表达猪圆环病毒2d型Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒的构建

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作者 焦显芹 马晓 +3 位作者 田润博 刘颖 马世杰 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2278-2286,共9页

【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以P... 【目的】利用同源重组技术和CRISPR/Cas9基因编辑技术,获得表达猪圆环病毒2d型(PCV2d)Cap蛋白的重组猪伪狂犬病病毒(PRV),为开发预防和控制PCV2d和PRV感染的疫苗提供技术支持。【方法】基于PCV2d KF1株ORF 2基因序列设计1对特异引物,以PCV2d KF1株DNA为模板扩增ORF 2基因。经限制性内切酶Bam HⅠ酶切后将ORF 2基因引入到含有绿色荧光蛋白(EGFP)基因的PRV转移载体pG中,获得重组质粒pG-PCV2d-EGFP。运用转染试剂ZLip2000将质粒pG-PCV2d-EGFP和PRV三基因缺失毒株gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)PRV NY DNA共转染至ST单层细胞中拯救重组病毒,并利用CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除重组病毒中EGFP基因。经EGFP基因测序、PCR和Western blotting对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经8轮绿色荧光蚀斑筛选,纯化得到重组病毒rPRV-PCV2d-EGFP。CRISPR/Cas9 EGFP基因双敲除质粒敲除EGFP基因后,经3轮筛选没有绿色荧光的蚀斑,获得重组病毒rPRV-PCV2d。EGFP基因测序结果表明,rPRV-PCV2d中EGFP基因被剪截了1251 bp,PCR和Western blotting结果显示,rPRV-PCV2d携带的ORF 2基因能在ST细胞中转录与表达。【结论】本研究成功构建表达PCV2d Cap蛋白的重组病毒rPRV-PCV2d,为进一步研制重组活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 重组病毒活载体疫苗

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动物病毒重组活载体疫苗研究进展 被引量：18

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作者 谢青梅 封柯宇 沈勇 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期102-110,共9页

病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活... 病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。 展开更多

关键词 活载体疫苗 动物病毒 兽医疫苗学 重组病毒疫苗 免疫

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性评价 被引量：14

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作者 王云峰 智海东 +5 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期426-429,共4页

为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有... 为了检测表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒 (rFPV -ILTVgB)的稳定性 ,我们对重组病毒进行 6代和 16代克隆纯化 ,对纯化后的病毒通过转瓶连续培养传 2 0代。结果发现第 6代纯化病毒 (rFPV -ILTVgB -C6)在传代过程中有白斑出现 ,说明病毒纯度不够 ;经过 16代纯化的病毒 (rFPV -ILTVgB -C16)对细胞的嗜性加强 ,病毒的效价进一步升高 ,2 0代传代后蓝斑率仍然为 10 0 % ,PCR的检测进一步证明插入的外源基因能在病毒的长期传代过程中稳定地遗传。抽取病毒细胞传代过程中的第 5 ,10 ,15 ,2 0代次的病毒翅膀内侧无血管处皮下接种 2周龄SPF鸡 ,2 0天后分为两组 ,分别用传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株攻击 ,结果不同代次的重组病毒均可以使免疫鸡抵抗传染性喉气管炎病毒和鸡痘病毒强毒的攻击。鸡体内病毒传代试验表明 ,重组病毒在接种部位仅存在 6天 ,之后就检测不到病毒 ,重组病毒通过SPF鸡连续传代 ,不存在病毒返祖的可能。由此可以得出一个结论 ,rFPV -ILTVgB在结构上和免疫原性上是稳定的 ,无论是在体外传代 ,还是在体内均可以稳定遗传 ,不存在因为接种重组疫苗而给免疫鸡群带来安全威胁的可能 ,完全可以作为疫苗毒株进行商品化开发。 展开更多

关键词 传染性喉气管炎病毒 鸡痘 重组鸡痘病毒疫苗 遗传稳定性

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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗的安全性试验与最小免疫剂量测定 被引量：12

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作者 王云峰 智海东 +5 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期441-444,共4页

将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5... 将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV_ILTVgB)通过鸡胚成纤维细胞培养 ,加入适当的保护剂制成冻干疫苗。取 3批冻干疫苗 ,生理盐水稀释后分别经翅内侧无血管处皮下接种 14日龄和 5 0日龄SPF鸡 ,接种剂量为 5× 10 6 PFU ,接种后 3天出现局部反应 ,5天局部肿胀达到最大 ,接种鸡无其它全身反应 ,精神、食欲以及发育等均不受影响 ,说明重组病毒对试验鸡是安全的。取其中的 2 0 0 0 0 3批疫苗 ,用生理盐水作 2 10 -2 ～ 2 10 -5稀释后 ,翅内侧无血管处皮下接种 4 0日龄SPF鸡 ,免疫后 4周分别攻击传染性喉气管炎病毒WG株和鸡痘病毒 10 2株 ,结果表明 ,重组病毒对试验鸡翅内侧皮下接种能产生良好的免疫力 ,在接种剂量为 2 10 -2 ～ 2 10 -40 .1ml/鸡的范围内可以使全部试验鸡产生局部反应 ,当接种剂量为 2 10 -50 .2ml/鸡时可以使部分试验鸡 ( 5 /15 )产生局部反应 ,鸡体对重组疫苗的最小反应剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)。攻毒试验结果进一步证明 ,当接种剂量为 2 10 -40 .1ml(相当于 10 0 0PFU)时可以使免疫鸡产生可靠免疫力 ,抵抗传染性喉气管炎病毒WG株强毒和鸡痘病毒 10 2株的攻击 ,降低鸡群的发病率和病死率。这些结果说明 。 展开更多

关键词 传染性喉气管炎 鸡痘 重组鸡痘病毒疫苗 最小免疫剂量 安全性试验

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在兔体上的免疫原性分析 被引量：3

5

作者 张小苗 张恒 +6 位作者 杨玉艾 张志 孙健 陶晓珊 李晓成 范根成 孙永科 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期8-12,共5页

研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.... 研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.0 IFU组和猪瘟脾淋苗组均未出现定型热反应(0/4),脾重/体重指数比值分别为0.055%、0.05%,脾组织切片均未见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法均未检测到脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒;106.0 IFU组3/4出现定型热反应,脾重/体重指数比值为0.074%,脾组织切片3/4可见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法可检测到3/4脾脏有猪瘟脾淋苗病毒;105.0 IFU组和对照组全部出现定型热反应(4/4),脾重/体重指数比值分别为0.099%和0.102%,脾组织切片充血、淤血严重,用RT-PCR和IFA方法均可检测到兔子脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒。结果表明与对照组均不保护和猪瘟脾淋苗组全部保护相比,rAd-E0-E2在兔体的最小免疫保护剂量为107.0 IFU,本研究成功完成了rAd-E0-E2在兔体上的免疫原性分析。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 兔 免疫原性

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共表达FMDV P1-2A和3C重组鸡痘病毒疫苗与核酸疫苗的实验免疫研究 被引量：4

6

作者 张洪勇 金宁一 +4 位作者 葛淑敏 尹革芬 郑敏 李子健 江文正 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期20-23,共4页

将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游，构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、... 将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因分别插入到鸡痘病毒表达载体质粒pUTA-16Lac Z的复合启动子和单一启动子的下游，构建共表达重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL3CP1，与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞，经RT-PCR、IFA及Western blotting检测，成功获得能正确表达目的蛋白的重组鸡痘病毒株vU-TAL3CP1。并与FMDV重组核酸疫苗免疫小鼠实验表明，各实验免疫组均能诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫反应，其中以重组鸡痘病毒与核酸疫苗联合免疫效果好于其它实验各组。 展开更多

关键词 FMDV 重组鸡痘病毒疫苗 重组核酸疫苗 免疫原性 口蹄疫病毒

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禽痘病毒感染对禽流感重组禽痘病毒疫苗免疫效力的影响 被引量：2

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作者 乔传玲 李呈军 +3 位作者 于康震 田国彬 刘宝全 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期154-156,共3页

表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FP... 表达禽流感病毒 (AIV)HA和NA基因的重组禽痘病毒rFPV_HA_NA能够诱导鸡体产生 10 0 %抵抗高致病性禽流感病毒 (HPAIV)H5N1的攻击。而当鸡群已进行禽痘疫苗免疫或者感染了禽痘病毒的情况下 ,此重组疫苗的免疫效力如何 ?首先用禽痘病毒S_FPV_0 17人工感染SPF试验鸡 ,既而在感染后的不同间隔时间接种重组疫苗 ,免疫后检测鸡群的HI抗体水平 ,同时用 10 0LD50 的HPAIVH5N1进行攻击。结果重组疫苗免疫与禽痘病毒人工感染时间间隔在 4周 (或以上 )时 ,预先感染禽痘病毒对重组疫苗的免疫效力不构成影响 ,对禽流感的保护力为 10 0 % ,而间隔时间在 1、2、3周时 ,重组疫苗的免疫保护效力则受到不同程度的影响。 展开更多

关键词 禽痘病毒 禽流感 重组禽痘病毒疫苗 免疫效力

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抗禽流感或传染性喉气管炎两种重组鸡痘病毒疫苗联合免疫的相互影响 被引量：3

8

作者 王云峰 石星明 +3 位作者 王玫 杨春富 徐灵龙 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第1期7-14,共8页

"表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV-AI)疫苗"以及"表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILT)疫苗"均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干... "表达H5N1禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV-AI)疫苗"以及"表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-ILT)疫苗"均已在实现商业化生产。由于两种疫苗使用了相同的载体病毒,如何使用才能减少相互干扰而产生最好的免疫效果。本研究设计了三个试验组:1)免疫rFPV-AI后间隔4周接种rFPV-ILT;2)rFPV-AI和rFPV-ILT混合后接种;3)将rFPV-AI和rFPV-ILT分别在两个翅膀同时免疫。结果表明,试验鸡接种rFPV-AI后4周接种rFPV-ILT,对传染性喉气管炎病毒WG株攻击的保护率为60%(6/10),低于rFPV-ILT单独免疫组的保护率(100%,10/10);rFPV-AI和rFPV-ILT混合后免疫组对禽流感病毒强毒攻击的保护率为80%(8/10),对传染性喉气管炎病毒强毒攻击的保护率为70%(7/10),而rFPV-AI和rFPV-ILT分两点同时接种对两种病毒攻击均能产生完全保护。本试验结果建议将这两种相同载体的重组病毒疫苗分两点同时接种以避免相互之间的干扰。 展开更多

关键词 禽流感 传染性喉气管炎 重组鸡痘病毒疫苗 联合免疫

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抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验 被引量：7

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作者 王云峰 智海东 +6 位作者 王玫 孙永科 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-54,共4页

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后... 疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病。在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件。在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护。在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体。这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播。 展开更多

关键词 传染性喉气管炎病毒 鸡痘病毒 抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗 同居感染试验 免疫接种

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对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)在家禽免疫效果方面的调研 被引量：6

10

作者 何长生 朱良强 +8 位作者 郑举 占松鹤 江定丰 刘华 王非 王军 曹晋蓉 洪功飞 袁松 《中国兽药杂志》 2008年第7期30-32,共3页

2006-2007年，通过检测免疫注射H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗（Re-1株）后3～4周的444个鸡场、66个鸭场和28个鹅场共计16140份血清中H5亚型禽流感血凝抑制抗体水平，比较A、B、c、D、E5个不同厂家的疫苗对鸡、鸭、鹅免疫效果。结果显示... 2006-2007年，通过检测免疫注射H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗（Re-1株）后3～4周的444个鸡场、66个鸭场和28个鹅场共计16140份血清中H5亚型禽流感血凝抑制抗体水平，比较A、B、c、D、E5个不同厂家的疫苗对鸡、鸭、鹅免疫效果。结果显示：重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型，Re-1株）对鸡的免疫效果明显好于鸭和鹅；不同厂家疫苗质量和免疫效果有差异，其中A厂疫苗质量和免疫效果最好。 展开更多

关键词 H5N1重组禽流感病毒灭活疫苗(Re-1株) 免疫效果调研

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抗传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗 被引量：3

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作者 王云峰 智海东 +4 位作者 王玫 仇华吉 周艳君 田志军 童光志 《畜牧兽医科技信息》 2003年第8期4-7,共4页

前言 1925年鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害.疫苗接种是防制本病的一条切实可行... 前言 1925年鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngotracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害.疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施.目前,国内外用于预防ILT的都是中强毒力的活疫苗,这些疫苗毒力普遍偏强,接种后反应大.这些疫苗与强毒株一样也能导致持续感染,在鸡体间传播可使毒力返强,使免疫鸡群有可能成为潜在的传染源.而且疫苗免疫后没有一个有效的诊断方法以区别免疫鸡和自然感染鸡,因此,这些疫苗只能限于在传染性喉气管炎流行地区使用. 展开更多

关键词 鸡 传染性喉气管炎 重组鸡痘病毒基因工程疫苗 母源抗体 免疫效力 保存期

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1日龄雏鸡免疫鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗安全性及效力的研究 被引量：3

12

作者 高晓磊 韩明宝 +5 位作者 刘思桐 赵丽霞 朱秀同 刘浩 郁宏伟 谢康 《中国动物保健》 2019年第4期57-58,共2页

将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产... 将鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同免疫途径免疫1日龄雏鸡,评价其安全性和效力。以10羽份/只剂量接种后,两组鸡均未观察到全身反应。以1羽份/只剂量接种后28d攻毒,两种免疫方式均可以使免疫鸡产生较强免疫力,能够抵抗传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株强毒和鸡痘病毒(FPV)102株的攻击。以上结果显示,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗以皮下注射和皮下刺种2种不同途径免疫1日龄雏鸡,具有良好的安全性和有效性。 展开更多

关键词 1日龄雏鸡 鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗 安全性 效力

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传染性法氏囊病活疫苗对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1)免疫效果的影响

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作者 王忠山 崔蕾 +1 位作者 刘向鹏 杜薇薇 《中国家禽》 北大核心 2014年第2期54-55,共2页

为评价鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1)免疫效果的影响,分别对蛋雏鸡和麻花肉雏鸡于14日龄同时接种鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)和重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1),设空白对照组(均不免疫禽流感和传染性... 为评价鸡传染性法氏囊病中等毒力活疫苗对重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1)免疫效果的影响,分别对蛋雏鸡和麻花肉雏鸡于14日龄同时接种鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)和重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1),设空白对照组(均不免疫禽流感和传染性法氏囊病疫苗)和免疫对照组(只免疫重组禽流感病毒灭活疫苗),进行法氏囊病理变化观察和血清H5N1亚型禽流感病毒抗体检测。结果显示,鸡传染性法氏囊病活疫苗均可对蛋雏鸡和麻花肉雏鸡引起法氏囊炎性反应,但对重组禽流感病毒灭活疫苗免疫抗体的产生无显著影响。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株) 重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1) 抗体

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H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制 被引量：4

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作者 叶贺佳 仇微红 +6 位作者 亓文宝 万红 李敏 许利娜 胡秀美 廖明 梁昭平 《动物医学进展》 北大核心 2019年第8期44-48,共5页

利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液... 利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。 展开更多

关键词 重组禽流感病毒灭活疫苗 H7N9亚型 研制

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二种重组禽流感病毒灭活疫苗免疫效果的对比试验

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作者 徐新红 刘佩红 +1 位作者 屠益平 卫欣荣 《上海畜牧兽医通讯》 2007年第5期33-33,共1页

关键词 重组禽流感病毒灭活疫苗 对比试验 免疫效果 世界动物卫生组织 公共卫生意义 人畜共患病 动物传染病 经济损失

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重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re1株)有效期的探讨

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作者 胡井雷 刘景利 +2 位作者 徐姗姗 杨帆 李继昌 《畜牧兽医科技信息》 2012年第6期30-31,共2页

禽流感是一种严重危害养殖业发展并对人类健康存在巨大威胁的传染病。近几年在世界范围内发生了多起禽流感疫情，在国内也有部分省市发生过禽流感疫情。由于我国政府采取了积极有效的防疫措施，禽流感没有给我国养殖业造成较大的损失。... 禽流感是一种严重危害养殖业发展并对人类健康存在巨大威胁的传染病。近几年在世界范围内发生了多起禽流感疫情，在国内也有部分省市发生过禽流感疫情。由于我国政府采取了积极有效的防疫措施，禽流感没有给我国养殖业造成较大的损失。而在这些积极有效的防治措施里面，高覆盖率的免疫接种是其中最为有效的措施之一，是阻止禽流感疫情发生的重要防线。由于我国禽类养殖量非常巨大，需要的禽流感疫苗的数量也就非常大，就经常需要各个疫苗生产厂家进行满负荷式的生产，即使是这样也经常满足不了市场的需要，这样各个厂家不得不进行前瞻性的战略储备。由于疫情紧张的时候市场供应经常出现断货现象，各地的兽医防疫部门为了防止疫情出现时没有足够的疫苗，也都留有一定量的储备。由于目前禽流感疫苗绝大多数为油乳剂灭活疫苗，标注的有效期为一年，在疫苗需求不紧张时期所生产的禽流感疫苗经过各个阶段的储备之后，往往就到了一年的有效期。有的省份招标疫苗要求有效期在6-8个月以上，厂家的疫苗生产计划安排十分困难，对于有效期短的禽流感灭活疫苗根本无法销售出去，不得不进行报废销毁处理，这样就造成了很大的疫苗浪费和经济损失。 展开更多

关键词 重组禽流感病毒灭活疫苗 有效期 H5N1亚型 禽流感疫情 禽流感疫苗 油乳剂灭活疫苗 禽流感灭活疫苗 生产厂家

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猪流行性腹泻新型疫苗的研究进展

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作者 刘晓琳 张传健 +6 位作者 郭仕琦 郭容利 陈赛赛 王志胜 姜平 王继春 白娟 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期229-236,共8页

猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、腹泻脱水和对哺乳仔猪致死率高为特征的高度接触性猪肠道传染病,给猪场造成严重的经济损失。2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株在我国猪群中暴发,对1周龄内仔猪致死率可达100%。传统的疫苗诱导... 猪流行性腹泻(PED)是一种以呕吐、腹泻脱水和对哺乳仔猪致死率高为特征的高度接触性猪肠道传染病,给猪场造成严重的经济损失。2010年以来,猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株在我国猪群中暴发,对1周龄内仔猪致死率可达100%。传统的疫苗诱导抗体水平低,黏膜免疫反应不足,已不能提供充足的保护,因此,新型疫苗的研制是控制变异株的关键。目前研制的亚单位疫苗使用安全而免疫原性有待提高;重组病毒活载体疫苗可表达外源抗原,但免疫效力不稳定;细菌活载体疫苗口服可刺激黏膜免疫,但存在毒力返强风险;转基因植物疫苗表达产物安全可靠而产量不高;核酸疫苗花费低、制备简单但输入基因存在不可控性。本文从PED亚单位疫苗、重组病毒活载体疫苗、细菌活载体疫苗、转基因植物疫苗以及核酸疫苗五个方面进行综述,以期为PED的防控提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 亚单位疫苗 重组病毒活载体疫苗 细菌活载体疫苗 转基因植物疫苗 核酸疫苗

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微量鲎试剂动态显色法定量检测重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)细菌内毒素的研究 被引量：13

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作者 刘骅 王花花 +5 位作者 王珺 宫文武 丁震 孙备 许雷鸣 蒲江 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1110-1113,共4页

目的研究微量动态显色法用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)中细菌内毒素定量检测的可行性。方法使用微量动态显色法鲎试剂,建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预实验确定稀释倍数,测定供试品溶液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,完成... 目的研究微量动态显色法用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)中细菌内毒素定量检测的可行性。方法使用微量动态显色法鲎试剂,建立细菌内毒素标准曲线,通过干扰预实验确定稀释倍数,测定供试品溶液中外加内毒素的回收率进行干扰试验,完成供试品中细菌内毒素含量的定量检测试验。并与凝胶法试验结果进行比较。结果标准曲线的线性范围为0.02~2.0EU·mL^(-1),回归方程为lgT=-0.3027 lgC+2.8587,r=0.9989,供试品在稀释40倍时均对反应无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%范围内,三批供试品的内毒素定量检测结果均符合规定。检测结果与凝胶法一致,符合标准规定。结论微量动态显色法可用于重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)细菌内毒素定量检测,结果准确,灵敏度高,过程可控。 展开更多

关键词 重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞) 细菌内毒素检查法 微量动态显色法 内毒素定量检测 凝胶法 干扰实验

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表达猪瘟病毒E0-E2蛋白的重组腺病毒疫苗免疫效力研究 被引量：2

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作者 梁易晓 张会 +4 位作者 王志鹏 杨玉艾 范根成 孙永科 张恒 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期377-382,共6页

为研究重组猪瘟腺病毒活载体疫苗(rAd-E0-E2株)对猪的免疫保护效力,并确定其最小免疫剂量及免疫期,本研究将40头健康仔猪随机分为8组,每组5头,1~5组为最小免疫剂量测试组,分别接种rAd-E0-E2株活疫苗1/20头份、1/10头份、1/2头份、1头份(... 为研究重组猪瘟腺病毒活载体疫苗(rAd-E0-E2株)对猪的免疫保护效力,并确定其最小免疫剂量及免疫期,本研究将40头健康仔猪随机分为8组,每组5头,1~5组为最小免疫剂量测试组,分别接种rAd-E0-E2株活疫苗1/20头份、1/10头份、1/2头份、1头份(1.58×107.0IFU),另设生理盐水对照组。于免疫后7 d、14 d收集血清,采用ELISA方法检测猪瘟病毒抗体,免疫后14 d攻毒;6~8组为免疫期组,分别接种1头份的rAd-E0-E2株活疫苗和1头份的猪瘟活疫苗(脾淋源,C株),于免疫后7 d、14 d、21 d、30 d、60 d、90 d、120 d、150 d、180 d、210 d收集血清,采用ELISA方法检测猪瘟病毒抗体,免疫后7个月攻毒。所有试验组猪攻毒后监测体温变化,观察猪瘟临床症状和剖检病变。最小免疫剂量检测结果显示,1/20头份剂量组攻毒后1/5保护,4/5出现高热稽留、典型CSF症状和剖检病变;1/10头份、1/2头份和1头份剂量组攻毒后均5/5保护,体温无明显变化,无猪瘟临床症状和剖检病变。免疫期结果显示,免疫组攻毒后均为5/5保护,且r Ad-E0-E2株免疫后7个月抗体水平高于C株,阴性对照组猪攻毒后均发病。综上所述,疫苗的最小免疫剂量为1/10头份(1.58×106.0IFU),考虑到临床实际应用影响因素较多,为确保免疫效果,将疫苗的使用剂量定为最小免疫剂量的10倍,即1头份。r Ad-E0-E2株活疫苗免疫猪1头份后免疫期至少为7个月。本研究为r Ad-E0-E2株后续应用提供了参考依据。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2蛋白 重组腺病毒疫苗 最小免疫剂量 免疫期

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的存留时间分析 被引量：1

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作者 熊贝嘉 张会 +3 位作者 孙永科 范根成 张恒 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期49-53,共5页

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd... 研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 存留规律

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