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pGEX-4T-1-cMC4R原核表达载体的构建与表达
被引量：
2
1
作者
巴彩凤
聂茹
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第23期9921-9924,共4页
[目的]构建犬MC4R基因编码区的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。[方法]以Beagle犬基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的片段,利用LP Recco PCR克隆技术将目的片段直接重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coliDH5α,筛选...
[目的]构建犬MC4R基因编码区的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。[方法]以Beagle犬基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的片段,利用LP Recco PCR克隆技术将目的片段直接重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coliDH5α,筛选阳性克隆,BamHI、XhoI酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R转化到E.co-liBL21内,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测犬MC4R蛋白的表达。[结果]成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R,经DNA测序证实插入序列与设计基本一致,只有777位碱基T变成了C,这是由于犬MC4R编码区存在的多态性引起,对表达的犬MC4R蛋白序列无影响。大肠杆菌诱导后表达出犬MC4R融合性蛋白。[结论]成功构建犬MC4R原核表达载体,此重组体能在E.coliBL21内表达犬MC4R融合蛋白,为进一步获取犬MC4R的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究犬MC4R蛋白的结构和生理功能提供帮助。
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关键词
犬MCAR
LP
Recco
PCR克隆技术
重组表达质粒pgex-4t-1-cmcar
诱导
表达
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职称材料
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
被引量：
3
2
作者
韩旭
于潜
+4 位作者
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期678-681,共4页
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p G...
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p GEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用。结果 GST-ABCE1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×10~3,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合。结论肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中。
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关键词
ATP结合盒转运子E
1
pgex-
4
t-
1原核
表达
载体
重组
蛋白
表达
蛋白质相互作用结构域
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职称材料
题名
pGEX-4T-1-cMC4R原核表达载体的构建与表达
被引量：
2
1
作者
巴彩凤
聂茹
机构
辽宁医学院实验动物中心
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008年第23期9921-9924,共4页
基金
辽宁省教育厅基金(202172052)
文摘
[目的]构建犬MC4R基因编码区的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。[方法]以Beagle犬基因组DNA为模板,经PCR技术扩增目的片段,利用LP Recco PCR克隆技术将目的片段直接重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化到E.coliDH5α,筛选阳性克隆,BamHI、XhoI酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R转化到E.co-liBL21内,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测犬MC4R蛋白的表达。[结果]成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-cMC4R,经DNA测序证实插入序列与设计基本一致,只有777位碱基T变成了C,这是由于犬MC4R编码区存在的多态性引起,对表达的犬MC4R蛋白序列无影响。大肠杆菌诱导后表达出犬MC4R融合性蛋白。[结论]成功构建犬MC4R原核表达载体,此重组体能在E.coliBL21内表达犬MC4R融合蛋白,为进一步获取犬MC4R的单克隆抗体奠定物质基础,也为研究犬MC4R蛋白的结构和生理功能提供帮助。
关键词
犬MCAR
LP
Recco
PCR克隆技术
重组表达质粒pgex-4t-1-cmcar
诱导
表达
Keywords
Canis MC
4
R
LP Recco PCR cloning technique
Recombinant
pgex-
4
t-
1 -cMC
4
R
Induction and expression
分类号
S829.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
被引量：
3
2
作者
韩旭
于潜
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
机构
中国医科大学附属第四医院胸外科
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期678-681,共4页
基金
国家自然科学基金(30973502
30170914)
辽宁省教育厅科学研究一般项目(L2013302)
文摘
目的明确肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域。方法通过转化技术,在E.coli BL21(DE3)中诱导表达前期研究获得的表达载体pGEX-4T-1-ABCE1-55,获得GST-ABCE1-55重组融合蛋白表达,应用GST pull-down的方法验证p GEX-4T-1-ABCE1-55与β-肌动蛋白有无相互作用。结果 GST-ABCE1-55是带有GST标签的含有357个氨基酸的重组蛋白,大小约66×10~3,在GST pull-down实验中,GST-ABCE1-55并不能与β-肌动蛋白特异结合。结论肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域应位于ABCE1蛋白第358位至第600位编码氨基酸中。
关键词
ATP结合盒转运子E
1
pgex-
4
t-
1原核
表达
载体
重组
蛋白
表达
蛋白质相互作用结构域
Keywords
ATP-binding cassette E
1
prokaryotic expression vector
pgex-
4
t-
1-ABCE1
recombinant protein expression
interacting domain
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pGEX-4T-1-cMC4R原核表达载体的构建与表达
巴彩凤
聂茹
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2008
2
在线阅读
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职称材料
2
肺癌转移相关基因ABCE1编码蛋白与β-肌动蛋白的相互作用结构域研究
韩旭
于潜
田野
赵希彤
张磊
周镝
田大力
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
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