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表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定被引量：3: 1; 作者张梦雨叶昱 +11 位作者何后军黄玉婷江宁邓佳丽曾紫怡应若嫣余巧唐玉新宋德平丁珍樊惠英黄冬艳《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期419-426,共8页; 【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒p... 展开更多; 关键词非洲猪瘟病毒重组猪痘病毒活疫苗载体 p72蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定被引量：6: 2; 作者钟罗华邓舜洲 +4 位作者胡杨徐昌满罗锋张文波陈松昌《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期279-290,共12页; 为探索猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF2基... 展开更多; 关键词猪圆环病毒2型(PCV2) 衣壳蛋白重组猪痘病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达猪圆环2型的多拷贝P28-Cap重组猪痘病毒的构建及表达量分析被引量：2: 3; 作者高映雪薛瑞 +5 位作者林敏胡换仪刘昌锦万文忠罗锋邓舜洲《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期818-828,共11页; 为探究猪痘病毒作为载体表达猪圆环病毒2型(PCV2)-Cap蛋白,插入外源基因P28-ORF2的拷贝数与PCV2-Cap蛋白表达量的关系。本试验以猪痘病毒为载体,通过双酶切连接及无缝克隆方法构建重组质粒,并纯化到了8株含不同拷贝数(1~8拷贝)P28-ORF2... 展开更多; 关键词重组猪痘病毒猪圆环病毒2型拷贝数; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的构建及其生物学特性的测定被引量：5: 4; 作者刘昌锦邓舜洲 +4 位作者罗锋钟罗华王喆高映雪刘小兰《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期828-836,共9页; 为筛选猪痘病毒(SWPV)复制非必需区并测定其缺失株的生物学特性,本研究根据同源重组原理分别针对SWPV的TK(ORF063)、ORF 121和ORF 143基因设计引物。应用重叠延伸PCR技术拼接同源重组左右臂及EGFP筛选标记表达盒,将拼接片段分别转染到感... 展开更多; 关键词重组猪痘病毒(rSWPV) 重叠延伸PCR 复制非必需区生物学特性; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定被引量：3: 1; 作者张梦雨叶昱何后军黄玉婷江宁邓佳丽曾紫怡应若嫣余巧唐玉新宋德平丁珍樊惠英黄冬艳; 机构江西农业大学动物科学技术学院江西省动物疫病防控制剂工程研究中心华南农业大学兽医学院; 出处《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期419-426,共8页; 基金江西省重点研发计划重点项目(20201BBF61004) 中央引导地方科技发展资金项目(20221ZDH04055)。; 文摘【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒pUSG11/P28-B646L,经脂质体介导转染预先感染猪痘病毒的PK15细胞,出现病变后通过绿色荧光标记筛选和纯化重组病毒。拯救的重组病毒经PCR和基因测序鉴定后,通过Western blotting和间接免疫荧光试验检测p72蛋白的表达情况,并测定重组病毒的增殖特性和遗传稳定性。【结果】重组转移质粒pUSG11/P28-B646L在PK15细胞内和SPV成功进行了同源重组,纯化得到的重组病毒含有B646L基因,且基因序列正确。Western blotting和间接免疫荧光试验结果表明,重组病毒rSPV-B646L在PK15细胞中能表达非洲猪瘟病毒p72蛋白,表达的蛋白大小正确,且能与p72单克隆抗体发生特异性反应。一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性没有明显差异。重组病毒在PK15细胞上连续传15代后,插入的外源基因没有发生突变或缺失。【结论】研究以SPV为载体,成功构建了正确表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,重组病毒在PK15细胞中有良好的遗传稳定性,B646L基因的插入没有影响重组病毒在PK15细胞上的增殖能力,表达的p72蛋白具有反应原性。研究成果为非洲猪瘟多基因重组猪痘病毒载体疫苗的研发提供依据。; 关键词非洲猪瘟病毒重组猪痘病毒活疫苗载体 p72蛋白; Keywords African swine fever virus recombinant swinepox virus live vaccine vector p72 protein; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定被引量：6: 2; 作者钟罗华邓舜洲胡杨徐昌满罗锋张文波陈松昌; 机构江西农业大学动物科学与技术学院江西金伊博生物科技有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期279-290,共12页; 基金国家自然科学基金项目(31460666) 江西省科技支撑计划项目(20132BBF60044 +1 种基金 20141BBF60039) 江西省现代农业产业技术体系建设专项资金(JXARS-03); 文摘为探索猪痘病毒(swinepox virus,SWPV)作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)疫苗载体的可行性,本试验以痘苗病毒启动子P11启动绿色荧光蛋白筛选标记,猪痘病毒TK基因为外源基因的插入位点,P28、P7.5启动子启动PCV2 ORF2基因,以猪痘病毒JX20G株为亲本病毒,采用同源重组技术分别构建了两株表达PCV2衣壳蛋白的重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C。结果显示,重组猪痘病毒rSWPV11-28C和rSWPV11-7.5C均成功表达了PCV2衣壳蛋白,表达的蛋白能与PCV2单克隆抗体6E12发生特异性反应;痘苗病毒启动子P28的启动效果明显优于P7.5,P28适合用于启动目的基因;利用重组猪痘病毒制备的PCV2灭活疫苗免疫小鼠后,rSWPV11-28C疫苗组的PCV2抗体水平与某PCV2商品疫苗相当,该重组病毒的成功构建为PCV2相关疾病及其他疫病在猪群中的防控提供了新的方向。; 关键词猪圆环病毒2型(PCV2) 衣壳蛋白重组猪痘病毒; Keywords porcine circovirus type 2 （PCV2） capsid protein recombinant swinepox virus; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达猪圆环2型的多拷贝P28-Cap重组猪痘病毒的构建及表达量分析被引量：2: 3; 作者高映雪薛瑞林敏胡换仪刘昌锦万文忠罗锋邓舜洲; 机构江西农业大学天津市北辰区养殖业发展服务中心江西金伊博生物科技有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期818-828,共11页; 基金国家自然科学基金项目(31460666) 江西省科技支撑计划项目(20132BBF60044、20141BBF60039) 江西省现代农业产业技术体系建设专项资金(JXARS-03)。; 文摘为探究猪痘病毒作为载体表达猪圆环病毒2型(PCV2)-Cap蛋白,插入外源基因P28-ORF2的拷贝数与PCV2-Cap蛋白表达量的关系。本试验以猪痘病毒为载体,通过双酶切连接及无缝克隆方法构建重组质粒,并纯化到了8株含不同拷贝数(1~8拷贝)P28-ORF2的重组猪痘病毒,基于荧光斑大小、电镜观察病毒粒子及Western blotting结果进行判断。纯化到的8株重组病毒的荧光斑直径为317.41~384.96μm,大小无明显差异。重组猪痘病毒粒子形态与亲本病毒一致。Western blotting结果为插入1拷贝P28-ORF2的重组蛋白表达量最低;随着P28-ORF2拷贝数的增加,PCV2-Cap表达量也随之增加;至插入4拷贝P28-ORF2时,PCV2-Cap表达量达到峰值;随后减少。8株重组猪痘病毒荧光斑大小无明显差异,表明猪痘病毒基因组中插入不同拷贝数P28-ORF2对重组病毒在PK15细胞内的增殖无影响。重组猪痘病毒粒子的形态未发生变化说明多拷贝外源基因的插入并未对猪痘病毒的结构造成影响。本研究结果表明,猪痘病毒为载体表达外源蛋白时,单启动子启动多拷贝外源序列能明显提高外源蛋白的表达量,插入4拷贝的外源序列为较合适的拷贝数。; 关键词重组猪痘病毒猪圆环病毒2型拷贝数; Keywords recombinant Swine pox virus Porcine circovirus type 2 copy number; 分类号 S858.28 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的构建及其生物学特性的测定被引量：5: 4; 作者刘昌锦邓舜洲罗锋钟罗华王喆高映雪刘小兰; 机构江西农业大学江西金伊博生物科技有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第3期828-836,共9页; 基金国家自然科学基金项目(31460666) 江西省科技支撑计划项目(20132BBF60044、20141BBF60039) 江西省现代农业产业技术体系建设专项资金(JXARS-03)。; 文摘为筛选猪痘病毒(SWPV)复制非必需区并测定其缺失株的生物学特性,本研究根据同源重组原理分别针对SWPV的TK(ORF063)、ORF 121和ORF 143基因设计引物。应用重叠延伸PCR技术拼接同源重组左右臂及EGFP筛选标记表达盒,将拼接片段分别转染到感染SWPV的PK15细胞。利用荧光显微镜观察标记含EGFP的单个蚀斑,筛选获取重组毒株。应用PCR及Western blotting对重组毒株进行鉴定。分别测定各毒株感染PK15细胞的蚀斑大小和皮下接种保育猪致病性。PCR结果表明,目的基因成功整合到相应位点,成功获得重组毒株rSWPV-TK、rSWPV-121和rSWPV-143;Western blotting结果显示,连续传代的重组毒株在PK15细胞上稳定表达外源蛋白。重组毒株在PK15细胞上形成的痘斑均小于亲本毒株,其中ORF121缺失株差异极显著(P<0.01)。各毒株均可导致保育猪痘斑形成,其中ORF121缺失株引起病变时间短,产生痘斑小,毒力较亲本下降。综上所述,本研究筛选到2个SWPV基因组中可供外源蛋白插入的复制非必需区ORF121和ORF143,为构建SWPV基因工程载体奠定了基础。; 关键词重组猪痘病毒(rSWPV) 重叠延伸PCR 复制非必需区生物学特性; Keywords recombinant swinepox virus(rSWPV) splicing by overlap extension PCR replication non-essential regions biological characteristics; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定	张梦雨叶昱何后军黄玉婷江宁邓佳丽曾紫怡应若嫣余巧唐玉新宋德平丁珍樊惠英黄冬艳	《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	表达猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组猪痘病毒的构建及鉴定	钟罗华邓舜洲胡杨徐昌满罗锋张文波陈松昌	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2018	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	表达猪圆环2型的多拷贝P28-Cap重组猪痘病毒的构建及表达量分析	高映雪薛瑞林敏胡换仪刘昌锦万文忠罗锋邓舜洲	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2021	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪痘病毒TK、ORF121、ORF143基因缺失毒株的构建及其生物学特性的测定	刘昌锦邓舜洲罗锋钟罗华王喆高映雪刘小兰	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2020	5	在线阅读下载PDF 职称材料