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重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制
被引量：
1
1
作者
王永娟
朱善元
+1 位作者
王岑
左伟勇
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第1期144-149,共6页
为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用。在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒;纯化后的病毒经过电镜...
为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用。在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒;纯化后的病毒经过电镜观察、病毒感染性试验确定其存在与感染滴度,提取转导重组病毒后的细胞总RNA,RT-PCR法检测miRNAs表达情况,在重组病毒转导的细胞中感染不同源的IBDV,在感染后不同时间测定病毒TCID50及vp2基因表达水平。结果显示,成功制备了重组禽腺联病毒,病毒感染性滴度可达5×108TU/ml,与阴性对照相比,成功表达的miRNA能在细胞上抑制病毒基因的扩增,大幅度降低同源或异源病毒的滴度。表明重组禽腺联病毒可以作为有效传送和稳定表达miRNA的载体,有望开发预防鸡传染性法氏囊病(IBD)的新方法。
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关键词
传染性法氏囊
病毒
重组禽腺联病毒
MIRNAS
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职称材料
输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定
2
作者
吴植
张继玲
+2 位作者
吴萌
崔潇婷
王安平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2017年第10期2871-2877,共7页
试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽...
试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体p FB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-AIOVLYZ。将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒r Bac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒r Bac-Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为r AAAV-OVLYZ。电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示r AAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明r AAAV能介导h LYZ在输卵管细胞中的特异表达。结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达h LYZ基因的r AAAV,为h LYZ的大量制备奠定了基础。
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关键词
重组禽腺联病毒
(rAAAV)
人溶菌酶(hLYZ)
杆状
病毒
表达系统
鉴定
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职称材料
杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定
3
作者
崔潇婷
顾玲玲
+2 位作者
吴萌
张继玲
王安平
《江苏农业科学》
2019年第5期153-155,共3页
为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同...
为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同时感染摇瓶培养中的昆虫细胞Sf9,72 h后收集细胞沉淀,反复冻融3～5次后,离心取上清。经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀后,进行电镜观察和Western blot分析,并体外感染鸡成纤维细胞和鸡肝细胞系。SDS-PAGE结果显示,rAAAV得到了较好的纯化,电镜下可观察到大小约20 nm的典型细小病毒样粒子,Western blot分析数据显示rAAAV由3个结构蛋白组成,与野生病毒相似。体外表达试验结果显示,rAAAV能介导GFP报告基因在鸡细胞中稳定持久地表达。表明杆状病毒表达系统制备的rAAAV具有与野生病毒相似的性质,可应用于后继研究和开发应用。
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关键词
重组禽腺联病毒
杆状
病毒
表达系统
鉴定
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职称材料
题名
重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制
被引量：
1
1
作者
王永娟
朱善元
王岑
左伟勇
机构
江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014年第1期144-149,共6页
基金
2012年江苏畜牧兽医职业技术学院重点支持项目(ZD1204)
2013年江苏农牧科技职业学院横向配套项目(NSFPT1303)
文摘
为了研究重组禽腺联病毒介导的基因特异miRNAs对传染性法氏囊病毒(IBDV)复制的抑制作用。在前期研究基础上,利用重组DNA技术构建表达vp2与vp1基因特异miRNAs的重组禽腺联病毒转移载体,磷酸钙法制备重组禽腺联病毒;纯化后的病毒经过电镜观察、病毒感染性试验确定其存在与感染滴度,提取转导重组病毒后的细胞总RNA,RT-PCR法检测miRNAs表达情况,在重组病毒转导的细胞中感染不同源的IBDV,在感染后不同时间测定病毒TCID50及vp2基因表达水平。结果显示,成功制备了重组禽腺联病毒,病毒感染性滴度可达5×108TU/ml,与阴性对照相比,成功表达的miRNA能在细胞上抑制病毒基因的扩增,大幅度降低同源或异源病毒的滴度。表明重组禽腺联病毒可以作为有效传送和稳定表达miRNA的载体,有望开发预防鸡传染性法氏囊病(IBD)的新方法。
关键词
传染性法氏囊
病毒
重组禽腺联病毒
MIRNAS
Keywords
infectious bursal disease virus（IBDV）
recombinant avian adeno-associated virus
miRNA
分类号
S858.31 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定
2
作者
吴植
张继玲
吴萌
崔潇婷
王安平
机构
江苏农牧科技职业学院、江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2017年第10期2871-2877,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31302096)
江苏省农业支撑项目(BE2013415)
江苏省六大人才高峰项目(NY-009)
文摘
试验旨在利用杆状病毒表达系统制备输卵管特异表达人溶菌酶(h LYZ)的重组禽腺联病毒(recombinant avian adeno-associated virus,r AAAV)。参照已发表的h LYZ基因序列设计1对引物,PCR扩增h LYZ基因片段,亚克隆至含输卵管特异表达盒和禽腺联病毒(AAAV)两侧末端反向重复序列(inverted terminal repeat,ITR)的转移载体中,获得重组杆状病毒转移载体p FB-AIOVLYZ,将其转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒r Bacmid-AIOVLYZ,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-AIOVLYZ。将其与表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒r Bac-VP及表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒r Bac-Rep以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5感染Sf9昆虫细胞,72 h后收集细胞沉淀,并经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀,即为r AAAV-OVLYZ。电镜结果显示,病毒粒子大小约为20 nm,形态结构与野生AAAV相似;PCR结果显示r AAAV含有目的基因;体外细胞表达试验说明r AAAV能介导h LYZ在输卵管细胞中的特异表达。结果表明,本研究利用杆状表达系统成功制备了输卵管特异表达h LYZ基因的r AAAV,为h LYZ的大量制备奠定了基础。
关键词
重组禽腺联病毒
(rAAAV)
人溶菌酶(hLYZ)
杆状
病毒
表达系统
鉴定
Keywords
recombinant avian adeno-associated virus(rAAAV)
human lysozyme(hLYZ)
baculovirus expression system
identification
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定
3
作者
崔潇婷
顾玲玲
吴萌
张继玲
王安平
机构
江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室
出处
《江苏农业科学》
2019年第5期153-155,共3页
基金
国家自然科学基金(编号:31302096)
江苏省科技支撑计划(编号:BE2013415)
江苏省六大人才高峰项目(编号:NY-009)
文摘
为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同时感染摇瓶培养中的昆虫细胞Sf9,72 h后收集细胞沉淀,反复冻融3～5次后,离心取上清。经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀后,进行电镜观察和Western blot分析,并体外感染鸡成纤维细胞和鸡肝细胞系。SDS-PAGE结果显示,rAAAV得到了较好的纯化,电镜下可观察到大小约20 nm的典型细小病毒样粒子,Western blot分析数据显示rAAAV由3个结构蛋白组成,与野生病毒相似。体外表达试验结果显示,rAAAV能介导GFP报告基因在鸡细胞中稳定持久地表达。表明杆状病毒表达系统制备的rAAAV具有与野生病毒相似的性质,可应用于后继研究和开发应用。
关键词
重组禽腺联病毒
杆状
病毒
表达系统
鉴定
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组禽腺联病毒传递的miRNAs对鸡传染性法氏囊病毒复制的抑制
王永娟
朱善元
王岑
左伟勇
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
2
输卵管特异表达人溶菌酶基因重组禽腺联病毒的构建及鉴定
吴植
张继玲
吴萌
崔潇婷
王安平
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2017
0
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下载PDF
职称材料
3
杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定
崔潇婷
顾玲玲
吴萌
张继玲
王安平
《江苏农业科学》
2019
0
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