期刊文献+
共找到40篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究 被引量:7
1
作者 李鹏 罗德炎 +3 位作者 高永辉 张松乐 宋艳 王希良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期493-497,共5页
目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射... 目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 布氏杆菌BCSP31 重组表达质粒 免疫应答 免疫保护
在线阅读 下载PDF
猪γ-干扰素基因真核重组表达质粒的构建 被引量:7
2
作者 任慧英 郭鑫 +2 位作者 杨汉春 陈艳红 查振林 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第3期5-7,共3页
用 RT- PCR方法从长白猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪 γ-干扰素 (IFN- γ)基因 ,经克隆测序表明与已发表序列同源性为10 0 %。将目的基因插入表达载体 pc DNA3.1(+) ,构建出真核重组表达载体 IFN-γ- pc DNA。将重组质粒转染 COS7细胞 ,检... 用 RT- PCR方法从长白猪脾脏淋巴细胞中扩增出猪 γ-干扰素 (IFN- γ)基因 ,经克隆测序表明与已发表序列同源性为10 0 %。将目的基因插入表达载体 pc DNA3.1(+) ,构建出真核重组表达载体 IFN-γ- pc DNA。将重组质粒转染 COS7细胞 ,检测转染细胞培养上清 IFN- γ活性 ,结果表明转染上清对猪繁殖与呼吸综合征病毒有抑制作用。 展开更多
关键词 IFN-γ γ-干扰素 目的基因 转染 真核 重组表达质粒 培养上清 COS7细胞 表达载体 序列同源性
在线阅读 下载PDF
猪干扰素-γ哺乳动物细胞重组表达质粒作为疫苗佐剂在小鼠体内的组织分布及环境安全性研究 被引量:3
3
作者 蒙学莲 景志忠 +5 位作者 房永祥 窦永喜 陈国华 贾怀杰 段凤云 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期289-294,共6页
重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌... 重组表达质粒作为免疫佐剂从实验室走向临床必须解决其对机体和生物环境释放的安全性问题。本研究以pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒作为免疫佐剂进行试验,探讨了其在小鼠体内组织的分布和生物安全性。将pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒经肌肉途径免疫小鼠,免疫后不同时间迫杀,并取各种组织抽提基因组DNA:一是利用PCR技术检测其在组织内的分布及与细胞基因组发生整合的可能性;二是以PCR技术检测免疫动物现场环境样品,监测pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒中的猪IFN-γ基因、CMV启动子基因和抗性基因是否转移和扩散到环境细菌中。结果表明,免疫24h后在小鼠的各组织中仅注射部位肌肉存在重组表达质粒,免疫5d后仅有1只小鼠注射部位肌肉和血液中存在重组表达质粒,免疫15d后所有动物的各组织中无重组表达质粒存在;同时未发现pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒整合到宿主细胞基因组和转化到环境其他细菌中。因此,认为pcDNA3.1/IFN-γ重组表达质粒对动物和环境是安全的。 展开更多
关键词 重组表达质粒 生物安全性 组织分布 基因组整合 转移和扩散
在线阅读 下载PDF
带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物重组表达质粒pBI-GFP的构建 被引量:3
4
作者 范文韬 刘德立 +1 位作者 孙晓洁 杨成丽 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期213-215,共3页
利用 DNA重组技术 ,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因 ( gfp)克隆到植物表达载体p BI-1 2 1中 ,成功地构建了植物重组表达质粒 p BI-GFP.
关键词 绿色荧光蛋白基因 植物重组表达质粒 pBI-GFP
在线阅读 下载PDF
旋毛虫ES抗原结构基因TSPG Ⅱ 重组表达质粒构建 被引量:1
5
作者 袁慧君 阎玉河 +1 位作者 张改平 李健强 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第4期67-70,共4页
用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ,从克隆载体pUTSⅡ中切出一个0.988kbTSPGⅡ基因,经EcoRI和BstXI酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收TSPGⅡ基因和pSV... 用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ,从克隆载体pUTSⅡ中切出一个0.988kbTSPGⅡ基因,经EcoRI和BstXI酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收TSPGⅡ基因和pSV·SPORTⅠ表达载体,用T4DNA连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经EcoRⅠ,BstXⅠ和HindⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒pSV·TSⅡ. 展开更多
关键词 旋毛虫 ES抗原 结构基因 重组表达质粒
在线阅读 下载PDF
小RNA重组表达质粒转入猪体内环境释放安全性研究概况 被引量:1
6
作者 寇建平 孙亚妮 +1 位作者 赵钦 周恩民 《动物医学进展》 北大核心 2015年第12期161-164,共4页
人工小RNA(MicroRNA,miRNA)是根据内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,可以模拟内源miRNA的作用方式与靶mRNA碱基互配指导靶mRNA的降解或抑制其翻译,从而对基因表达进行转录后负调控。将人工miRNA转入动物体内调控目的基因表达,已在转... 人工小RNA(MicroRNA,miRNA)是根据内源miRNA的生成途径人工合成的miRNA,可以模拟内源miRNA的作用方式与靶mRNA碱基互配指导靶mRNA的降解或抑制其翻译,从而对基因表达进行转录后负调控。将人工miRNA转入动物体内调控目的基因表达,已在转基因动物抗病育种方面得到广泛的研究,与此同时其环境释放导致的生物安全性问题也成为国际关注的重要问题。论文综述了以RNA干扰为基础的转人工miRNA抗猪蓝耳病猪在动物逃逸、环境释放以及与转入基因与宿主基因整合等方面对环境生物安全的影响,以期为猪蓝耳病NMHCⅡ-A转基因猪的进一步研究提供生物安全保障。 展开更多
关键词 重组表达质粒 基因水平转移 基因组整合 人工miRNA
在线阅读 下载PDF
Ghrelin重组质粒的表达及其对大鼠生长性能和胃重的影响 被引量:1
7
作者 杜改梅 晏文梅 +4 位作者 蒋加进 韩正强 胡志华 罗碧平 张传奇 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期131-135,共5页
旨在研究Ghrelin重组表达质粒对大鼠生长性能和胃重的影响。从断奶仔猪胃底黏膜中扩增得到了Ghrelin,将其克隆到pcDNA3表达载体中,获得了重组质粒pcDNA3-Ghrelin。选取12只断乳大鼠随机分成2组,每组6只。试验组每只大鼠腿肌注射100μg... 旨在研究Ghrelin重组表达质粒对大鼠生长性能和胃重的影响。从断奶仔猪胃底黏膜中扩增得到了Ghrelin,将其克隆到pcDNA3表达载体中,获得了重组质粒pcDNA3-Ghrelin。选取12只断乳大鼠随机分成2组,每组6只。试验组每只大鼠腿肌注射100μg重组质粒pcDNA3-Ghrelin,对照组注射空质粒。分别在注射后7 d、14 d和29 d称重、记录采食量。试验结束后处死,分离并称量胃重,测定胃液pH值。结果显示:与对照组相比,注射重组质粒大鼠在注射后7 d和29 d时日增重显著增高;采食量无显著差异;料肉比显著降低;胃重和相对质量无显著差异;胃液pH值显著降低。以上结果表明,Ghrelin通过肌肉组织转染表达后对大鼠的生长发育具有重要的调节作用。 展开更多
关键词 Ghrelin重组表达质粒 大鼠 生长性能 胃重
在线阅读 下载PDF
猪囊尾蚴AgB重组质粒在免疫小鼠体内的表达及其抗体水平检测
8
作者 巩伟 侯俊玲 +3 位作者 骆学农 张少华 郭爱疆 才学鹏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期488-490,共3页
为评价猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)真核表达重组质粒作为候选DNA疫苗的免疫效果,本研究将猪囊尾蚴AgB基因亚克隆于真核表达载体pVAX1中构建了重组表达质粒pVAX1-AgB;将pVAX1-AgB与ISA206佐剂按1:1体积比乳化,以每只100μg的剂量,肌肉注免疫... 为评价猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)真核表达重组质粒作为候选DNA疫苗的免疫效果,本研究将猪囊尾蚴AgB基因亚克隆于真核表达载体pVAX1中构建了重组表达质粒pVAX1-AgB;将pVAX1-AgB与ISA206佐剂按1:1体积比乳化,以每只100μg的剂量,肌肉注免疫5周龄左右的BALB/c小鼠,3周后加强免疫。同时,通过原核表达制备重组AgB蛋白作为ELISA检测抗原,通过间接ELISA方法检测免疫小鼠的抗体水平。结果显示,在小鼠免疫后2周即可检测到抗AgB抗体,6周达到峰值,并维持在较高水平,持续达8个月;实验组血清抗体水平明显高于对照组(p<0.01)。本研究为pVAX1-AgB作为候选DNA疫苗提供了实验依据。 展开更多
关键词 重组表达质粒 PVAX1 免疫
在线阅读 下载PDF
真核表达NDV F基因重组质粒的构建及其在CEF细胞中的转染
9
作者 刘兆球 姜世金 常维山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期444-446,共3页
通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将... 通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞 ,用间接免疫荧光试验检测 ,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。 展开更多
关键词 真核重组表达质粒 新城疫病毒F基因 转染
在线阅读 下载PDF
弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建 被引量:10
10
作者 吴昆 陈晓光 +1 位作者 李华 支国舟 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第7期620-623,共4页
目的 构建弓形虫棒状体蛋白2(POP2)基因真核表达重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构... 目的 构建弓形虫棒状体蛋白2(POP2)基因真核表达重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR I、Not I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果 ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论 在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP2基因 体外扩增 真核表达重组质粒 DNA疫苗
在线阅读 下载PDF
重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE的构建和表达 被引量:1
11
作者 焦志勇 陈旻湖 +3 位作者 李国庆 朱森林 陈为 胡品津 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期34-36,67,共4页
目的 构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。 方法 用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,... 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位 (ureB)基因与大肠杆菌K - 12株hlyE基因融合表达的原核表达质粒 pTrc99A -hlyE 并表达。 方法 用PCR扩增hlyE基因 ,经酶切连接反应将其克隆入重组原核表达质粒并测序 ,与GenBank中的核酸和蛋白序列进行BLAST分析 ,重组的阳性克隆经IPTG诱导培养 ,SDS -PAGE电泳进行表达分析 ,薄层扫描分析融合蛋白的含量。结果 对重组质粒进行酶切和PCR检测 ,证明构建了携带hlyE及ureB基因的重组原核表达质粒 pTrc99A -ureB/hlyE ,核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pTrc99A -ureB/hlyE中所含的Hp -ureB及hlyE与GeneBank中的Hp -ureB和hlyE序列的同源性分别为 97 4 2 % (16 6 3/ 170 7)、99% (910 / 918)。重组细菌JM10 9可表达约 10 0kD的融合蛋白ureB/hlyE ,含量占全菌体蛋白含量的 15 5 %。 结论 构建并鉴定了原核表达质粒pTrc99A -hlyE并高效表达 。 展开更多
关键词 重组原核表达质粒 pTrc99A-ureB/hlyE 尿素酶B亚单位 幽门螺杆菌
在线阅读 下载PDF
重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk的构建及在细胞内的热诱导表达 被引量:1
12
作者 唐秋莎 陈道桢 张东生 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1132-1137,共6页
目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆... 目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α,克隆PCR法筛选菌落,测序鉴定后大量抽提质粒。磁性转染法将pHT导入SMMC-7721,加热处理后,用RT-PCR法检测tk基因的整合。结果:获得重组的hsv-tk基因条带。结论:成功构建了pHT质粒,可用于进行靶向性基因治疗研究。 展开更多
关键词 真核表达 pHsp70-hsv-tk 构建 热诱导表达 重组真核表达质粒
在线阅读 下载PDF
恶性疟原虫海南株CTP基因测序重组质粒及真核表达重组质粒的构建
13
作者 陈慧红 余新炳 +1 位作者 吴忠道 徐劲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期22-24,共3页
目的 构建恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 ,以便进一步研究CTP基因的结构与功能。方法 根据已发表恶性疟原虫CTP基因的序列〔1〕,设计并合成一对引物。将扩增的CTP基因的PCR产物连接于测序载体pUC19上 ,经测序反... 目的 构建恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 ,以便进一步研究CTP基因的结构与功能。方法 根据已发表恶性疟原虫CTP基因的序列〔1〕,设计并合成一对引物。将扩增的CTP基因的PCR产物连接于测序载体pUC19上 ,经测序反应确定无误。用HindⅢ和BamHⅠ双酶切将CTP基因从测序载体中切下 ,构建于真核表达载体pcDNA3上。 结果 构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒 ,并对其进行了测序。并将恶性疟原虫的CTP基因从测序重组质粒中切下 ,克隆进真核表达重组质粒 pcDNA3。 结论 成功地构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 聚合酶链式反应 基因克隆 基因测序 CTP基因 真核表达重组质粒 疟疾
在线阅读 下载PDF
哈维氏弧菌FlaA基因的克隆、序列分析及真核表达质粒的构建 被引量:3
14
作者 庄轩 覃映雪 +2 位作者 苏永全 王军 丁少雄 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期74-79,共6页
哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌.参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序列设计简并引物,PCR扩增哈维氏弧菌TS-628株的FlaA全基因,并克隆到pMD 18-T载体中测序,经序列分析该基因全长1 140 bp,编码379个氨基酸.与基因库中其他... 哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌.参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序列设计简并引物,PCR扩增哈维氏弧菌TS-628株的FlaA全基因,并克隆到pMD 18-T载体中测序,经序列分析该基因全长1 140 bp,编码379个氨基酸.与基因库中其他弧菌的同源基因序列比较显示,哈氏弧菌FlaA基因与霍乱弧菌FlaA基因的同源性最高(79.5%),该基因编码的多肽缺乏半胱氨酸,并在N-,C-两端的氨基酸序列较为保守,中间区域的变异较大.对该蛋白的氨基酸组成及空间结构进行了分析和预测,并推测该蛋白质的平均分子量为40.6 kDa.在该基因末端加上一段编码Flag短肽的核苷酸序列后克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),获得带哈氏弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因的真核表达重组质粒pcDNA-FlaA-tag,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 FlaA基因 基因克隆 序列分析 真核表达重组质粒
在线阅读 下载PDF
βhCG-CTP/pcDNA3重组真核表达载体的构建及表达
15
作者 张力 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期24-27,共4页
目的 克隆并表达 βhCG CTP基因片端 ,探讨采用 βhCG CTP基因片段免疫小鼠进行免疫避孕的可能性。 方法 采用化学合成法得到含有 βhCG CTP基因片段 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA3中 ,然后转化大肠杆菌DH5α ,利用脂质体介导将pcDNA3 ... 目的 克隆并表达 βhCG CTP基因片端 ,探讨采用 βhCG CTP基因片段免疫小鼠进行免疫避孕的可能性。 方法 采用化学合成法得到含有 βhCG CTP基因片段 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA3中 ,然后转化大肠杆菌DH5α ,利用脂质体介导将pcDNA3 /βhCG CTP重组质粒表达载体转染到COS 7细胞 ,免疫组化法检测 βhCG CTP基因在哺乳动物细胞中的表达情况。结果 重组质粒经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切和测序证实插入序列与预期设计完全一致 ;利用脂质体介导将pcDNA3 /βhCG CTP重组质粒表达载体导入COS 7细胞 ,获得了 βhCG CTP的瞬时表达。 结论 成功构建了 βhCG CTP真核表达载体pcDNA3 /βhCG CTP ,该载体能在哺乳动物细胞中正确表达 ,表达产物 βhCG CTP能够被抗 βhCG抗体所识别。 展开更多
关键词 人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端37肽 重组真核表达质粒
在线阅读 下载PDF
鸡柔嫩艾美耳球虫ZJ株5401基因在大肠杆菌中的表达 被引量:6
16
作者 杜爱芳 王素华 索勋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期187-190,共4页
根据E.tenella子孢子表面抗原5401基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上 EcoRⅠ和 SalⅠ酶切位点及保护碱基,用RT PCR方法从E.tenella孢子化卵囊扩增出881 bp的片段。将重组克隆质粒pGEM- T -5401用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,电泳... 根据E.tenella子孢子表面抗原5401基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上 EcoRⅠ和 SalⅠ酶切位点及保护碱基,用RT PCR方法从E.tenella孢子化卵囊扩增出881 bp的片段。将重组克隆质粒pGEM- T -5401用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后,电泳回收目的片段,克隆到同样经 EcoRⅠ和 SalⅠ双酶切的表达载体 pET -30a中,得到重组表达质粒pET- 30a 5401,把重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出了His- 5401融合蛋白。Western印迹结果表明表达产物为大约66.2 ku的蛋白。 展开更多
关键词 重组表达质粒 大肠杆菌 基因 表面抗原 WESTERN印迹 RT-PCR方法 克隆 柔嫩艾美耳球虫 酶切 卵囊
在线阅读 下载PDF
大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达 被引量:6
17
作者 任雪艳 陈创夫 +2 位作者 孔庆军 高剑锋 祝建波 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第1期64-67,共4页
利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中,成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105,利用农杆菌介导法转化烟草,并初步获得转化体... 利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中,成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105,利用农杆菌介导法转化烟草,并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 菌毛抗原K88 大肠杆菌肠毒素 植物重组表达质粒 基因克隆
在线阅读 下载PDF
短发夹RNA抑制肝癌细胞HepG_2 COX-2基因表达的探讨 被引量:3
18
作者 杨义明 刘预 +2 位作者 涂植光 陈亚芹 刘靳波 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期566-569,共4页
目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响。方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2... 目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响。方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2基因的短发夹RNA(short hairpin RNA shRNA)的重组表达质粒pshRNA-COX-2,用脂质体LipofectamineTM2000转染肝癌细胞HepG2,经RT-PCR和Westernblot分别检测pshRNA-COX-2重组表达质粒对COX-2mRNA和蛋白抑制效应,流式细胞仪检测细胞周期、细胞计数检测细胞生长变化。结果:pshRNA-COX-2重组表达质粒能够抑制COX-2基因表达。与未转染肝癌细胞HepG2相比,pshRNA-COX-2重组表达质粒转染肝癌细胞后,COX-2mRNA和蛋白表达明显降低,抑制率分别为69.9%和50.3%;G0-G1期细胞由55.4%上升为77.9%,S期细胞由31.1%下降为16.2%;细胞生长明显减慢。结论:构建的pshRNA-COX-2重组表达载体能够显著抑制COX-2基因表达;引起G0-G1期细胞增多,S期细胞减少,从而阻止肝癌细胞生长。 展开更多
关键词 短发夹RNA 环氧化酶-2 重组表达质粒 细胞周期
在线阅读 下载PDF
人resistin基因原核表达载体构建和表达 被引量:2
19
作者 何祥梁 何东华 +3 位作者 黎锋 杨川 程桦 傅祖植 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期413-416,共4页
【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆... 【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒。重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1mmol/LIPTG在32℃诱导表达2h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达。【结果】RT-PCR扩增产物分子大小为327bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区。PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段。重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础。 展开更多
关键词 原核表达载体 重组表达质粒 融合蛋白 细菌 编码区 腹壁 核酸内切酶 酶切 T载体 PCR产物
在线阅读 下载PDF
马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达 被引量:6
20
作者 苏良科 陆承平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期633-636,共4页
目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 目的 构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。 方法 根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83~ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果 扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论 成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 类M基因 克隆 表达 重组表达质粒 免疫反应性
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部