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重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk的构建及在细胞内的热诱导表达 被引量:1
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作者 唐秋莎 陈道桢 张东生 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1132-1137,共6页
目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆... 目的:构建用于靶向基因治疗的重组真核表达质粒pHsp70-hsv-tk(pHT),体外转染SMMC-7721肝癌细胞,观察热诱导基因表达情况。方法:设计1对引物,以pHSV-106质粒为模板进行PCR扩增,将扩增产物纯化所得目的基因片段与pD3SX载体连接,转化大肠杆菌E.coliDH5α,克隆PCR法筛选菌落,测序鉴定后大量抽提质粒。磁性转染法将pHT导入SMMC-7721,加热处理后,用RT-PCR法检测tk基因的整合。结果:获得重组的hsv-tk基因条带。结论:成功构建了pHT质粒,可用于进行靶向性基因治疗研究。 展开更多
关键词 表达 pHsp70-hsv-tk 构建 热诱导表达 重组真核表达质粒
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βhCG-CTP/pcDNA3重组真核表达载体的构建及表达
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作者 张力 吴玉章 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期24-27,共4页
目的 克隆并表达 βhCG CTP基因片端 ,探讨采用 βhCG CTP基因片段免疫小鼠进行免疫避孕的可能性。 方法 采用化学合成法得到含有 βhCG CTP基因片段 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA3中 ,然后转化大肠杆菌DH5α ,利用脂质体介导将pcDNA3 ... 目的 克隆并表达 βhCG CTP基因片端 ,探讨采用 βhCG CTP基因片段免疫小鼠进行免疫避孕的可能性。 方法 采用化学合成法得到含有 βhCG CTP基因片段 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA3中 ,然后转化大肠杆菌DH5α ,利用脂质体介导将pcDNA3 /βhCG CTP重组质粒表达载体转染到COS 7细胞 ,免疫组化法检测 βhCG CTP基因在哺乳动物细胞中的表达情况。结果 重组质粒经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切和测序证实插入序列与预期设计完全一致 ;利用脂质体介导将pcDNA3 /βhCG CTP重组质粒表达载体导入COS 7细胞 ,获得了 βhCG CTP的瞬时表达。 结论 成功构建了 βhCG CTP真核表达载体pcDNA3 /βhCG CTP ,该载体能在哺乳动物细胞中正确表达 ,表达产物 βhCG CTP能够被抗 βhCG抗体所识别。 展开更多
关键词 人绒毛膜促性腺激素β亚基羧基末端37肽 重组真核表达质粒
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鸡柔嫩艾美耳球虫HP基因的真核表达及其对鸡巨噬细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 许中衎 王黎霞 +5 位作者 张榕珍 张一弛 芳卉 潘晨帆 张建军 安健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期34-38,42,共6页
HP基因编码蛋白是本实验室近期发现的一种鸡柔嫩艾美耳球虫的外分泌蛋白。本试验旨在构建重组荧光真核表达质粒pEGFP-HP,将其转染至细胞内,以此来分析HP基因对宿主细胞凋亡的影响。以柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子cDNA为模板进行PCR扩增,... HP基因编码蛋白是本实验室近期发现的一种鸡柔嫩艾美耳球虫的外分泌蛋白。本试验旨在构建重组荧光真核表达质粒pEGFP-HP,将其转染至细胞内,以此来分析HP基因对宿主细胞凋亡的影响。以柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子cDNA为模板进行PCR扩增,然后克隆至荧光真核表达质粒pEGFP,构建重组荧光真核表达质粒pEGFP-HP,将其转染至鸡巨噬细胞(HD11),42 h后采用流式细胞术检测宿主细胞凋亡情况。菌液PCR鉴定和测序鉴定结果显示,重组荧光真核表达载体pEGFP-HP构建成功。流式细胞术检测发现,pEGFP-HP重组质粒组的早期凋亡率显著高于pEGFP空质粒组和空白对照组(P<0.01)。结果表明柔嫩艾美耳球虫HP基因会促进HD11的细胞凋亡,尤其是早期细胞凋亡。本试验为进一步研究HP基因的生物学功能及其作用机制提供了依据,且将HP基因从此命名为柔嫩艾美耳球虫凋亡诱导基因(IA)。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 HP基因 重组荧光表达质粒 细胞凋亡
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截去跨膜区对羊痘病毒P32基因免疫原性的影响 被引量:7
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作者 陈智华 陈轶霞 +3 位作者 刘俊林 乔自林 王明明 霍生东 《中兽医医药杂志》 2009年第4期30-32,共3页
关键词 山羊痘病毒 免疫原性 P32 跨膜区 基因 世界动物卫生组织 重组真核表达质粒 结构蛋白
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鸭RIG-1具有抗禽流感病毒活性
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《中国家禽》 北大核心 2014年第3期62-62,共1页
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的研究人员检测了金定鸭RIG—I(视黄酸诱导基因蛋白I)基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性。研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1,基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒p... 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的研究人员检测了金定鸭RIG—I(视黄酸诱导基因蛋白I)基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性。研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1,基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA—RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平; 展开更多
关键词 禽流感病毒 金定鸭 PCDNA3 1(+) 活性 RT-PCR方法 组织特异性表达 重组真核表达质粒 中国农业科学院
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