliXLI-Blue内提取质粒,酶切及测序鉴定,再转化入E.coliBL21(DE3)PLysS菌株内,以IPTG进行诱导后,破菌,离心,包涵体经尿素变性溶解后用His·Bind亲和层析柱纯化,透析复性,纯化后蛋白进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行特异性免疫检测。结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有蛋白表达,所表达的蛋白质相对分子质量为27800,抗体检测有特异条带,大小为27.8kDa。结论目的基因克隆到了表达载体内并证明表达,重组结核杆菌分泌蛋白MPT51的成功表达为核酸疫苗的研制与应用和免疫效应检测以及上述抗原、抗体的大规模制备打下基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分泌蛋白 重组质粒构建 表达与鉴定
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