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重组人胰高血糖素样肽-1突变体的分离纯化及活性分析 被引量:1
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作者 张志珍 刘智慧 毛积芳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期510-515,共6页
对基因工程构建的含人胰高血糖素样肽1(hGLP1)突变体的工程菌株进行诱导表达,分离纯化N末端第二位突变的2GlyhGLP1突变体.IPTG诱导4h,收获的菌体经超声破碎后,裂解液用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化GST2GlyhGLP1融合蛋白,经CNBr... 对基因工程构建的含人胰高血糖素样肽1(hGLP1)突变体的工程菌株进行诱导表达,分离纯化N末端第二位突变的2GlyhGLP1突变体.IPTG诱导4h,收获的菌体经超声破碎后,裂解液用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化GST2GlyhGLP1融合蛋白,经CNBr裂解、SephadexG25柱脱盐、QAESepharoseFF阴离子交换柱层析和RPC18柱脱盐,得到纯度大于98%的重组2GlyhGLP1.Western印迹分析证实,该突变体可被特异性hGLP1抗体所识别.生物学活性分析表明,2GlyhGLP1具有明显的降血糖活性和促胰岛素分泌活性(P<0.001). 展开更多
关键词 人胰高血糖素样肽-1 重组突变体 分离纯化 血糖 胰岛素
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重组腺病毒低氧诱导因子1α三突变体基因对兔缺血后肢血流灌注及血管渗透性的影响
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作者 何文凯 李明琰 +4 位作者 崔永生 陈建威 王月刚 陈冬冬 吴平生 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期240-242,254,共4页
目的研究重组腺病毒低氧诱导因子1α三突变体基因(Ad-HIF-1α-trip)对兔缺血后肢血管渗透性的影响。方法 18只新西兰大白兔建立左侧后肢急性缺血模型,随机分成3组,分别为生理盐水组、腺病毒空载体组(Ad-Null组)、Ad-HIF-1α-trip组,每组... 目的研究重组腺病毒低氧诱导因子1α三突变体基因(Ad-HIF-1α-trip)对兔缺血后肢血管渗透性的影响。方法 18只新西兰大白兔建立左侧后肢急性缺血模型,随机分成3组,分别为生理盐水组、腺病毒空载体组(Ad-Null组)、Ad-HIF-1α-trip组,每组6只,分别在术后即刻肌注生理盐水、Ad-Null及Ad-HIF-1α-trip。在术后即刻及基因转染后7、14和28 d进行血管超声检查。术后7 d、14 d和28 d通过血管超声计算缺血侧髂内动脉血流量标化值,评价兔缺血后肢血流灌注改善情况。基因转染后28 d采用伊文思蓝(EB)染色法测定各组缺血肌肉组织中EB含量,评价Ad-HIF-1α-trip对缺血组织新生血管渗透性的影响。结果 Ad-HIF-1α-trip组缺血侧髂内动脉血流量标化值增加大于其他2组,差异有统计学意义(P<0.05);Ad-HIF-1α-trip组缺血肌肉组织的EB含量略高于Ad-Null组及生理盐水组,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-HIF-1α-trip能有效改善缺血肌肉组织的血流灌注,同时并未明显增加新生血管的渗透性。 展开更多
关键词 重组腺病毒低氧诱导因子1α三突变体 血流灌注 渗透性
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KGF-1二硫键突变体对肝纤维化的保护作用
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作者 谢敏 万颖 +3 位作者 张增涛 何建军 杨黎 范开 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2012年第4期45-49,共5页
观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含... 观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含二硫键)进行体内抗纤维化活性的比较,并研究其对人肝星状细胞系的抑制作用。结果表明,与模型组相比,KGF-1突变体的各项指标均优于模型组,并且△23Ser102 KGF-1可明显抑制人肝星状细胞系的生长,可见KGF-1突变体不含二硫键组对大鼠试验性肝损伤有明显保护作用。此外实验还证明二硫键的有无会直接影响蛋白质的生物活性。 展开更多
关键词 重组人角质细胞生长因子-1突变体 二硫键 肝纤维化 四氯化碳
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大豆ASR表达提高酵母和烟草细胞对Cu^(2+)耐受力 被引量:2
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作者 高阳 刘国宝 +2 位作者 刘科 李冉辉 郑易之 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期137-144,共8页
利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,证明大豆幼苗在150μmol/L Cu SO4胁迫3 h后,其叶和根内Gm ASR基因表达均上调.将大豆Gm ASR基因转化Cu2+敏感型酵母菌ΔCUP 2和烟草悬浮细胞BY-2,Gm ASR蛋白的表达... 利用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,证明大豆幼苗在150μmol/L Cu SO4胁迫3 h后,其叶和根内Gm ASR基因表达均上调.将大豆Gm ASR基因转化Cu2+敏感型酵母菌ΔCUP 2和烟草悬浮细胞BY-2,Gm ASR蛋白的表达可增强重组酵母和转基因烟草细胞抗Cu2+胁迫的能力.利用大肠杆菌表达体系表达、分离并纯化大豆Gm ASR蛋白,体外实验证明,Gm ASR蛋白可与Cu2+结合,并具有清除羟基自由基的能力.研究结果推测,ASR蛋白可通过螯合Cu2+降低细胞内Cu2+浓度,提高植物对Cu2+胁迫的耐受力. 展开更多
关键词 植物基因工程 GmASR基因 转基因烟草 重组突变体酵母 抗金属离子胁迫 金属离子结合蛋白
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刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析填料的制备及应用 被引量:4
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作者 陈嫚 任启生 +1 位作者 宋新荣 冯长根 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期172-175,共4页
研究用交联琼脂糖为载体 ,三聚氯氰为活化剂 ,刺桐胰蛋白酶抑制剂为配基 ,制备亲和填料的方法 .通过紫外和红外光谱分析 ,对制备的填料进行表征 .用制备的亲和填料吸附重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase,r- PA) ,研究吸附与... 研究用交联琼脂糖为载体 ,三聚氯氰为活化剂 ,刺桐胰蛋白酶抑制剂为配基 ,制备亲和填料的方法 .通过紫外和红外光谱分析 ,对制备的填料进行表征 .用制备的亲和填料吸附重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase,r- PA) ,研究吸附与解吸附条件 .结果表明 ,用该方法制备的亲和填料 ,制备工艺简单 ,吸附性能良好 ,对r- PA的吸附量为 8.76 mg· g- 1 .解吸附完全 ,不影响活性 ,可以用来分离纯化 r- PA. 展开更多
关键词 三聚氯氰 刺桐胰蛋白酶抑制剂 重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体 亲和色谱
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