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重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用被引量：1: 1; 作者马东亮胡海涛 +3 位作者杨蓬勃靳辉任惠民刘勇《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期27-29,47,共4页; 目的　探讨重组腺伴随病毒载体表达人脑源性神经营养因子 (hBDNF)对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用。方法　用 β淀粉样肽 (Aβ2 5 3 5)注入大鼠Meynert核损伤胆碱能神经元。损伤后 8～ 10d行hBDNF重组腺伴随病毒脑内注射。经... 展开更多; 关键词重组腺伴随病毒载体 HBDNF 大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤保护作用人脑源性神经营养因子基因治疗; 在线阅读下载PDF 职称材料

人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建被引量：1: 2; 作者马巍刘淼 +1 位作者杨广笑王全颖《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期226-228,共3页; 目的　为了研究人神经生长因子 (hNGF)基因导入急性脊髓损伤 (SCI)模型的治疗作用 ,构建并产生重组腺伴随病毒 (AAV)载体。方法　将hNGF外源性核酸片段插入AAV shuffer质粒 pSSHG Neo的KpnⅠ BamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒 pFG1... 展开更多; 关键词 hNGF基因重组腺伴随病毒(rAAV) 基因转移; 在线阅读下载PDF 职称材料

通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究被引量：2: 3; 作者郑国玺韦俊荣 +5 位作者祝康侯瑾施典羽朱宏亮杨广笑王全颖《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期14-17,共4页; 目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸... 展开更多; 关键词重组腺伴随病毒载体报告基因基因治疗 NIH3T3; 在线阅读下载PDF 职称材料

腺伴随病毒介导的脑源性神经营养因子对耳蜗损伤保护作用的体外研究被引量：2: 4; 作者郑国玺祝康 +2 位作者韦俊荣杨广笑王全颖《实用医学杂志》 CAS 2008年第21期3640-3642,共3页; 目的:将携载脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的重组腺伴随病毒rAAV-BDNF转染体外培养的耳蜗组织,并观察该重组病毒对耳蜗损伤的保护作用。方法:体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞;应用新霉素建立体外耳... 展开更多; 关键词耳蜗疾病重组腺伴随病毒脑源性神经营养因子耳蜗毛细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

腺伴随病毒介导的神经营养素4基因对视网膜神经节细胞的转染被引量：2: 5; 作者李海燕赵家良张华《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第7期533-536,共4页; 目的应用重组腺伴随病毒载体介导的神经营养素4(rAAV-NT4)基因转染鼠视网膜神经节细胞(RGCs),探讨转染后对细胞生长活性和凋亡的影响。方法应用rAAV-NT4转染培养的RGCs,RT-PCR检测外源性NT4基因在RGCs中的表达,ELISA法检测细胞培养液中... 展开更多; 关键词重组腺伴随病毒载体神经营养素4 视网膜神经节细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

腺伴随病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养的鼠视网膜神经节细胞转染的实验研究: 6; 作者李海燕赵家良张华《眼科新进展》 CAS 2006年第10期737-739,共3页; 目的评价重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(recombinant adeno-associated virus-mediated green fluorescence protein,rAAV-GFP)对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells ,RGCs)的转染效率和安全性。方法取出... 展开更多; 关键词重组腺伴随病毒载体绿色荧光蛋白视网膜神经节细胞细胞转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体被引量：1: 7; 作者聂小维孙立军 +2 位作者郝跃文杨广笑王全颖《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期278-280,283,共4页; 目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF... 展开更多; 关键词低氧反应元件(HRE) 重组腺伴随病毒载体低氧诱导; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用被引量：1: 1; 作者马东亮胡海涛杨蓬勃靳辉任惠民刘勇; 机构西安交通大学医学院人体解剖学教研室; 出处《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期27-29,47,共4页; 基金美国中华医学会基金资助 (CMB :82 4 1 3); 文摘目的　探讨重组腺伴随病毒载体表达人脑源性神经营养因子 (hBDNF)对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用。方法　用 β淀粉样肽 (Aβ2 5 3 5)注入大鼠Meynert核损伤胆碱能神经元。损伤后 8～ 10d行hBDNF重组腺伴随病毒脑内注射。经避暗回避试验测试大鼠学习记忆能力 ,组织学及免疫组织化学观察hBDNF表达以及胆碱能神经元数量变化。结果　避暗回避试验结果显示 ,应用hBDNF重组腺伴随病毒 4周后 ,实验组动物的学习记忆能力增强 ,行为明显改善。胆碱乙酰转移酶 (ChAT)免疫组织化学染色显示 ,注射点附近免疫反应阳性神经元散在或成群分布 ,数目明显增多 ,经与模型组比较 ,胆碱能神经元数量增高约 3 7%。结论　hBDNF重组腺伴随病毒可在脑内表达hBDNF ,表达的hBDNF对损伤的胆碱能神经元具有营养和保护作用。; 关键词重组腺伴随病毒载体 HBDNF 大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤保护作用人脑源性神经营养因子基因治疗; Keywords amyloid β -peptide (A β ) hBDNF recombinant adeno -associated virus (rAAV-hBDNF) passive avoidance and active avoidance tes ts cholinergic neurons rat; 分类号 R741 [医药卫生—神经病学与精神病学] R394 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建被引量：1: 2; 作者马巍刘淼杨广笑王全颖; 机构西安交通大学第一医院骨科西安华广生物工程有限公司; 出处《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期226-228,共3页; 文摘目的　为了研究人神经生长因子 (hNGF)基因导入急性脊髓损伤 (SCI)模型的治疗作用 ,构建并产生重组腺伴随病毒 (AAV)载体。方法　将hNGF外源性核酸片段插入AAV shuffer质粒 pSSHG Neo的KpnⅠ BamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒 pFG14 0代替野生型腺病毒 ,包装质粒 pAAV/Ad及已构建的pSSHG Neo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎 2 93细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果　成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF ,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分 ,梯度稀释测得滴度为 1.4 6× 10 12 PFU·mL-1。结论　成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒 (rAAV/hNGF)载体 ,为SCI基因治疗实验奠定了基础。; 关键词 hNGF基因重组腺伴随病毒(rAAV) 基因转移; Keywords human nerve growth factor gene recombinant adeno-associated virus gene transfer; 分类号 R749.1 [医药卫生—神经病学与精神病学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究被引量：2: 3; 作者郑国玺韦俊荣祝康侯瑾施典羽朱宏亮杨广笑王全颖; 机构西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉科西安华广生物工程有限公司; 出处《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期14-17,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30471877); 文摘目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。; 关键词重组腺伴随病毒载体报告基因基因治疗 NIH3T3; Keywords recombinate adeno-associated virus vector report gene gene therapy NIH3T3; 分类号 R735.1 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺伴随病毒介导的脑源性神经营养因子对耳蜗损伤保护作用的体外研究被引量：2: 4; 作者郑国玺祝康韦俊荣杨广笑王全颖; 机构西安交通大学医学院第二附属医院耳鼻喉科西安华广生物工程有限公司; 出处《实用医学杂志》 CAS 2008年第21期3640-3642,共3页; 基金陕西省科技攻关项目(编号:2002K10-G8(14)); 文摘目的:将携载脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的重组腺伴随病毒rAAV-BDNF转染体外培养的耳蜗组织,并观察该重组病毒对耳蜗损伤的保护作用。方法:体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞;应用新霉素建立体外耳聋模型;将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗,观察其对体外毛细胞的保护作用。结果:成功分离培养了新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后,可见外毛细胞和内毛细胞成排排列;rAAV-BDNF组毛细胞损伤程度较新霉素加害组明显为轻,而新霉素加害组可见毛细胞大量缺失,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的重组病毒rAAV-BDNF对耳蜗具有保护作用,可用于基因治疗的研究。; 关键词耳蜗疾病重组腺伴随病毒脑源性神经营养因子耳蜗毛细胞; Keywords Cochlear diseases Recombinate adeno-associated virus Brain-derived neurotrophic factor Cochlear hair cell; 分类号 R764 [医药卫生—耳鼻咽喉科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺伴随病毒介导的神经营养素4基因对视网膜神经节细胞的转染被引量：2: 5; 作者李海燕赵家良张华; 机构中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院眼科; 出处《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第7期533-536,共4页; 文摘目的应用重组腺伴随病毒载体介导的神经营养素4(rAAV-NT4)基因转染鼠视网膜神经节细胞(RGCs),探讨转染后对细胞生长活性和凋亡的影响。方法应用rAAV-NT4转染培养的RGCs,RT-PCR检测外源性NT4基因在RGCs中的表达,ELISA法检测细胞培养液中NT4的质量浓度,MTT法分析转染细胞生物活性,流式细胞学法检测转染细胞的凋亡比率。结果RT-PCR显示转染细胞表达外源性NT4基因,转染14d后培养液中NT4的质量浓度与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。转染6d和9dOD值与对照组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。rAAV-NT4转染细胞与对照组的凋亡比率差异无统计学意义(P>0.05)。结论rAAV-NT4可有效转染鼠RGCs,转染细胞可表达外源性NT4基因,生长活性改善。; 关键词重组腺伴随病毒载体神经营养素4 视网膜神经节细胞; Keywords recombinant adeno-associated virus vector neurotrophin-4 retinal ganglion cells; 分类号 R775 [医药卫生—眼科]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名腺伴随病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养的鼠视网膜神经节细胞转染的实验研究: 6; 作者李海燕赵家良张华; 机构中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医院眼科; 出处《眼科新进展》 CAS 2006年第10期737-739,共3页; 文摘目的评价重组腺伴随病毒载体介导的绿色荧光蛋白基因(recombinant adeno-associated virus-mediated green fluorescence protein,rAAV-GFP)对体外培养的鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells ,RGCs)的转染效率和安全性。方法取出生24 h内的SD乳鼠的视网膜神经上皮层,行视网膜神经细胞的体外混合培养;培养2 d后,按转染倍数(multiple oninfection,MOI)为10、102、103、104、105对细胞进行转染;5 d后行流式细胞仪检测细胞表达绿荧光的比率,并应用PE-Thy1 .1抗体标记RGCs ,评价不同MOI的rAAV-GFP对RGCs的转染效率。应用MTT比色方法检测各组细胞的生长活性。结果MOI为10、102、103、104、105时,对混合培养的全体细胞的转染效率分别为6·4 %、15.6 %、20.2 %、45.1 %和65.8 %,其中对RGCs的转染效率分别为11.7 %、22.5 %、27.7 %、52.0 %和75.3 %;rAAV-GFP转染RGCs后,细胞生长状态正常;MTT比色结果显示,各转染细胞和未转染细胞的光吸收值无显著性差异(P>0 .05)。结论 rAAV作为体外培养的SD乳鼠RGCs转染的载体是安全可行的,且对细胞生长无明显影响。; 关键词重组腺伴随病毒载体绿色荧光蛋白视网膜神经节细胞细胞转染; Keywords recombinant adeno-associated virus vector green fluorescence protein retinal ganglion cells transfection; 分类号 R774.1 [医药卫生—眼科] Q959.836 [生物学—动物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体被引量：1: 7; 作者聂小维孙立军郝跃文杨广笑王全颖; 机构第四军医大学西京医院放射科华广生物工程有限公司; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期278-280,283,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(30871041); 文摘目的:人工合成微小HER,将其插入到AAV重组质粒的CMV启动子上游,采用磷酸钙沉淀法包装低氧反应元件调控的AAV重组病毒,为缺血性心脑血管病的基因治疗制备可以控制表达的AAV载体。方法:人工合成具有4次重复串联的低氧诱导因子结合位点(HIF-binding site,HBS)A/GCGTG(4×HBS)的36 bp核酸片段和插入到CMV启动子TATA Box上游的间隔区35 bp的核酸序列,并运用PCR方法扩增。测序正确后,通过常规分子生物学重组方法,将原AAV载体质粒中CMV启动子替换成为含有最小人工合成HRE的CMV启动子,重组构建了低氧反应元件调控的AAV载体。并在该载体CMV启动子下游的多克隆位点插入具有6×His标签的NT4-6His-PR39融合肽序列。磷酸钙沉淀法包装表达NT4-6His-PR39融合肽序列的重组AAV。重组病毒感染人宫颈癌细胞(HeLa),化学性低氧培养,使用免疫组织化学观察低氧条件的诱导表达作用。结果:基因测序结果和酶切结果表明,我们已经把人工合成的HRE,以正确的间隔插入到CMV启动子的上游,成功地构建了HRE调控的AAV重组载体。重组病毒感染的细胞在常氧和低氧诱导表达的结果表明,在启动子上游插入人工合成的微小HRE能够有效调控重组腺相关病毒的表达。结论:使用PCR方法可以将人工合成的HER插入缺乏内切酶识别点的CMV启动子上游,可以制备低氧调控的真核表达载体。人工合成的微小HRE能够有效的调控CMV启动子控制的下游基因表达。该载体的成功制备在缺血性心脑血管病的预防和治疗中具有重要的理论和使用价值。; 关键词低氧反应元件(HRE) 重组腺伴随病毒载体低氧诱导; Keywords hypoxic-responsive element（HRE） recombinate adenoassociated virus vector hypoxia inducible; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重组腺伴随病毒载体表达hBDNF对大鼠基底前脑胆碱能神经元损伤的保护作用	马东亮胡海涛杨蓬勃靳辉任惠民刘勇	《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建	马巍刘淼杨广笑王全颖	《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究	郑国玺韦俊荣祝康侯瑾施典羽朱宏亮杨广笑王全颖	《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	腺伴随病毒介导的脑源性神经营养因子对耳蜗损伤保护作用的体外研究	郑国玺祝康韦俊荣杨广笑王全颖	《实用医学杂志》 CAS	2008	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	腺伴随病毒介导的神经营养素4基因对视网膜神经节细胞的转染	李海燕赵家良张华	《眼科研究》 CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	腺伴随病毒介导绿色荧光蛋白基因对体外培养的鼠视网膜神经节细胞转染的实验研究	李海燕赵家良张华	《眼科新进展》 CAS	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	构建人工合成的微小低氧反应元件可调控的AAV载体	聂小维孙立军郝跃文杨广笑王全颖	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料