表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量：7

1

作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页

血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ... 血凝素（ＨＡ）和神经氨酸酶（ＮＡ）是禽流感病毒（ＡＩＶ）的两种表面糖蛋白，主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／３／９６（Ｈ５Ｎ１）的ＳＰＦ鸡胚尿囊毒ＲＮＡ，ＲＴ－ＰＣＲ扩增完整的ＮＡ ｃＤＮＡ基因，将其克隆到载体ｐＳＹ５３８中的禽痘病毒早晚期启动子 ＬＰ２ＥＰ２的下游，然后再将含有启动子的 ＮＡ基因片段亚克隆到已有的ＡＩＶＨＡ基因重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＬａｃＺ）中，构建了ＨＡ、ＮＡ双重组禽痘病毒转移载体ｐＳＹ（ＨＡ＋ＮＡ＋ＬａｃＺ），将它与禽痘病毒疫苗株Ｓ－ＦＰＶ－０１７共转染鸡胚成纤维细胞，在Ｘ－ｇａｌ存在的条件下，经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、ＰＣＲ鉴定等，结果表明已获得一株能同时稳定表达ＨＡ和ＮＡ蛋白的重组禽痘病毒，为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 重组禽痘病毒

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禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达 被引量：5

2

作者 乔传玲 张建林 +5 位作者 贾永清 邓国华 姜永萍 王秀荣 孟庆文 于康震 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期81-83,共3页

为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的... 为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA+NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 核蛋白基因 重组禽痘病毒 基因共表达 基因工程活病毒载体疫苗

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鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建和表达 被引量：6

3

作者 赵丽荣 王君伟 贾永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期437-439,共3页

本实验采用质脂体转染方法将禽痘病毒转移载体质粒PSY6 81VP3LacZ转染被禽痘病毒FPV_0 17感染的鸡胚成纤维细胞CEF ,通过蓝白筛选和 6轮蚀斑克隆纯化 ,获得了稳定的重组病毒。PCR鉴定 ,重组病毒基因组中含有VP3基因。Dot_ELISA实验证明 ... 本实验采用质脂体转染方法将禽痘病毒转移载体质粒PSY6 81VP3LacZ转染被禽痘病毒FPV_0 17感染的鸡胚成纤维细胞CEF ,通过蓝白筛选和 6轮蚀斑克隆纯化 ,获得了稳定的重组病毒。PCR鉴定 ,重组病毒基因组中含有VP3基因。Dot_ELISA实验证明 ,重组病毒表达了VP3,并具有抗原性。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 VP3 重组禽痘病毒

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鹅细小病毒VP3基因和鹅副黏病毒F基因在重组禽痘病毒中联合表达 被引量：4

4

作者 于志丹 王君伟 +2 位作者 孙进华 藏玉婷 张雅为 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第7期13-15,共3页

将重组转移载体质粒pSY681-VP3-F-LacZ与脂质体转染禽痘病毒感染的CEF细胞,通过五轮蓝斑筛选,获得纯化的重组病毒rFPV-VP3-F。经PCR检测,表明GPV-VP3基因和GPMV-F基因已重组到特异性禽痘病毒基因组中;Dot-ELISA和间接免疫荧光试验,证明... 将重组转移载体质粒pSY681-VP3-F-LacZ与脂质体转染禽痘病毒感染的CEF细胞,通过五轮蓝斑筛选,获得纯化的重组病毒rFPV-VP3-F。经PCR检测,表明GPV-VP3基因和GPMV-F基因已重组到特异性禽痘病毒基因组中;Dot-ELISA和间接免疫荧光试验,证明VP3蛋白和F蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得有效表达并且两种蛋白都保持其反应原性。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 衣壳蛋白 鹅副黏病毒 融合蛋白 重组禽痘病毒

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禽痘病毒感染对禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的影响 被引量：2

5

作者 乔传玲 李呈军 +3 位作者 于康震 田国彬 刘宝全 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期154-156,共3页

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FP... 表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FPV_0 17人工感染SPF试验鸡 ,既而在感染后的不同间隔时间接种重组疫苗 ,免疫后检测鸡群的HI抗体水平 ,同时用 10 0LD50 的HPAIVH5N1进行攻击。结果重组疫苗免疫与禽痘病毒人工感染时间间隔在 4周 (或以上 )时 ,预先感染禽痘病毒对重组疫苗的免疫效力不构成影响 ,对禽流感的保护力为 10 0 % ,而间隔时间在 1、2、3周时 ,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响。 展开更多

关键词 禽痘病毒 禽流感 重组禽痘病毒疫苗 免疫效力

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表达鹅α干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制鹅细小病毒活性的初步研究 被引量：1

6

作者 张颖 高旭 +1 位作者 陈海迪 鲁承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期942-945,共4页

为研究表达鹅α干扰素(GoIFN-α)基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性,本实验从植物血凝素刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增gIFN-α基因,其大小为576 bp。将其与LacZ表达盒串联克隆于pSY681质粒中构建pSY681-I... 为研究表达鹅α干扰素(GoIFN-α)基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性,本实验从植物血凝素刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增gIFN-α基因,其大小为576 bp。将其与LacZ表达盒串联克隆于pSY681质粒中构建pSY681-IFN-α-LacZ转移重组质粒。采用脂质体将重组质粒转染于预感染禽痘病毒(FPV)017株的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝/白斑筛选获得重组禽痘病毒rFPV-IFN-α。采用间接免疫荧光和western blot方法对重组毒鉴定结果显示,GoIFN-α基因在CEF中获得表达,分子质量约为29 ku。表达的CoIFN-α对鹅细小病毒在鹅胚成纤维细胞中的复制具有抑制作用。本研究为进一步开展GoIFN-α基因重组FPV活载体疫苗的体内试验奠定了基础。 展开更多

关键词 延边白鹅 IFN-Α 重组禽痘病毒 抗病毒

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猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

7

作者 王淑娟 陈红英 +3 位作者 魏战勇 刘金朋 耿静微 崔保安 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期71-75,共5页

采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入... 采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列。将BamHⅠ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamHⅠ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2。NotⅠ酶切pSY538/pIL-2后,得到含有双启动子LP2和EP2的猪IL-2基因片段,将其亚克隆到含有LacZ基因的pSY681载体上,筛选正向插入的重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2。测序结果表明,克隆的豫南黑猪IL-2基因长482 bp,包含1个完整读码框(465 bp),与GenBank中其他5条猪IL-2基因核苷酸同源性为99.9%。重组质粒pSY681/pIL-2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。成功构建了重组禽痘病毒转移质粒pSY681/pIL-2,为猪IL-2生物学功能的进一步研究和开发奠定基础。 展开更多

关键词 猪白细胞介素-2 克隆 重组禽痘病毒 载体 构建

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H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组禽痘病毒的构建

8

作者 陈红英 黄青云 +3 位作者 崔保安 李新生 赵丽 管倩 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第12期7-13,共7页

【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚... 【目的】获得表达H9亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的重组禽痘病毒。【方法】将含禽痘病毒启动子LP2EP2驱动的HA基因,插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/HA。用脂质体将其转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达HA的重组禽痘病毒rFPV-HA。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒进行多次蚀斑克隆,并用间接免疫荧光法对感染重组病毒鸡胚成纤维细胞中HA的表达产物进行鉴定。【结果】以重组禽痘病毒DNA为模板,利用HA基因特异引物进行PCR,扩增出1条约1.7 kb左右的带。以间接免疫荧光法证实重组禽痘病毒能表达HA。【结论】成功构建了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒,且构建的重组禽痘病毒能表达具有生物学活性的HA。 展开更多

关键词 H9亚型禽流感病毒 HA基因 重组禽痘病毒 基因工程疫苗

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表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测

9

作者 陈红英 黄青云 +3 位作者 崔保安 李新生 管倩 刘金朋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期6-10,共5页

为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒,将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/ChIL-18。将pSY681/ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维... 为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒,将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/ChIL-18。将pSY681/ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IL-18的重组禽痘病毒rFPV-ChIL-18。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒rFPV-ChIL-18又进行了多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用鸡IL-18基因特异引物进行PCR,扩增出1条约0.6 kb的带。收集含鸡IL-18蛋白的细胞上清液进行MTT试验,表达的产物能明显提高鸡淋巴细胞的转化率。 展开更多

关键词 鸡IL-18基因 重组禽痘病毒 构建 生物学活性

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H9亚型禽流感病毒HA基因的重组禽痘病毒构建

10

作者 吴美芹 杨宾宾 +2 位作者 孙强强 单虎 李明义 《中国动物检疫》 CAS 2009年第3期31-34,共4页

本试验构建了H9亚型禽流感病毒HA基因禽痘病毒转移载体,经转染、蓝斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的HA基因重组禽痘病毒。提取感染重组病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA进行PCR扩增,获得1.7kb的携带有外源目的基因片段。收集纯... 本试验构建了H9亚型禽流感病毒HA基因禽痘病毒转移载体,经转染、蓝斑克隆、筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的HA基因重组禽痘病毒。提取感染重组病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)的DNA进行PCR扩增,获得1.7kb的携带有外源目的基因片段。收集纯化的重组病毒CEF细胞,用H9亚型禽流感病毒多克隆血清作一抗,碱性磷酸酶标记的鸡IgG为二抗进行Western blot检测,结果表明重组痘病毒能在体外的CEF细胞表达HA糖蛋白。 展开更多

关键词 禽流感病毒 禽痘病毒 HA基因 重组禽痘病毒

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表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建 被引量：3

11

作者 焦同路 王靖飞 +7 位作者 赵双成 王世达 常晓飞 田石 柳金雄 李雁冰 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期341-344,共4页

为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚... 为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚成纤维细胞中经过多轮筛选,得到纯化的重组禽痘病毒(rFPV-gfp-gpt-AHHA)。通过PCR、序列测定和western blot的方法对rFPV-gfp-gpt-AHHA进行鉴定和抗原活性分析。结果表明AH/06的HA基因稳定的重组到rFPV-gfp-gpt-AHHA中,其表达的HA蛋白能够与AH/06的阳性血清反应,显示出了良好的抗原性。同时病毒的生长曲线也显示外源HA基因的插入并没有影响亲本病毒的复制。这些结果为进一步的免疫效力研究奠定了基础。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感病毒 重组禽痘病毒 HA基因

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表达鹅γ干扰素重组禽痘病毒的构建及其抗病毒活性的初步研究 被引量：1

12

作者 张紫璇 韩明子 +5 位作者 高旭 李远超 孟媛 李卓昕 王美淇 刘晋宇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1163-1167,共5页

为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibro... 为研究表达鹅γ干扰素(GoIFN-γ)基因重组禽痘病毒的抗病毒活性,本研究构建了在禽痘病毒(FPV)早晚期启动子LP2EP2控制下的IFN-γ基因重组禽痘病毒转移载体,将其转染至亲本禽痘病毒S-FPV-017预感染的鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF),使其与禽痘病毒基因组进行同源重组,经过9轮筛选和纯化并进行PCR和间接免疫荧光检测,获得能稳定表达外源基因的重组病毒r FPV-IFNγ-LacZ。利用细胞病变抑制法检测抗病毒活性结果显示,在鸡胚成纤维细胞中重组禽痘病毒表达的IFN-γ对鹅细小病毒的复制具有显著抑制作用。本研究为制备共表达保护性抗原和γ干扰素基因的重组基因工程疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 Γ干扰素 重组禽痘病毒 鹅细小病毒

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鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究 被引量：14

13

作者 曹殿军 刘惠莉 +3 位作者 王莉林 闵平 张莹 卢景良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期61-64,共4页

利用重组表达质粒ＨＮ－ＰＥＦＬ－２９与鸡痘病毒ＦＰ９共转染鸡胚成纤维细胞，经蚀斑筛选，结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得含有外源ＨＮ基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经４次传代，细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Ｗｅ... 利用重组表达质粒ＨＮ－ＰＥＦＬ－２９与鸡痘病毒ＦＰ９共转染鸡胚成纤维细胞，经蚀斑筛选，结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，获得含有外源ＨＮ基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经４次传代，细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上，以糖基化（７４ｋＤ）和非糖基化（６８ｋＤ）２种形式存在，表达产物具有类似于天然ＮＤＶＨＮ蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性，且这２种活性均可被ＮＤＶＨＮ特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明：用重组病毒免疫４周龄ＳＰＦ鸡的ＥＬＩＳＡ抗体水平和血凝抑制效价均高于ＦＰＶ接种组，但低于ＬａＳｏｔａ弱毒活疫苗接种组。以ＮＤＶ强毒株Ｆ４８Ｅ９攻毒发现：接种重组病毒１０６ｐｆｕ／只时，保护力可达８０％，而１０４ｐｆｕ／只时，保护率仅为６０％，这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用，且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN基因 重组禽痘病毒

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以GPT和GFP为双重筛选标记的禽痘病毒转移载体的构建及鉴定 被引量：7

14

作者 王艳丽 李俊辉 +4 位作者 姜永萍 夏俊 裴磊 冉多良 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期501-504,共4页

为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期... 为研制和开发以禽痘病毒为载体的重组病毒疫苗,本研究构建了禽痘病毒通用转移载体pSY681-gfp-gpt,该载体含有gfp和gpt2种报告基因及背对的痘苗病毒晚期启动子P11和早期启动子P7.5,P11启动gfp和gpt两个基因,P7.5用于启动外源基因,在早期启动子P7.5下游引入NotⅡ和AflⅡ两个酶切位点,用于外源基因的插入。为检测禽痘病毒转移载体pSY681-gfp-gpt的有效性,将H9亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)的HA基因插入到该载体中构建转移载体pSY681-gfp-gpt-HA9,将转移载体转染已感染禽痘病毒S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞,利用gfp和gpt同时进行双重筛选、数轮蚀斑纯化后获得了重组病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,通过PCR、westernblot鉴定,结果证明,获得了能稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒rFPV-gpt-gfp-HA9,为今后重组禽痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 重组禽痘病毒 绿色荧光蛋白 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶 HA基因

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GPMV HN基因于禽痘病毒载体中的构建与表达 被引量：2

15

作者 杨玉菊 李曦 +4 位作者 王君伟 马德滨 魏红 吴伟峰 吴疆 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期86-90,共5页

本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒主要保护性抗原基因-HN基因和报告基因-LacZ基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体与禽痘病毒FPV-017共感染鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEF)细胞,... 本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒主要保护性抗原基因-HN基因和报告基因-LacZ基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体与禽痘病毒FPV-017共感染鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEF)细胞,通过蓝白筛选获得重组病毒;间接免疫荧光试验结果显示重组禽痘病毒中HN基因在CEF细胞中获得表达,并且表达产物具有良好的反应原性;为进一步的重组禽痘病毒的免疫保护性的研究奠定基础。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 HN基因 重组禽痘病毒

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共表达H5、H7亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒构建 被引量：2

16

作者 王振国 金宁一 +4 位作者 马鸣潇 费东亮 贾雷立 金扩世 尹革芬 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期408-413,共6页

以鸡痘病毒（FPV）疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素（AIV HA）基因串联后（拥有同一个阅读框）和鸡白细胞介素-18（IL-18）基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子1（P7.5... 以鸡痘病毒（FPV）疫苗株为载体,将H5和H7亚型禽流感病毒血凝素（AIV HA）基因串联后（拥有同一个阅读框）和鸡白细胞介素-18（IL-18）基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子1（P7.5）下游,构建了携带AIV HA基因和鸡白细胞介素-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-H7-IL18;用相同的方法构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5-IL18;将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子（ATI-P7.5×20）下游,构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行三次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因、H7亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出H5HA-H7HA融合蛋白基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-H7HA-IL18,H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18以及单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA.这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础. 展开更多

关键词 禽流感病毒 血凝素基因 重组禽痘病毒 鸡白细胞介素-18

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表达鹅副粘病毒F基因的禽痘重组病毒构建

17

作者 杨玉菊 王君伟 +1 位作者 马德滨 李俊艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期430-433,共4页

本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒(GPMV)主要保护性抗原F基因和LacZ报告基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体转染禽痘病毒(FPV)017株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白筛选获得重组病毒;West... 本研究利用基因重组技术构建含有鹅副粘病毒(GPMV)主要保护性抗原F基因和LacZ报告基因的重组禽痘病毒转移载体;利用脂质体介导的方法将所构建的转移载体转染禽痘病毒(FPV)017株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白筛选获得重组病毒;Western blot和间接免疫荧光试验结果显示重组禽痘病毒中F基因在CEF中获得表达,并且表达产物具有良好的反应原性;本研究为进一步的研究重组禽痘病毒的免疫保护性奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅副黏病毒 F基因 重组禽痘病毒

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态 被引量：2

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作者 智海东 王云峰 +5 位作者 孙永科 张晶 王玫 彭金美 刘永刚 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期535-538,共4页

采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的... 采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的变化动态进行监测。重组疫苗和禽痘疫苗免疫之后,CD8+和TCRγδ+的细胞数先升高后回落;在NDV强毒攻击之后,ND疫苗免疫组的TCRγδ+数量升高,rFPV-gB-F免疫组的三种细胞数量在第1周都下降,随后升高;ILT疫苗在免疫后的第1周,CD4+细胞数量下降。结果提示rFPV-gB-F可以诱发相应的细胞免疫应答,但是有关传染性喉气管炎病毒导致的细胞免疫需要进一步的研究。 展开更多

关键词 传染性喉气管炎 新城疫 重组禽痘病毒 外周血T淋巴细胞

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表达重组鸡新城疫病毒免疫原蛋白基因的研究 被引量：1

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作者 刘惠莉 刘洪云 +2 位作者 曹殿军 孙凤萍 顾庆国 《上海农业学报》 CSCD 1999年第3期58-61,共4页

以 Ｎ Ｄ Ｖ Ｈ Ｎ 基因重组禽痘病毒载体与禽痘病毒转染液为材料，以载体质粒的 Ｌａｃ Ｚ报告基因为筛选标记，在含有 Ｘｇａｌ的培养基上筛选蓝色空斑的阳性重组子，对初次筛选到的蓝色空斑经过三轮蚀斑纯化（蓝斑形成率达９０％... 以 Ｎ Ｄ Ｖ Ｈ Ｎ 基因重组禽痘病毒载体与禽痘病毒转染液为材料，以载体质粒的 Ｌａｃ Ｚ报告基因为筛选标记，在含有 Ｘｇａｌ的培养基上筛选蓝色空斑的阳性重组子，对初次筛选到的蓝色空斑经过三轮蚀斑纯化（蓝斑形成率达９０％ 以上），得到了能稳定增殖的病毒子；再分别提取病毒子感染细胞、正常对照细胞基因组 Ｄ Ｎ Ａ， Ｂａｍ ＨⅠ酶切后，以 Ｄ Ｉ Ｇ 标记的探针进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测，发现重组病毒感染的细胞基因组 Ｄ Ｎ Ａ 在７ ｋｂ 处有一 Ｄ Ｎ Ａ 片段，能与 Ｈ Ｎ 特异性探针呈阳性反应，而对照细胞没有，从而利用 Ｌａｃ Ｚ报告基因、 Ｈ Ｎ 探针杂交检测，我们成功地筛选并获得了 Ｎ Ｄ Ｖ Ｈ Ｎ 基因重组禽痘病毒，为下一步的研究工作奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡新城疫病毒 重组禽痘病毒 噬斑筛选 疫苗

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赵鹏:禽白血病等垂直传播性病毒危害巨大,可从传播途径布局防控 被引量：1

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《北方牧业》 2019年第14期17-18,共2页

就动物传染病防控而言,依旧离不开切断传播途径、控制、淘汰传染源及保护易感群体这三要素,掌握基本疾病传播途径并全面切断对于实施动物疫病净化十分重要。只有充分了解相关疾病的各种传播途径并通过相关措施加以切断才能在实施净化过... 就动物传染病防控而言,依旧离不开切断传播途径、控制、淘汰传染源及保护易感群体这三要素,掌握基本疾病传播途径并全面切断对于实施动物疫病净化十分重要。只有充分了解相关疾病的各种传播途径并通过相关措施加以切断才能在实施净化过程最大程度地将带毒动物淘汰或避免漏检动物的扩大传播。 展开更多

关键词 禽白血病 垂直传播 生物安全体系 传播性 传播途径 外源病毒 网状内皮增生 疫病净化 重组禽痘病毒 病毒分离 鸡精液 病毒危害

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