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重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制被引量：1: 1; 作者王永娟朱善元 +1 位作者王岑左伟勇《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期144-149,共6页; 为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用。在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒;纯化后的病毒经过电镜... 展开更多; 关键词传染性法氏囊病毒重组禽腺联病毒 MIRNAS; 在线阅读下载PDF 职称材料

输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定: 2; 作者吴植张继玲 +2 位作者吴萌崔潇婷王安平《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2871-2877,共7页; 试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽... 展开更多; 关键词重组禽腺联病毒(raaav) 人溶菌酶(hLYZ) 杆状病毒表达系统鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达: 3; 作者吴植朱善元 +4 位作者顾玲玲张继玲吴萌崔潇婷王安平《动物医学进展》北大核心 2018年第4期24-27,共4页; 为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10^(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示... 展开更多; 关键词人溶菌酶禽腺联病毒蛋清表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定: 4; 作者崔潇婷顾玲玲 +2 位作者吴萌张继玲王安平《江苏农业科学》 2019年第5期153-155,共3页; 为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同... 展开更多; 关键词重组禽腺联病毒杆状病毒表达系统鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽腺联病毒Rep基因在昆虫细胞中的表达: 5; 作者朱善元王安平 +3 位作者吴双王永娟左伟勇洪伟鸣《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期111-115,共5页; 根据禽腺联病毒Rep基因序列设计2对引物,分别扩增出Rep78和Rep52基因,将其克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacDual,获得重组穿梭质粒pFastBacDual-Rep,将其转化到E.coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组病毒表达质粒rBa... 展开更多; 关键词禽腺联病毒 Rep基因昆虫细胞表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽腺联病毒VP基因在昆虫细胞中的表达: 6; 作者王安平朱善元 +3 位作者吴双王永娟左伟勇洪伟鸣《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期162-166,共5页; 为同时在昆虫细胞中按照合适比例表达禽腺联病毒的3个结构蛋白质,首先根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转移载体pFastBac-VP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑... 展开更多; 关键词禽腺联病毒 VP基因昆虫细胞表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建: 7; 作者王安平朱善元 +3 位作者吴双王永娟左伟勇洪伟鸣《江苏农业科学》北大核心 2013年第8期25-27,共3页; 根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异... 展开更多; 关键词禽腺联病毒 VP基因杆状病毒表达载体克隆; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽腺联病毒全基因组的克隆及感染性病毒的拯救: 8; 作者王建业孙怀昌朱国强《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期825-829,共5页; 为了克隆禽腺联病毒(Avian adeno-associated virus,AAAV)全基因组用于构建基因转移载体研究,以鸡胚致死孤儿病毒(CELO)作为辅助病毒与AAAV共接种SPF鸡胚进行AAAV的增殖,将AAAV约4.7kb双链基因组DNA与pCR2.1载体连接,构建了含AAAV全基... 展开更多; 关键词禽腺联病毒基因组克隆序列分析病毒拯救; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽腺联病毒和马立克氏病病毒在鸡胚成纤维细胞上相互影响的...: 9; 作者 Baue.,HJ 晁毓放《国外兽医学（畜禽传染病）》 1989年第3期8-9,共2页; 关键词禽腺联病毒 MDV CEF 鸡; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制被引量：1: 1; 作者王永娟朱善元王岑左伟勇; 机构江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期144-149,共6页; 基金 2012年江苏畜牧兽医职业技术学院重点支持项目(ZD1204) 2013年江苏农牧科技职业学院横向配套项目(NSFPT1303); 文摘为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用。在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒;纯化后的病毒经过电镜观察、病毒感染性试验确定其存在与感染滴度,提取转导重组病毒后的细胞总RNA,RT-PCR法检测miRNAs表达情况,在重组病毒转导的细胞中感染不同源的IBDV,在感染后不同时间测定病毒TCID50及vp2基因表达水平。结果显示,成功制备了重组禽腺联病毒,病毒感染性滴度可达5×108TU/ml,与阴性对照相比,成功表达的miRNA能在细胞上抑制病毒基因的扩增,大幅度降低同源或异源病毒的滴度。表明重组禽腺联病毒可以作为有效传送和稳定表达miRNA的载体,有望开发预防鸡传染性法氏囊病(IBD)的新方法。; 关键词传染性法氏囊病毒重组禽腺联病毒 MIRNAS; Keywords infectious bursal disease virus（IBDV） recombinant avian adeno-associated virus miRNA; 分类号 S858.31 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定: 2; 作者吴植张继玲吴萌崔潇婷王安平; 机构江苏农牧科技职业学院、江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2871-2877,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31302096) 江苏省农业支撑项目(BE2013415) 江苏省六大人才高峰项目(NY-009); 文摘试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体p FB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-AIOVLYZ。将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒r Bac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒r Bac-Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为r AAAV-OVLYZ。电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示r AAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明r AAAV能介导h LYZ在输卵管细胞中的特异表达。结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达h LYZ基因的r AAAV,为h LYZ的大量制备奠定了基础。; 关键词重组禽腺联病毒(raaav) 人溶菌酶(hLYZ) 杆状病毒表达系统鉴定; Keywords recombinant avian adeno-associated virus(raaav) human lysozyme(hLYZ) baculovirus expression system identification; 分类号 Q819 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达: 3; 作者吴植朱善元顾玲玲张继玲吴萌崔潇婷王安平; 机构江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《动物医学进展》北大核心 2018年第4期24-27,共4页; 基金国家自然科学基金项目(31302096) 江苏省农业支撑项目(BE2013415) 江苏省六大人才高峰项目(NY-009); 文摘为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10^(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示重组蛋白大小正确,抑菌活性表明注射重组病毒后的蛋清的抑菌活性明显优于正常蛋清的。动态表达水平检测结果显示,注射病毒后第1周即可以检测到重组hLYZ的表达,第5周时表达量最高,达68.3μg/mL,表达时间持续3个月之久。以上结果表明,重组禽腺联病毒能介导人溶菌酶在蛋清中的高效、长时表达,为人溶菌酶的开发应用提供了新途径。; 关键词人溶菌酶禽腺联病毒蛋清表达; Keywords human lysozyme Avian adeno-associated virus egg white expression; 分类号 S852.659.2 [农业科学—基础兽医学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定: 4; 作者崔潇婷顾玲玲吴萌张继玲王安平; 机构江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《江苏农业科学》 2019年第5期153-155,共3页; 基金国家自然科学基金(编号:31302096) 江苏省科技支撑计划(编号:BE2013415) 江苏省六大人才高峰项目(编号:NY-009); 文摘为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同时感染摇瓶培养中的昆虫细胞Sf9,72 h后收集细胞沉淀,反复冻融3～5次后,离心取上清。经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀后,进行电镜观察和Western blot分析,并体外感染鸡成纤维细胞和鸡肝细胞系。SDS-PAGE结果显示,rAAAV得到了较好的纯化,电镜下可观察到大小约20 nm的典型细小病毒样粒子,Western blot分析数据显示rAAAV由3个结构蛋白组成,与野生病毒相似。体外表达试验结果显示,rAAAV能介导GFP报告基因在鸡细胞中稳定持久地表达。表明杆状病毒表达系统制备的rAAAV具有与野生病毒相似的性质,可应用于后继研究和开发应用。; 关键词重组禽腺联病毒杆状病毒表达系统鉴定; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽腺联病毒Rep基因在昆虫细胞中的表达: 5; 作者朱善元王安平吴双王永娟左伟勇洪伟鸣; 机构江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期111-115,共5页; 基金江苏省自然科学基金项目(BK2011536) 国家自然科学基金项目(31302096); 文摘根据禽腺联病毒Rep基因序列设计2对引物,分别扩增出Rep78和Rep52基因,将其克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacDual,获得重组穿梭质粒pFastBacDual-Rep,将其转化到E.coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组病毒表达质粒rBacmid-Rep。在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-Rep。SDS-PAGE结果分析表明,Rep78、Rep52均获得了表达,Western blot结果显示表达的重组蛋白能够与Rep52多抗反应,具有良好的反应原性。结论:禽腺联病毒的非结构蛋白Rep78、Rep52基因在昆虫细胞中获得了成功表达。; 关键词禽腺联病毒 Rep基因昆虫细胞表达; Keywords avian adeno-associated virus Rep gene insect cells express; 分类号 S852.62 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽腺联病毒VP基因在昆虫细胞中的表达: 6; 作者王安平朱善元吴双王永娟左伟勇洪伟鸣; 机构江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 出处《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期162-166,共5页; 基金江苏省自然科学基金项目(BK2011536); 文摘为同时在昆虫细胞中按照合适比例表达禽腺联病毒的3个结构蛋白质,首先根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,获得重组转移载体pFastBac-VP,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-VP,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rBac-VP。SDS-PAGE结果分析表明,3个结构蛋白质VP1、VP2和VP3均获得了表达,分子量正确,且比例为1∶1∶10。Western blot结果显示,表达的重组蛋白质能够与VP3多抗反应。以上结果说明禽腺联病毒的3个结构蛋白质均在昆虫细胞中获得了成功表达。; 关键词禽腺联病毒 VP基因昆虫细胞表达; Keywords avian adeno-associated virus VP gene insect cell expression; 分类号 S476.13 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建: 7; 作者王安平朱善元吴双王永娟左伟勇洪伟鸣; 机构江苏畜牧兽医职业技术学院/江苏省兽用生物制药高新技术研究重点实验室; 出处《江苏农业科学》北大核心 2013年第8期25-27,共3页; 基金江苏省自然科学基金(编号:BK2011536); 文摘根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,经抗性和蓝白斑筛选,获得含VP基因的重组穿梭载体rBacmid-VP。研究结果为进一步在昆虫细胞中表达VP基因,开发研制重组禽腺联病毒载体奠定了基础。; 关键词禽腺联病毒 VP基因杆状病毒表达载体克隆; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽腺联病毒全基因组的克隆及感染性病毒的拯救: 8; 作者王建业孙怀昌朱国强; 机构扬州大学兽医学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期825-829,共5页; 文摘为了克隆禽腺联病毒(Avian adeno-associated virus,AAAV)全基因组用于构建基因转移载体研究,以鸡胚致死孤儿病毒(CELO)作为辅助病毒与AAAV共接种SPF鸡胚进行AAAV的增殖,将AAAV约4.7kb双链基因组DNA与pCR2.1载体连接,构建了含AAAV全基因组的重组质粒pAAAV并进行了测序。序列分析表明,AAAV YZ-1株的基因组为4684bp,两端具有141bp的末端倒置重复序列和Rep蛋白结合位点特征序列,与GenBank中收录的AAAV DA-1株和VR-865株的核苷酸序列同源性分别为95.0%和92.2%。将pAAAV质粒转染CELO病毒感染的鸡胚肝细胞系,获得了感染性AAAV病毒粒子,结果证明克隆的AAAV基因组中存在与病毒复制和包装相关的正确关键序列,可用于重组AAAV载体的构建。; 关键词禽腺联病毒基因组克隆序列分析病毒拯救; Keywords avian adeno-associated virus genome cloning sequence analysis virus rescue; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学] S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽腺联病毒和马立克氏病病毒在鸡胚成纤维细胞上相互影响的...: 9; 作者 Baue.,HJ 晁毓放; 出处《国外兽医学（畜禽传染病）》 1989年第3期8-9,共2页; 关键词禽腺联病毒 MDV CEF 鸡; 分类号 S858.310.5 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制	王永娟朱善元王岑左伟勇	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定	吴植张继玲吴萌崔潇婷王安平	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2017	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达	吴植朱善元顾玲玲张继玲吴萌崔潇婷王安平	《动物医学进展》北大核心	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定	崔潇婷顾玲玲吴萌张继玲王安平	《江苏农业科学》	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	禽腺联病毒Rep基因在昆虫细胞中的表达	朱善元王安平吴双王永娟左伟勇洪伟鸣	《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	禽腺联病毒VP基因在昆虫细胞中的表达	王安平朱善元吴双王永娟左伟勇洪伟鸣	《江苏农业学报》 CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建	王安平朱善元吴双王永娟左伟勇洪伟鸣	《江苏农业科学》北大核心	2013	0	在线阅读下载PDF 职称材料
8	禽腺联病毒全基因组的克隆及感染性病毒的拯救	王建业孙怀昌朱国强	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
9	禽腺联病毒和马立克氏病病毒在鸡胚成纤维细胞上相互影响的...	Baue.,HJ 晁毓放	《国外兽医学（畜禽传染病）》	1989	0	在线阅读下载PDF 职称材料