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题名华支睾吸虫成虫RPEF基因的克隆和表达
被引量：2
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作者
张咏莉
余新炳
吴德
吴忠道
毕惠祥
陈明志
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机构
中山大学基础医学院寄生虫教研室
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出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第12期1052-1057,共6页
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基金
广东省自然科学基金团队项目 (No .2 0 0 0 3 0 2 6)
"2 11"重点学科基金 (No .98169)资助
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文摘
目的 构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子 (RPEF)基因重组质粒 ,分析其编码序列 ,并进行大肠杆菌原核重组表达和免疫鉴定。方法 根据RPEF基因已知序列设计一对引物 ,用常规PCR技术从华支睾吸虫质粒文库模板中扩增RPEF基因片段 ;将目的基因PCR产物和空质粒 pGEX 4T 1同时用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶双酶切 ,纯化回收后建立连接反应并转化大肠杆菌BL2 1。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 RPEF双酶切、PCR、测序鉴定正确后在BL2 1中诱导表达 ,SDS PAGE电泳和Western blot方法鉴定其原核表达效果。结果 成功构建出RPEF基因原核重组质粒 pGEX 4T 1 RPEF。SDS PAGE分析显示RPEF基因在大肠杆菌BL2 1系统中得以高效表达 ,其融合蛋白分子量大约 4 5kD ,与理论值相符。Western blot的结果显示此RPEF融合蛋白可被山羊GST单抗所识别 ,融合蛋白具有GST免疫反应性。结论 筛选到华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子 (RPEF)基因 ,并成功构建原核表达载体及在E .coliBL2 1系统中高效表达。
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关键词
华支睾吸虫
RPEF基因
重组质粒克隆
原核表达
免疫印迹
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Keywords
Clonorchis sinensis
RNA polymerase Ⅱ elongation factor
recombinant plasmid
prokaryotic expression
Western blot
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分类号
R383.2
[医药卫生—医学寄生虫学]
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