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转化生长因子β_1启动子质粒重组体的构建及活性研究 被引量:8
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作者 包广宇 高春芳 +1 位作者 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期638-641,共4页
目的探讨调控TGF-β1基因高水平转录的启动片段。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF-β1基因转 录起始位点上游5′端-1328~+812bp的片段中不同长度的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因 的质粒pCAT3-enhan... 目的探讨调控TGF-β1基因高水平转录的启动片段。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF-β1基因转 录起始位点上游5′端-1328~+812bp的片段中不同长度的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因 的质粒pCAT3-enhancer重组成5个重组体,并将其转染至大鼠肝星状细胞株中,测定细胞的CAT的表达水平并比较各重组体 的启动子活性。结果:-308~+812bp序列具有较强的启动活性,-611~+812bp次之,其他几个重组体的启动活性从高到 低的排序依次为-1328~+812bp、-867~+812bp、+227~+812bp。结论:TGF-β1基因启动子片段中,-308~+812bp、 -611~+812bp、-1328~+812bp重组体具有较强的启动活性,是进一步研究人TGF-β1基因转录调控的重要靶序列。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 启动子 质粒重组 构建 活性
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人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化 被引量:8
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作者 贾维茜 赵玉鸣 葛立宏 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期680-684,共5页
目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法:分离培养人健康第三... 目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factorβ1,rh TGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法:分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1μg/L、6μg/L、10μg/L的rh TGF-β1,CCK-8(cell counting kit-8)法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出最佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)光密度值,二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标。茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rh TGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用。结果:牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6μg/L rh TGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6μg/L rh TGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6μg/L rh TGF-β1组总蛋白含量为(2 775.46±83.54)mg/L,对照组为(1 432.20±110.83)mg/L(P<0.05);ALP相对光密度值,6μg/L rh TGF-β1组较对照组提高了6倍。茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6μg/L rh TGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05,P<0.05。结论:6μg/L rh TGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 重组转化生长因子β1 成牙本质细胞 分化
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兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究 被引量:5
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作者 张传志 周跃 +4 位作者 李长青 周琳 郭国宁 曹国勇 李华壮 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第4期280-283,i0001,共5页
目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10n... 目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。 展开更多
关键词 组织工程 细胞培养 髓核细胞 重组转化生长因子-β1
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重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响 被引量:5
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作者 林维龙 吴晓沛 +1 位作者 何薇薇 安峰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期118-123,共6页
目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、r... 目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。 展开更多
关键词 重组转化生长因子-β1 大鼠正畸牙移动模型 ERK/MAPK信号通路 成骨细胞分化
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生长分化因子(BMP11)重组质粒在工程菌株中的稳定性研究 被引量:5
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作者 郝丹 尤倩倩 +3 位作者 郝伟 梁晓琳 袁靖琳 李全阳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第19期114-117,124,共5页
为了研究重组质粒p ET28a-BMP11在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中的遗传稳定性,将重组菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a-BMP11液体转接传至100代,每隔20代取样观察菌落形态,检测菌体生长量、质粒保有率和目的蛋白表达水平,并对原代、第20代、... 为了研究重组质粒p ET28a-BMP11在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中的遗传稳定性,将重组菌E.coli BL21(DE3)/p ET28a-BMP11液体转接传至100代,每隔20代取样观察菌落形态,检测菌体生长量、质粒保有率和目的蛋白表达水平,并对原代、第20代、第60代和第100代工程菌进行了XhoⅠ和NdeⅠ双酶切验证和目的基因测序。结果显示:各代菌生长量和菌体菌落形态与原代菌株无显著差异。在不含卡那霉素的条件下,传代进行到40代时,质粒保有率和蛋白质表达水平显著下降,第100代菌的质粒保有率仅为56%。在含有卡那霉素的条件下,第80代菌仍有较高的蛋白质表达水平,第100代菌酶切图谱和目的基因序列仍与原代保持一致,质粒保有率高达96%,说明利用重组大肠杆菌工业化生产BMP11是可行的,并且在培养基中添加卡那霉素能够让重组质粒在传代过程中保持稳定,为BMP11的大规模工业化生产和新型抗衰老食品的研发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 生长分化因子11 重组质粒 工程菌株 稳定性
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雾化吸入重组人干扰素α2b对小儿呼吸道合胞病毒毛细支气管炎的疗效及其对患儿血清肺表面活性蛋白D、转化生长因子-β和白介素-4水平的影响 被引量:17
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作者 何茹 王丽 王静 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2020年第5期118-121,共4页
目的探讨雾化吸入重组人干扰素α2b(recombinant human interferon alpha2b,rhINF-α2b)对小儿呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)毛细支气管炎的疗效及其对患儿血清肺表面活性蛋白D(pulmonary surfactant protein D,SP-D... 目的探讨雾化吸入重组人干扰素α2b(recombinant human interferon alpha2b,rhINF-α2b)对小儿呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)毛细支气管炎的疗效及其对患儿血清肺表面活性蛋白D(pulmonary surfactant protein D,SP-D)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)水平的影响。方法选取2017年6月至2018年8月襄阳市中心医院收治的167例RSV毛细支气管炎患儿为研究对象,按照随机数字表法将其分为观察组(84例)和对照组(83例),对照组患儿采用常规治疗,观察组患儿在常规治疗基础上加用雾化吸入rhINF-α2b治疗。比较两组患儿治疗前后血清TGF-β、SP-D、IL-4水平和治疗后喘息改善时间、退热时间、疗效及不良反应发生率。结果观察组患儿治疗有效率显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿血清TGF-β水平均显著高于本组治疗前(均P<0.01),血清SP-D、IL-4水平均显著低于本组治疗前(均P<0.01),且观察组患儿血清TGF-β水平显著高于对照组(P<0.01),血清SP-D、IL-4水平均显著低于对照组(均P<0.01);观察组患儿喘息改善时间和退热时间均显著短于对照组(均P<0.01)。两组患儿不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ^2=0.194,P=0.660)。结论雾化吸入rhINF-α2b治疗RSV毛细支气管炎效果较好,其能有效降低患儿血清SP-D、IL-4水平,并升高TGF-β水平,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 重组人干扰素Α2B 呼吸道合胞病毒 肺表面活性蛋白D 转化生长因子 毛细支气管炎 白介素-4
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重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr^-细胞中的稳定表达和纯化
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作者 刘春凤 张宁 +2 位作者 周婷 王世媛 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期67-71,共5页
构建了含重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β... 构建了含重组人转化生长因子β1(rhTGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株.于14L细胞发酵罐进行扩大培养,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测得表达量在3mg/L左右.采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化,获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97%,得率在25%以上.通过基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhTGF-β1的分子量为25.470ku,与理论分子量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,与理论的氨基酸序列一致.rhTGF-β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性,测定其比活为3.2×107 IU/mg,与商品化的rhTGF-β1标准品相当.本研究为进一步规模化制备rhTGF-β1奠定了基础. 展开更多
关键词 重组转化生长因子β1 表达 纯化
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人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中的表达及产物纯化 被引量:1
8
作者 李校堃 吴晓萍 +3 位作者 郑青 黄亚东 许华 姚成灿 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2001年第5期98-101,共4页
目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.... 目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β1的基因工程菌 ,优化产物分离纯化的条件 .方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β1的cDNA ,将该cDNA片段插入经改造的pBV 2 2 0表达载体pBL 2的表达框架中 ,构建了表达菌株RR1/pBL 2 -TGF - β1.4 2℃温控诱导表达 .采用谷胱甘肽法 ,对重组蛋白进行复性 .通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白 .用MTT法测定重组蛋白的活性 .结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF - β1的表达量约为 15 %.重组蛋白的复性率达到30 %.经纯化获得了银染一条带的重组蛋白 .测活表明重组蛋白具有较强的生物活性 .结论 :人转化生长因子β1在大肠杆菌RR1中实现了高效表达 ,获得了具有生物活性的重组TGF - β1. 展开更多
关键词 转化生长因子β1 分离纯化 基因克隆 基因表达 重组蛋白 生物活性 大肠杆菌
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人截断型转化生长因子β受体Ⅱ真核表达载体的构建和表达
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作者 余贻汉 杨道锋 +2 位作者 谢林卡 朱慧芬 沈关心 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期130-133,共4页
目的构建无细胞内段基因的人转化生长因子βⅡ型受体(△TβRⅡ)的真核表达载体pEGFP/△TβRⅡ,转染L02细胞以表达融合蛋白EGFP/△TβRⅡ,并检测其生物学活性。方法以质粒H2-3FF为模板,用PCR方法扩增得到人转化生长因子βⅡ型受体... 目的构建无细胞内段基因的人转化生长因子βⅡ型受体(△TβRⅡ)的真核表达载体pEGFP/△TβRⅡ,转染L02细胞以表达融合蛋白EGFP/△TβRⅡ,并检测其生物学活性。方法以质粒H2-3FF为模板,用PCR方法扩增得到人转化生长因子βⅡ型受体(TpRⅡ)胞外段和跨膜段的cDNA,将该cDNA克隆到真核表达载体pEGFP-N2上,构建成pEGFP/△TβRⅡ重组质粒。经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染L02细胞,用倒置荧光显微镜观察融合蛋白EGFP的表达,并检测其生物学活性。结果L02细胞转染pEGFP/△TβRⅡ重组质粒后,在荧光显微镜下可以观察到融合蛋白EGFP的表达,所表达的蛋白能显著减轻TGF-β1对L02细胞G1~S期的阻滞作用。结论成功构建了pEGFP/△TβRⅡ重组质粒,并表达了有活性的融合蛋白EGFP/△TβRⅡ,为进一步探讨其生物学效应奠定了基础。 展开更多
关键词 转化生长因子β 受体 转染 重组
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人可溶性转化生长因子βⅡ型受体真核表达载体的构建及表达
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作者 杨小华 张立煌 +2 位作者 史丽云 姚航平 郁子扬 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2004年第6期504-508,共5页
目的 :构建人转化生长因子 β 型受体胞外区 (s TGFβR )基因的真核表达载体 ,转染真核细胞 CHO以表达 s TGFβR 蛋白 ,并检测其生物学活性。方法 :以 TGFβR 的重组质粒为模板 ,用 PCR方法扩增得到人TGFβR 胞外区 (1- 15 9位氨基酸 )... 目的 :构建人转化生长因子 β 型受体胞外区 (s TGFβR )基因的真核表达载体 ,转染真核细胞 CHO以表达 s TGFβR 蛋白 ,并检测其生物学活性。方法 :以 TGFβR 的重组质粒为模板 ,用 PCR方法扩增得到人TGFβR 胞外区 (1- 15 9位氨基酸 )的 c DNA,将该 c DNA重组到真核表达载体 p CDNA3.1/myc- his(- ) B(p CDNA)的 Eco R 和 Hind 多克隆位点上 ,构建成 p CDNA- s TGFβR 重组质粒。经双酶切和核酸测序鉴定 ,将该重组质粒转染 CHO细胞 ,用 Western blotting法检测 s TGFβR 的表达 ,并测定其生物学活性。结果 :CHO细胞转染 p CD-NA- s TGFβR 重组质粒后 ,其培养上清经 Western blotting分析 ,显示有特异性的蛋白条带 ,所表达的蛋白能明显抑制 TGFβ1对貂肺上皮细胞的增殖抑制作用。结论 :成功克隆了 s TGFβR 基因 ,并获得有生物学活性的 s TGFβR 蛋白。 展开更多
关键词 受体 转化生长因子Β 真核细胞 pCDNA3.1/myc-his(-)B 转染 CHO细胞 重组 遗传
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大鼠转化生长因子β型受体胞外区与γ干扰素融合蛋白真核表达载体的构建 被引量:1
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作者 郁子扬 张立煌 +1 位作者 姚航平 杨小华 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2005年第1期43-47,54,共6页
目的 :在哺乳动物细胞中表达有生物学活性的大鼠转化生长因子β 型受体胞外区与γ干扰素(rs TGFβR - IFNγ)融合蛋白。方法 :提取大鼠肝脏 m RNA,用 RT- PCR方法分别扩增 s TGFβR 和 IFNγ基因并克隆至同一真核表达载体 p Sec Tag2 A... 目的 :在哺乳动物细胞中表达有生物学活性的大鼠转化生长因子β 型受体胞外区与γ干扰素(rs TGFβR - IFNγ)融合蛋白。方法 :提取大鼠肝脏 m RNA,用 RT- PCR方法分别扩增 s TGFβR 和 IFNγ基因并克隆至同一真核表达载体 p Sec Tag2 A,构建 p Sec Tag2 A/rs TGFβR - IFNγ重组体 ,以脂质体转染至 CHO细胞 ,用EL ISA及 Western印迹法检测 rs TGFβR - IFNγ表达 ,并检测该融合蛋白的生物学活性。结果 :转染 p Sec Tag2 A/rs TGFβR - IFNγ的 CHO细胞培养上清表达 rs TGFβR - IFNγ融合蛋白 ,该融合蛋白具有明显的抗病毒活性 ,能拮抗 TGFβ1对 CCL- 6 4细胞的增殖抑制作用 ,能抑制 TGFβ1诱导的体外培养的 HSC活化。结论 :本实验构建的p Sec Tag2 A/rs TGFβR - IFNγ表达质粒能在哺乳动物细胞中表达具有生物学活性的 rs TGFβR - IFNγ融合蛋白。 展开更多
关键词 受体 转化生长因子Β Γ干扰素 重组融合蛋白质类 大鼠
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腺相关病毒感染GDF11对2型糖尿病大鼠血管损伤的保护作用 被引量:1
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作者 王玉琴 曹少清 +3 位作者 王张羽 李成思 叶江平 宗刚军 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期826-833,共8页
目的探讨腺相关病毒感染上调体内生长和分化因子11(GDF11)表达水平对2型糖尿病大鼠(T2DM)主动脉损伤的影响。方法随机选取9周龄雄性SD大鼠,采用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)联合诱导,建立T2DM模型。正常大鼠和糖尿病模型大鼠随... 目的探讨腺相关病毒感染上调体内生长和分化因子11(GDF11)表达水平对2型糖尿病大鼠(T2DM)主动脉损伤的影响。方法随机选取9周龄雄性SD大鼠,采用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)联合诱导,建立T2DM模型。正常大鼠和糖尿病模型大鼠随机分为5组:空白对照组(Control组)、阴性病毒对照组(NC组)、GDF11腺相关病毒组(GDF11组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+GDF11腺相关病毒组(DM+GDF11组)。喂养8周后,检测大鼠血清中胰岛素(INS)、晚期糖基化终末产物(AGES)、重组生长转化因子11(GDF11)、总胆固醇(T-CHO)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、不对称二甲基精氨酸(ADMA)、丙二醛(MDA)浓度;采用过碘酸雪夫氏染色(PAS染色)观察糖原沉积部位,苏木精-伊红染色(HE)观察血管损伤情况,扫描电镜观察血管内皮细胞和血管弹性纤维损伤情况,蛋白印迹和免疫组化检测血管损伤相关蛋白的表达水平。结果在动物实验中与Control组相比,生化指标提示:DM组大鼠血清中AGES、T-CHO、TG、LDL-C和MDA浓度升高(P<0.05),INS、GDF11、HDL-C、ADMA显著低于Control组(P<0.05),DM+GDF11组AGES和HDL-C与DM组无明显差异,T-CHO、TG、LDL-C和MDA相比较DM组降低(P<0.05),INS、GDF11和ADMA相比较DM组升高(P<0.05)。病理染色提示:DM组PAS染色提示糖原颗粒在主动脉内皮及内皮下沉积,HE染色观察到主动脉中膜增厚,内皮细胞及弹性纤维断裂走形不规则,电镜观察到DM组血管内皮损伤,弹性纤维断裂,DM+GDF11组这些变化有所减轻。蛋白印迹和免疫组化表示内皮细胞相关蛋白在DM组中表达下降(P<0.05),间充质标志物在DM组中表达升高(P<0.05),DM+GDF11组中这些蛋白有所回调,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论提高体内GDF11表达水平可以改善糖尿病导致的主动脉血管损伤,推断可能与其抑制内皮间充质转化保护血管内皮细胞的功能从而改善血管损伤有关。 展开更多
关键词 糖尿病 腺相关病毒 重组生长转化因子11 血管内皮细胞损伤 糖原沉积 链脲佐菌素
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参蛤散通过调控LOXL2/TGF-β1/IL-11信号通路抑制心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化
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作者 谢航 邱伯雍 +1 位作者 李海涛 石若玉 《浙江大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期350-359,共10页
目的:基于赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)/转化生长因子β1(TGF-β1)/IL-11信号通路探讨参蛤散对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法:将SD大鼠分为空白对照组、模型对照组、参蛤散小剂量组、参蛤散大剂量组、阳性对照组、参蛤... 目的:基于赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)/转化生长因子β1(TGF-β1)/IL-11信号通路探讨参蛤散对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法:将SD大鼠分为空白对照组、模型对照组、参蛤散小剂量组、参蛤散大剂量组、阳性对照组、参蛤散大剂量+LOXL2激活剂组,每组12只。除空白对照组外,其他组均通过冠状动脉缩窄法构建心肌梗死后心力衰竭模型。建模成功后立即给药,1次/d,持续4周。彩色多普勒超声显像仪检测大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF);酶联免疫吸附试验分析血清中IL-1β和IL-6水平;Masson染色评估大鼠心肌胶原容积分数(CVF);免疫组织化学染色检测心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)平均光密度值;定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制物1(TIMP-1)mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌组织中LOXL2、TGF-β1、IL-11蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组LVFS、LVEF降低,血清中IL-6和IL-1β水平升高,CVF、心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA平均光密度值、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达以及LOXL2、TGF-β1、IL-11蛋白表达均增加(均P<0.05)。与模型对照组比较,参蛤散小剂量组、参蛤散大剂量组、阳性对照组LVFS、LVEF升高,血清中IL-6和IL-1β水平降低,CVF、心肌组织中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA平均光密度值、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达以及LOXL2、TGF-β1、IL-11蛋白表达减少(均P<0.05)。LOXL2激活剂可逆转大剂量参蛤散对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的改善作用。结论:参蛤散可能通过调控LOXL2/TGF-β1/IL-11通路抑制心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化。 展开更多
关键词 心肌梗死 心力衰竭 参蛤散 纤维化 赖氨酰氧化酶样蛋白2/转化生长因子β1/IL-11信号通路 SD大鼠
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重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对深Ⅱ度烫伤模型大鼠创面愈合的影响 被引量:2
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作者 杨景哲 陈凤平 +2 位作者 冯欣姝 温海玲 耿琪瑛 《医药导报》 CAS 2015年第2期153-157,共5页
目的研究外用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)对深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。方法90只Wistar大鼠建立深Ⅱ度烫伤模型,分为A、B、C三组,每组30只。A组:凡士林纱布覆盖;B组:纳米银敷料覆盖;C组:rh GM-CSF涂抹创面。伤后第1,4... 目的研究外用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)对深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。方法90只Wistar大鼠建立深Ⅱ度烫伤模型,分为A、B、C三组,每组30只。A组:凡士林纱布覆盖;B组:纳米银敷料覆盖;C组:rh GM-CSF涂抹创面。伤后第1,4,7,10,14,21天,观察创面病理学改变,按照酶联免疫吸附法测定血清中表皮生长因子(EGF)水平,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测创面愈合过程中转化生长因子(TGF)-β1mRNA表达的变化。结果病理学改变:A、B、C三组均在第10天出现明显的上皮化;EGF水平逐渐上升,A组上升最慢,C组上升最快,第1,4天各组间及第7天A组与B组差异无统计学意义(P>0.05),第7天其余各组间及第10,14,21天各组间差异均有统计学意义(均P<0.05);TGF-β1mRNA相对表达量,A组、B组逐渐上升,C组在第14天达到峰值,第21天下降,第1天,B组与C组之间差异有统计学意义(P<0.05),第4天各组间差异无统计学意义(P>0.05),第7,10,14,21天各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rh GM-CSF可加速深Ⅱ度烫伤创面愈合。 展开更多
关键词 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 纳米银 烧伤创面 表皮生长因子 转化生长因子
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GDF11调控NF-κB通路影响巨噬细胞M1极化介导的炎症反应 被引量:2
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作者 肖雯 田源 +1 位作者 蒋宇 陈芳 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期342-348,354,共8页
目的探讨生长转化因子11(GDF11)对巨噬细胞M1极化介导的炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,100 ng/mL LPS+30 ng/mL IFN-γ诱导巨噬细胞M1极化,并将细胞分成对照组、LPS+IFN组、GDF11组及LPS+IFN+GDF11组。流... 目的探讨生长转化因子11(GDF11)对巨噬细胞M1极化介导的炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,100 ng/mL LPS+30 ng/mL IFN-γ诱导巨噬细胞M1极化,并将细胞分成对照组、LPS+IFN组、GDF11组及LPS+IFN+GDF11组。流式细胞术检测巨噬细胞的极化,实时PCR检测IL-6、TNF-α、NF-κB及GDF11 mRNA的表达水平,Western blotting检测细胞GDF11、NF-κB及P-NF-κB蛋白表达水平,免疫荧光检测细胞GDF11、NF-κB的蛋白表达和分布。结果与对照组相比,LPS+IFN组巨噬细胞M1极化比例增加,IL-6、TNF-α及NF-κB mRNA表达升高,GDF11 mRNA及蛋白表达降低,NF-κB、P-NF-κB蛋白表达升高,P-NF-κB/NF-κB比值升高,NF-κB入核明显(P<0.05);与对照组相比,GDF11组巨噬细胞M1极化比例、IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA表达及P-NF-κB/NF-κB比值无明显变化(P>0.05);与LPS+IFN组相比,LPS+IFN+GDF11组RAW264.7巨噬细胞M1极化比例显著降低,IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA表达降低,NF-κB、P-NF-κB蛋白表达降低,P-NF-κB/NF-κB比值降低(P<0.05)。结论GDF11可减轻巨噬细胞M1极化介导的炎症反应,其机制可能与调节NF-κB通路有关。 展开更多
关键词 巨噬细胞 极化 脓毒症 生长转化因子11
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外源性GDF11对SD大鼠动脉血管钙化的影响 被引量:1
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作者 张宸铭 刘宇 +7 位作者 盛瑛 徐佰达 靳天慧 刘叶红 马涛 王倩 徐红波 宗刚军 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第6期906-910,共5页
目的探讨外源性予以重组生长转化因子11(r-GDF11)对SD大鼠动脉血管钙化的影响。方法将SD大鼠分为钙化组、溶媒组、低浓度组、中浓度组、高浓度组5组,适应性饲养1周后,每日分别予以腹腔注射生理盐水、r-GDF11溶媒液及低、中、高浓度r-GDF... 目的探讨外源性予以重组生长转化因子11(r-GDF11)对SD大鼠动脉血管钙化的影响。方法将SD大鼠分为钙化组、溶媒组、低浓度组、中浓度组、高浓度组5组,适应性饲养1周后,每日分别予以腹腔注射生理盐水、r-GDF11溶媒液及低、中、高浓度r-GDF11,持续7周后开始诱导钙化。诱导钙化7周后取各组大鼠血液,分离其主动脉血管。采用Von kossa·HE染色观察血管钙化病理情况;采用ELISA法测定其血清中骨形态发生蛋白4(BMP4)、GDF11水平;采用Western blot法、免疫组化法测定血管中BMP4、成骨特异性转录因子2(RUNX2)等钙化标志蛋白及GDF11表达及分布。结果①钙化组及溶媒组血清BMP4、GDF11水平较低、中、高浓度组明显升高,且低、中、高浓度组血清BMP4、GDF11水平依次减少;②低、中、高浓度组较钙化组及溶媒组钙盐沉积减少,弹力纤维更为完整,且r-GDF11浓度越高,钙盐沉积越少,弹力纤维越完整;③低、中、高浓度组的钙化标志蛋白RUNX2、BMP4较钙化组及溶媒组表达降低,r-GDF11浓度越高,钙化标志蛋白表达越低,免疫组化中分布越稀少;r-GDF11浓度越高,组织中GDF11表达越高,免疫组化中分布越密集。结论外源性予以r-GDF11可以减轻SD大鼠动脉血管钙化。 展开更多
关键词 动脉钙化 外源性 重组生长转化因子11 SD大鼠
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重组人脑利钠肽对心力衰竭患者血浆TGF-β1和PDCD5抗体水平的影响 被引量:8
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作者 魏子寒 杨国杰 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第3期452-454,共3页
目的:观察重组人脑利钠肽(rhBNP)对心力衰竭患者血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞凋亡相关蛋白程序化死亡分子5(PDCD5)抗体的影响,评价rhBNP治疗心力衰竭的疗效。方法:40例心功能Ⅳ级患者,分为常规治疗组和rhBNP治疗组,每组20例。... 目的:观察重组人脑利钠肽(rhBNP)对心力衰竭患者血浆转化生长因子-β1(TGF-β1)和细胞凋亡相关蛋白程序化死亡分子5(PDCD5)抗体的影响,评价rhBNP治疗心力衰竭的疗效。方法:40例心功能Ⅳ级患者,分为常规治疗组和rhBNP治疗组,每组20例。常规治疗组按照美国心力衰竭指南给予正规抗心力衰竭治疗,rhBNP治疗组在上述正规治疗的基础上加用rhBNP1.5μg/kg静脉冲击,0.0075μg/(kg·min)维持静脉泵注24h。用酶联免疫分析法分别测定2组治疗前和停止用药后7、14和30d血浆TGF-β1和PDCD5抗体的水平。结果:2组患者血浆TGF-β1水平比较,差异具有统计学意义(F时间=585.044,F组间=40.767,P均<0.001)。2组患者血浆PDCD5抗体水平比较,差异具有统计学意义(F时间=23.615,F组间=35.654,P均<0.001)。结论:rhBNP能够使心力衰竭患者血浆中TGF-β1和PDCD5抗体的水平持续降低。 展开更多
关键词 重组人脑利钠肽 心力衰竭 转化生长因子-Β1 程序化死亡分子5
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不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶基因表达的影响 被引量:1
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作者 张鹏 李慧敏 +3 位作者 王继荣 鲁一兵 蒋秀琴 缪珩 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期51-55,共5页
目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用。方法:猪髂动脉内皮细胞分别... 目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用。方法:猪髂动脉内皮细胞分别培养于不同浓度葡萄糖(5.6,10.0,20.0,30.0mmol/L)中,用RT-PCR法检测11β-HSD1,11β-HSD2,TGF-β1,ET-1 mRNA的表达,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况。结果:高糖状态干预48h后,11β-HSD1,TGF-β1 mRNA表达随葡萄糖浓度的增加而增加,呈现一定的相关性;11β-HSD1蛋白表达随葡萄糖浓度增加而增加。采用11β-HSD1与11β-HSD2反义寡核苷酸干预后11β-HSD1与11β-HSD2 mRNA和蛋白质表达完全被抑制,同时TGF-β1的表达降低。结论:葡萄糖刺激血管内皮细胞11β-HSD1 mRNA和蛋白质表达增加,且在高糖状态下,11β-HSD1 mRNA的表达与TGF-β1RNA表达有直线相关性,11β-HSD1可能与糖尿病及其血管并发症相关。 展开更多
关键词 葡萄糖 猪髂动脉内皮细胞 11Β-羟基类固醇脱氢酶 反义寡核苷酸 转化生长因子-Β1 内皮素-1
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大鼠蛋白聚糖Ⅱ重组腺病毒载体的构建及生物学功能的鉴定 被引量:1
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作者 吴芳 姚航平 +1 位作者 董凤芹 李红 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第5期523-528,共6页
目的:构建大鼠蛋白聚糖Ⅱ(DCN)重组腺病毒载体(A d-DCN),鉴定其生物学活性。方法:用RT-PCR技术从大鼠肾脏组织mRNA中扩增获得全长DCN基因;将DCN基因克隆至腺病毒穿梭载体,与腺病毒骨架质粒在B J5183-AD-1细菌中同源重组,并转染至A d293... 目的:构建大鼠蛋白聚糖Ⅱ(DCN)重组腺病毒载体(A d-DCN),鉴定其生物学活性。方法:用RT-PCR技术从大鼠肾脏组织mRNA中扩增获得全长DCN基因;将DCN基因克隆至腺病毒穿梭载体,与腺病毒骨架质粒在B J5183-AD-1细菌中同源重组,并转染至A d293细胞,扩增病毒后,用病毒空斑形成实验检测病毒滴度,并用MTT、RT-PCR、W estern b lot对其活性及表达情况进行鉴定。结果:本实验构建的A d-DCN滴度可达1×109pfu.m-l 1,能在CHO细胞中高效表达具有生物学活性的DCN蛋白;表达产物能拮抗TGFβ1对CCL-64细胞增殖的抑制作用,TGFβ1+表达产物DCN处理组细胞增殖率明显高于TGFβ1单独处理组和TGFβ1+A d-lacz处理组[(0.5252±0.04 vs 0.2826±0.02、0.2918±0.02)OD,P<0.05],但TGFβ1+表达产物DCN处理组细胞增殖率仍低于未处理组[(0.9332±0.08)OD,P<0.05]。结论:本实验构建的DCN重组腺病毒能高效表达具有生物学活性的DCN蛋白。 展开更多
关键词 蛋白聚糖类/生物合成 腺病毒科/遗传 重组 遗传 转染 转化生长因子β/遗传学 遗传载体 细胞 培养的
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白细胞介素-11与炎症 被引量:1
20
作者 韩月芹 陈力军 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期123-124,共2页
关键词 白细胞介素-11 食品与药品管理局 重组人白细胞介素 骨髓基质细胞系 炎症 造血生长因子 生物学活性 灵长类动物 多向祖细胞 IL-11 1997年 活性研究 cDNA 巨核细胞 条件液 血细胞
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