重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究 被引量：1

1

作者 吕锐 于红 阎博民 《医学研究生学报》 CAS 2008年第12期1242-1245,I0011,共5页

目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用。方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果。结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359μg/ml),对CVB... 目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用。方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果。结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用。结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物。 展开更多

关键词 重组蓝藻抗病毒蛋白n 柯萨奇病毒 抗病毒作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性 被引量：8

2

作者 吕锐 于红 +2 位作者 刘宗涛 庞峰 张文卿 《医学研究生学报》 CAS 2007年第11期1139-1142,共4页

目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序... 目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝藻抗病毒蛋白n 基因 原核表达 蛋白纯化 复性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组N蛋白间接ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 被引量：12

3

作者 刘平黄 杨汉春 +3 位作者 高云 郭鑫 郑洁 陈艳红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第4期10-13,共4页

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组 N蛋白作为包被抗原 ,建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接EL ISA方法 ,并确定了 EL ISA最佳工作条件 :抗原包被浓度为 0 .2 7μg/ m l,37℃ 1h加 4℃过夜 ,血清 (1∶ 4 0 )和酶标兔抗猪Ig ... 用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组 N蛋白作为包被抗原 ,建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接EL ISA方法 ,并确定了 EL ISA最佳工作条件 :抗原包被浓度为 0 .2 7μg/ m l,37℃ 1h加 4℃过夜 ,血清 (1∶ 4 0 )和酶标兔抗猪Ig G(1∶ 4 0 0 )分别在 37℃温育 30 m in,底物溶液 37℃显色 15 min。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高 ;与美国 IDEXX试剂盒相比较 ,特异性和敏感性分别为 97.6 %和 92 .1% ,无显著性差异。用已建立的方法检测临床血清样本 187份 ,总阳性率为 30 .5 %。 展开更多

关键词 重组n蛋白 ELISA检测 猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒构建及其免疫效果评估

4

作者 万志敏 李亚锋 +9 位作者 孙建文 姜文杰 赵喆泓 汤婷 谢泉 李拓凡 邵红霞 秦爱建 钱琨 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期25-33,共9页

为构建H7N9亚型禽流感病毒和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的二联疫苗候选株,试验通过CRISPR/Cas9和Cre-Loxp系统,以课题组前期构建的表达EGFP蛋白的重组病毒FAdV4-EGFP为载体,构建能够稳定表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的重组血清4... 为构建H7N9亚型禽流感病毒和血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的二联疫苗候选株,试验通过CRISPR/Cas9和Cre-Loxp系统,以课题组前期构建的表达EGFP蛋白的重组病毒FAdV4-EGFP为载体,构建能够稳定表达H7N9亚型禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的重组血清4型腺病毒;并通过PCR、间接免疫荧光试验(IFA)、Westernblot试验以及SPF鸡保护性试验等方法,探究此重组病毒体外生物学特性并评估其为鸡提供的保护力。结果显示:研究成功构建能稳定表达H7N9禽流感亚型病毒HA蛋白的重组血清4型腺病毒,命名为FAdV4-H7;FAdV4-H7能在LMH细胞高效复制,并能在LMH细胞传代15次后仍能稳定表达HA蛋白;FAdV4-H7不仅高度致弱,而且能诱导机体产生高滴度针对H7N9亚型禽流感病毒HI抗体和FAdV-4的中和抗体,能为SPF鸡提供足够保护来抵抗致死性FAdV-4感染。研究表明,试验成功构建了重组病毒FAdV4-H7,为H7N9亚型禽流感病毒和FAdV-4的联防联控提供了二联苗候选疫苗株。 展开更多

关键词 H7n9亚型禽流感病毒 HA蛋白 重组血清4型腺病毒 CRISPR/Cas9 疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 被引量：1

5

作者 黄小花 章军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1117-1121,共5页

目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构... 目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多

关键词 抗病毒蓝藻蛋白-n 克隆表达 酶联免疫吸附反应 WESTERn BLOT

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用重组N蛋白-ELISA检测广西猪群PRRS病毒抗体

6

作者 陈汉忠 栾桂龙 +4 位作者 李义平 陈威 杨慧 万能 蒙国盟 《西南农业学报》 CSCD 2004年第6期780-784,共5页

应用重组N蛋白-ELISA检测法,对从广西某些疑有PRRS的猪场采集的251头份血清进行了PRRS病毒抗体的检测,检出阳性血清117头份,阳性率为46 61%。检测结果说明:广西猪群PRRS病毒感染已较普遍,而且感染程度已较严重,应引起各猪场和相关管理... 应用重组N蛋白-ELISA检测法,对从广西某些疑有PRRS的猪场采集的251头份血清进行了PRRS病毒抗体的检测,检出阳性血清117头份,阳性率为46 61%。检测结果说明:广西猪群PRRS病毒感染已较普遍,而且感染程度已较严重,应引起各猪场和相关管理部门的高度重视;重组N蛋白-ELISA法具有操作简便,检测快速,重复性好等优点,适用于养猪企业和防疫管理部门对PRRS的检测和诊断。 展开更多

关键词 PRRS病毒 重组n蛋白 猪群 猪场 ELISA检测 感染程度 阳性血清 抗体 诊断 检出

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化 被引量：1

7

作者 杨辉 吴崇超 +5 位作者 陈佳 陈伟 杨依丽 罗勇 姚冬生 熊盛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期116-120,共5页

蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。... 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。 展开更多

关键词 蓝藻抗病毒蛋白-n 连接肽 发酵 纯化

在线阅读 下载PDF 职称材料

蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测 被引量：1

8

作者 陈佳 吕芬 +5 位作者 吴崇超 彭舟 魏博 杨辉 陈伟 熊盛 《安徽农业科学》 CAS 2013年第8期3323-3326,共4页

[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(... [目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。 展开更多

关键词 蓝藻抗病毒蛋白n 流感病毒 GP120

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量：19

9

作者 刘合义 孙留霞 +5 位作者 王进轶 刘双翼 王红 余丽芸 朴范泽 侯喜林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期618-622,共5页

为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白,western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性。以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75μg/mL,血清最佳稀释倍数为... 为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白,western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性。以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶8000,建立了检测BCV抗体的间接ELISA方法。用该法对黑龙江一些地区采集到的256份牛血清样品进行检测,结果阳性率为65.23%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达95.31%。本研究建立的间接ELISA方法为BCV的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 牛冠状病毒 重组n蛋白 间接ELISA 抗体检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 被引量：13

10

作者 姜骞 周洁 +6 位作者 刘家森 李慕瑶 司昌德 韩凌霞 孟庆文 陈洪岩 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期225-228,232,共5页

本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释... 本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2 000,作用时间为60 min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 重组n蛋白 间接ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪流行性腹泻病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量：6

11

作者 姜艳平 姜新鹏 +5 位作者 孙刘妹 赵广宇 崔文 唐丽杰 乔薪瑗 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期119-122,共4页

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性... 为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的重组N蛋白作为检测抗原,优化ELISA反应条件,建立了PEDV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对PEDV血清检测为阳性,对猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒感染猪的阳性血清检测结果均为阴性;其批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。采用建立的ELISA方法检测了130份临床样品,其中78份血清样品为PEDV抗体阳性。表明建立的以重组N蛋白为包被抗原检测PEDV血清抗体的方法可以用于检测PEDV感染及相关的流行病学调查。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 重组n蛋白 抗体检测 诊断方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究 被引量：8

12

作者 程俊贞 闫若潜 +9 位作者 吴志明 赵明军 闫志玲 刘梅芬 赵雪丽 孔刚锐 陈慧娟 杨晓璐 张书阳 刘毅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期140-145,共6页

为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV... 为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。 展开更多

关键词 重组鸡干扰素 白细胞介素 2融合蛋白 传染性法氏囊病病毒 抗病毒 免疫增强 作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达猪Viperin蛋白重组腺病毒的构建及其对PRRSV复制的抑制作用 被引量：4

13

作者 方剑玉 朱文豪 +6 位作者 郭小参 白献晓 李海利 徐引弟 郎利敏 王治方 王克领 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第9期126-131,共6页

为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RTPCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体p Ad Track-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测序。将PmeⅠ内切酶线性化的重组穿梭载体质粒(p Ad Track-s V... 为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RTPCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体p Ad Track-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测序。将PmeⅠ内切酶线性化的重组穿梭载体质粒(p Ad Track-s VIP)电转化大肠杆菌BJ5183,与腺病毒骨架载体p Ad Easy-1进行同源重组,提取重组后的腺病毒质粒,经内切酶PacⅠ线性化后转染HEK-293A细胞,装配成完整的病毒粒子r Ad-s VIP。重组腺病毒r Ad-s VIP感染细胞后,可见绿色荧光蛋白的表达。RT-PCR、Western blot检测结果表明,重组腺病毒r Ad-s VIP可正确表达猪Viperin蛋白,且表达的猪Viperin蛋白具有良好的反应原性,对PRRSV的复制具有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 猪Viperin蛋白 重组腺病毒 抗病毒活性 猪繁殖与呼吸综合征病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立 被引量：3

14

作者 顾昀 周晓丽 +5 位作者 袁秀芳 杜晓莉 徐丽华 李军星 方维焕 王一成 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期123-129,共7页

为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PB... 为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 重组n蛋白 ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法 被引量：3

15

作者 胡大利 冯宇 +6 位作者 张培因 冉波 卫红飞 邵明玉 王爱丽 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期345-348,共4页

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒(FMDV)感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白(VP1epi)作为包被抗原,采用间... 目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒(FMDV)感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白(VP1epi)作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 抗口蹄疫病毒抗体 VP1表位重组蛋白 间接ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

利用IBV重组N蛋白建立ELISA抗体检测试剂盒的研究 被引量：9

16

作者 王宏俊 陈福勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第9期3-6,共4页

利用表达鸡传染性支气管炎病毒 Gray株 N蛋白的基因工程重组菌 ,表达 IBV - N蛋白 ,并利用表达载体上带有组氨酸标记的特点 ,应用金属螯合填料将其纯化。用纯化的 IBV- N蛋白作为包被抗原 ,成功地建立了一种检测血清中 IBV抗体的间接 EL... 利用表达鸡传染性支气管炎病毒 Gray株 N蛋白的基因工程重组菌 ,表达 IBV - N蛋白 ,并利用表达载体上带有组氨酸标记的特点 ,应用金属螯合填料将其纯化。用纯化的 IBV- N蛋白作为包被抗原 ,成功地建立了一种检测血清中 IBV抗体的间接 EL ISA方法。确定抗原最佳包被浓度为 0 .5 8μg/ ml;被检血清的最佳稀释度为 1∶ 10 0 ;酶标二抗的工作浓度为 1∶ 10 0 0。确定了血清样品阴、阳性临界 OD值为 0 .14。与 IDEXX公司 IBV抗体检测试剂盒比较 ,结果表明自建 EL 展开更多

关键词 IBV重组 n蛋白 ELISA抗体 检测试剂盒 鸡 传染性支气管炎病毒 Gray株

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组N蛋白抗原检测PPRV抗体ELISA的研究——试剂盒阴阳性临界值的测定及其与OIE参考实验室试剂盒的比较 被引量：1

17

作者 陆则基 吴晓东 +2 位作者 王姣 刘春菊 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2010年第3期39-40,共2页

对临床上采集的244份不同背景的羊血清样本,用纯化的重组N蛋白为包被抗原建立的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的间接ELISA进行检测,运用统计学方法摸清了检测结果的分布规律,并同时用OIE参考实验室抗体检测试剂盒进行检测,结果表明,两... 对临床上采集的244份不同背景的羊血清样本,用纯化的重组N蛋白为包被抗原建立的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的间接ELISA进行检测,运用统计学方法摸清了检测结果的分布规律,并同时用OIE参考实验室抗体检测试剂盒进行检测,结果表明,两种检测方法的符合率为91.73%。利用TG-ROC软件分析了ELISA抗体检测临界值,该试剂盒与国外试剂盒相比,其相对特异性和敏感性分别为98.6%和85.4%。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 试剂盒 重组n蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的重组牛痘病毒表达 被引量：1

18

作者 谌资 郑煜煌 Yipu Lin 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第3期150-154,共5页

目的研究H5 I151F和H5 I151F＋A134V＋E186D两种氨基酸变异对血凝素蛋白（HA）亲人受体结合的影响，并获得该HA。方法构建载体pRB21’，共感染／转染vp37^-牛痘病毒vRB12和pRB21’，基因同源重组牛痘病毒表达HA，Western免疫印迹法鉴定... 目的研究H5 I151F和H5 I151F＋A134V＋E186D两种氨基酸变异对血凝素蛋白（HA）亲人受体结合的影响，并获得该HA。方法构建载体pRB21’，共感染／转染vp37^-牛痘病毒vRB12和pRB21’，基因同源重组牛痘病毒表达HA，Western免疫印迹法鉴定。结果获得了克隆有H5HA全长基因片段的载体pRB21’，构建了2种重组牛痘病毒re-VV H5 I151F和re-VV H5 I151F＋A134V＋E186D，且能在被感染细胞膜表达这两种HA。结论首次通过构建重组牛痘病毒成功表达了禽流感病毒H5N1的H5HA，为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5n1亚型 血凝素蛋白 重组牛痘病毒 传染病

在线阅读 下载PDF 职称材料

解表清里方干预甲型H1N1流行性感冒小鼠的抗病毒作用机制 被引量：2

19

作者 马一川 姚睿祺 +2 位作者 明雨 晁燕 张洪春 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第14期2091-2097,共7页

目的:探讨解表清里方对甲型H1N1流行性感冒小鼠的抗病毒作用机制。方法:用随机数字法将36只7周龄雌性BalB/c小鼠随机分为空白组、模型组、西药组及解表清里方高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组6只。空白组给予等量生理盐水滴鼻,其余组... 目的:探讨解表清里方对甲型H1N1流行性感冒小鼠的抗病毒作用机制。方法:用随机数字法将36只7周龄雌性BalB/c小鼠随机分为空白组、模型组、西药组及解表清里方高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组6只。空白组给予等量生理盐水滴鼻,其余组小鼠给予甲型流感病毒液于左侧鼻孔滴鼻,每只50μL。造模2 h后,西药组给予0.037 5 g/(kg·d)磷酸奥司他韦灌胃;解表清里方高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予6.05 g/(kg·d)、3.02 g/(kg·d)、1.51 g/(kg·d)解表清里方灌胃。空白组及模型组同时给予生理盐水0.2 mL灌胃,均1次/d,连续5 d。对比各组肺指数、胸腺指数和脾脏指数,肺组织病理变化,肺组织中乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达,肺悬液中病毒基因及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)mRNA表达,肺组织中PI3K、AKT、GSK-3β蛋白表达。结果:动物实验结果显示,与模型组相比,西药组和中药高剂量组能降低小鼠肺指数(P<0.05),其他组别能降低肺指数、升高胸腺指数和脾脏指数,但差异无统计学意义(P>0.05);解表清里方高、中剂量组能减轻小鼠肺部病变程度,西药组、解表清里方高、中剂量组能降低小鼠肺组织中M、NS2病毒基因复制水平(P<0.01或P<0.05);西药组和解表清里方高剂量组能降低小鼠肺组织中mTOR表达水平;西药组、解表清里方高剂量和中剂量组均能显著下调PI3K、AKT和GSK-3β蛋白和mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05)解表清里方低剂量组在各个方面与模型组相差不显著。结论:解表清里方甲型H1N1流感小鼠有抗病毒作用,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中关键蛋白PI3K、AKT、GSK-3β、mTOR表达有关。 展开更多

关键词 解表清里方 甲型H1n1流行性感冒 小鼠 抗病毒 雷帕霉素靶蛋白 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β信号通路 细胞自噬 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：3

20

作者 周洁 赵莉 +1 位作者 胡建华 高诚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期841-843,共3页

目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb... 目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系。并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定。结果:共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为κ型。经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应。结论:成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠肝炎病毒 重组n蛋白 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料