重组火鸡疱疹病毒载体疫苗研究进展 被引量：5

1

作者 刘培欣 曹殿军 《畜牧兽医科技信息》 2003年第11期19-21,共3页

养禽业对于世界经济非常重要,其中疫病的防制对养禽至关重要.采用传统方法制备的常规疫苗在疫病的防制中起了很大的作用,提高了家禽的健康水平.但是90年代以来,由于一些新的疾病出现,或者有些疾病以更强的毒力或新的临诊型出现,使得禽... 养禽业对于世界经济非常重要,其中疫病的防制对养禽至关重要.采用传统方法制备的常规疫苗在疫病的防制中起了很大的作用,提高了家禽的健康水平.但是90年代以来,由于一些新的疾病出现,或者有些疾病以更强的毒力或新的临诊型出现,使得禽病的预防更加复杂.现在除了加强常规检疫和防疫之外,学者们将研究的方向转到新型疫苗上. 展开更多

关键词 重组火鸡疱疹病毒载体 载体疫苗 构建方法 新城疫 马立克氏病 传染性法氏囊 球虫 鸡胚免疫疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达新城疫基因Ⅶ型F蛋白重组火鸡疱疹病毒的构建及免疫保护评价

2

作者 沈沁儒 申可 +2 位作者 邵红霞 秦爱建 钱琨 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期45-57,共13页

为构建以火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)为载体的表达基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组疫苗,研究将密码子优化的基因Ⅶ型NDV F基因插入转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt后,通过CRISPR/Cas9技术,将F基因插入HVT Fc126疫... 为构建以火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)为载体的表达基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组疫苗,研究将密码子优化的基因Ⅶ型NDV F基因插入转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt后,通过CRISPR/Cas9技术,将F基因插入HVT Fc126疫苗株的US2区,获得重组疫苗rHVT-Fopt。将重组疫苗接种1日龄SPF鸡,28 d后攻毒以评价该重组疫苗的免疫保护效果。结果显示:构建的转移载体质粒pT-sgA-eGFP-SV40-Fopt在CEF细胞中表达良好;该重组疫苗具有良好的遗传稳定性且与HVT Fc126株的复制能力无显著差异;F基因在各主要脏器中均有表达且能诱导较高水平的体液免疫,对NDV F48E8强毒株的攻击能产生100%的免疫保护效力。研究表明,重组疫苗rHVT-Fopt可以作为针对鸡新城疫的候选新型疫苗株。 展开更多

关键词 重组火鸡疱疹病毒 新城疫病毒 基因编辑 F蛋白 免疫保护

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗研究进展

3

作者 楚电峰 李扬 +2 位作者 于晓璐 侯玉超 孙化露 《中国动物检疫》 CAS 2024年第10期79-84,共6页

火鸡疱疹病毒因具有基因组庞大、复制非必需区域多、容纳外源基因能力强、安全性好、免疫持续时间长、相关基因操作技术成熟等众多优点成为活载体疫苗研究的热点。利用同源重组、细菌人工染色体、Fosmid和CRISPR等技术,研究人员成功构... 火鸡疱疹病毒因具有基因组庞大、复制非必需区域多、容纳外源基因能力强、安全性好、免疫持续时间长、相关基因操作技术成熟等众多优点成为活载体疫苗研究的热点。利用同源重组、细菌人工染色体、Fosmid和CRISPR等技术,研究人员成功构建了火鸡疱疹病毒的感染性克隆,并将其转染至易感细胞中拯救重组病毒。为使重组病毒高效表达外源蛋白,通常选择合适的插入位点、启动子和终止序列,并对外源基因序列进行优化处理。目前,以火鸡疱疹病毒为载体的重组疫苗在禽流感、新城疫、传染性法氏囊病、传染性喉气管炎、鹦鹉热衣原体病、艾美尔球虫病和鸭霍乱等多种疾病的预防和控制中展现出了广阔的应用前景。本文从火鸡疱疹病毒活载体疫苗的发展历程、构建方法与应用实践等方面进行综述,旨在为相关领域研究提供理论和实践指导。 展开更多

关键词 火鸡疱疹病毒 活载体疫苗 构建方法 外源基因优化 实践应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

禽流感-火鸡疱疹病毒重组活载体疫苗的研究进展 被引量：2

4

作者 郝小利 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2015年第21期48-52,共5页

禽流感(Avian influenza,AI)和马立克氏病(Marek′s disease,MD)是严重危害全球养禽业发展的两个主要病毒性传染病。目前,疫苗免疫是防控这两种病毒性疾病有效手段之一。在众多病毒活载体疫苗中,火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT... 禽流感(Avian influenza,AI)和马立克氏病(Marek′s disease,MD)是严重危害全球养禽业发展的两个主要病毒性传染病。目前,疫苗免疫是防控这两种病毒性疾病有效手段之一。在众多病毒活载体疫苗中,火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)以其独特的优势备受青睐,而以HVT表达禽流感病毒保护性抗原是目前的研究热点之一。本文对以HVT作为疫苗载体的优势和构建载体疫苗的影响因素(外源基因、启动子、复制非必需区的选择等)进行多方面分析,并对目前AI-HVT重组疫苗的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 禽流感 重组疫苗 火鸡疱疹病毒 病毒载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒构建及应用

5

作者 宋新宇 张茜 +3 位作者 贡鑫 戚亭 陈雨 车艳杰 《中国动物检疫》 CAS 2024年第9期122-128,共7页

为构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirusofturkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT... 为构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒(herpesvirusofturkey,HVT),以连续覆盖HVT全基因组的Fosmid文库为基础,利用Red/ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术,将优化的携带Pec复合启动子的HA基因插入到HVT复制非必需区HVT053与HVT054位点处的95318~95319nt之间,获得了表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组HVT(rHVT-H9-HA株),并对构建的毒株进行鉴定。结果显示,成功构建了含有HA基因的入门质粒pEntr-HA,通过Gateway克隆的LR反应将含有HA基因的表达盒转移到黏粒pFosC DEST的第53和54号基因之间形成pFosC HA;提取5个黏粒后,转染次代CEF细胞获得拯救重组病毒rHVT-H9-HA株。连续传代和动物试验结果表明,rHVT-H9-HA株毒价高,遗传稳定,可以克服母源抗体干扰,免疫持续期长,能够提供针对H9亚型禽流感的保护;同时也实现了一针防两病,效果明显优于灭活疫苗。本研究为H9亚型禽流感病毒重组HVT活载体疫苗的研制提供了技术支撑。 展开更多

关键词 重组毒株rHVT-H9-HA 火鸡疱疹病毒 HA基因 Red/ET同源重组技术 GatewayLR克隆技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：8

6

作者 高宏博 崔红玉 +9 位作者 石星明 赵妍 赵晓岩 全炎铭 董鹏 闫帅 黄婷婷 杨瑞 王玫 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期329-333,共5页

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因... 为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 重组火鸡疱疹病毒 HA基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：4

7

作者 刘长军 王端 +5 位作者 秦运安 鄢明华 王笑梅 代春铭 李刚 赵晓岩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期412-415,共4页

采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因... 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。 展开更多

关键词 鸡传染性贫血病毒 重组火鸡疱疹病毒 VP1、VP2基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

火鸡疱疹病毒转移载体的质粒的构建 被引量：2

8

作者 赵晓岩 刘长军 +2 位作者 李曦 宁晓檬 徐宜为 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第6期45-47,共3页

本试验采用以SV40早期启动子控制的大肠杆菌β—半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,将其插入到含有火鸡疮疹病毒(HVT)糖蛋白A(gA)抗原基因的克隆片段中,构建成HVT转移载体质粒,在该转移载体质粒中,大肠杆菌LacZ基因的两端分别与两段1.4k... 本试验采用以SV40早期启动子控制的大肠杆菌β—半乳糖苷酶(LacZ)基因作为报告基因,将其插入到含有火鸡疮疹病毒(HVT)糖蛋白A(gA)抗原基因的克隆片段中,构建成HVT转移载体质粒,在该转移载体质粒中,大肠杆菌LacZ基因的两端分别与两段1.4kb和1.8kb的HVT同源片段相连,克隆于pUC19质粒中,将含有LacZ基因的载体质粒与感染HVT的鸡胚成纤维细胞(CEF)中提取的全细胞DNA共同转染CEF,待病毒蚀斑出现后,用含有X-gal的琼脂糖覆盖细胞单层,可见到有兰色的病毒蚀斑,这些结果表明外源性的LacZ基因已被重组到HVT DNA中,同时还证明HVT的gA基因与HVT的复制无关,可以用于外源基因的插入和表达。 展开更多

关键词 火鸡 疱疹病毒 转移载体 质粒 构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

含绿色荧光蛋白基因与人疱疹病毒8型K12基因重组真核表达载体的构建 被引量：2

9

作者 朱建中 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期453-454,共2页

目的:构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人疱疹病毒8型K12基因的重组真核表达载体。方法:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因插入到真核表达质粒pCR3.1的EcoRI和XhoI位点,构建重组质粒pCR-K12;PCR扩增GFP基因,将GFP基因插入到重组质粒pCR-K12中... 目的:构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人疱疹病毒8型K12基因的重组真核表达载体。方法:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因插入到真核表达质粒pCR3.1的EcoRI和XhoI位点,构建重组质粒pCR-K12;PCR扩增GFP基因,将GFP基因插入到重组质粒pCR-K12中K12上游的KpnI和EcoRI位点中,获得重组表达质粒pCR-GFP-K12。结果:重组表达质粒pCR-GFP-K12的酶切鉴定符合预期结果,此重组质粒中的K12与GFP融合表达并受上游启动子pCMV控制。结论:重组表达质粒pCR-GFP-K12已构建成功,为研究K12的生物学活性及其作用机制打下基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 人疱疹病毒8型 K12基因 重组真核表达载体 构建

在线阅读 下载PDF 职称材料

鸡马立克氏病重组鸡痘病毒与火鸡疱疹病毒二价冻干疫苗免疫效力试验

10

作者 胡传伟 彭大新 +1 位作者 张如宽 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2004年第20期7-9,共3页

本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-g... 本文对高效表达鸡马立克氏病(MD)血清Ⅰ型疫苗毒株CVI988/RispensgB基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)和火鸡疱疹病毒(HVT)组成MD二价冻干疫苗对MD超强毒株(vvMDV)Md5和RB1B攻击后的免疫保护效果,实验室免疫效力试验的结果表明,HVT+rFPV-gB/R二价冻干苗对超强毒株Md5和RB1B攻击时的免疫保护效果明显优于HVT冻干苗,接近CVI988/Rispens的水平,本研究证明HVT+rFPV-gB/R二价冻干疫苗是一种安全、方便、高效的疫苗。 展开更多

关键词 鸡马立克氏病 超强毒株 冻干 火鸡疱疹病毒 重组鸡痘病毒 疫苗 免疫保护效果 RB1 效力试验 血清

在线阅读 下载PDF 职称材料

共表达鸡传染性法氏囊病病毒LX株VP2基因及鸡新城疫病毒PX02/3株F基因的重组火鸡疱疹病毒的构建 被引量：5

11

作者 王子书 王萍 +3 位作者 许健 杨大为 李永清 江波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期26-30,I0004,I0005,共7页

为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1... 为构建表达传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP 2基因和鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组火鸡疱疹病毒(HVT)。本研究利用基因重组技术,在HVT基因组的非必需区UL45-46插入CMV启动子调控下的IBDV LX株的VP 2基因表达盒,然后在HVT基因组的非必需区US1-10插入pec启动子调控下的NDV PX02/3株的F基因表达盒,成功构建并拯救出同时表达IBDV和NDV保护性抗原基因的重组HVT病毒(rHVT-VP2-F)。经PCR、Western Blot、IFA鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的VP2蛋白和F蛋白。本研究为研制rHVT-VP2-F活载体疫苗提供了科学依据。 展开更多

关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病病毒 重组火鸡疱疹病毒 F基因 VP 2基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展 被引量：8

12

作者 杨明珠 陈晓春 +2 位作者 宋佳诚 侯亚欣 李俊平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期338-351,共14页

重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies viru... 重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey,HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)、鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)等。对疱疹病毒基因组序列进行分析显示,其基因组大,复制非必需区域多,容纳外源基因的能力强。同时疱疹病毒具有宿主范围广泛、免疫持续期长、安全性较好及相关基因操作技术成熟等优点。笔者总结了当前构建重组动物疱疹病毒的主要方法,包括传统同源重组技术、细菌人工染色体(BAC)技术、Fosmid文库及CRISPR/Cas9基因编辑技术,简述了各个方法的基本原理及技术特点,比较了各个方法的优缺点,并分析了各个方法的最适运用条件,从而更准确地为研究工作提供理论及技术参考;对外源基因的表达方式进行分析,论证了不同启动子对外源基因表达的调控作用不同,同时对不同疱疹病毒的常用插入位点进行了研究成果的列举总结,并对当前重组病毒HVT、PRV、DEV及ILTV活载体疫苗的研究进展进行总结,对相关生物制品的注册应用信息进行了归纳,介绍了高选择率外源基因及高成功率插入位点,从而为相关生物制品的研制提供理论参考。 展开更多

关键词 重组动物疱疹病毒 活载体疫苗 火鸡疱疹病毒(HVT) 伪狂犬病病毒(PRV) 鸭瘟病毒(DEV) 传染性喉气管炎病毒(ILTV)

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达禽流感病毒HA蛋白及传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

13

作者 唐猛 陈普成 +5 位作者 高立 柳金雄 潘俊慧 王笑梅 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期865-869,共5页

为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用... 为构建同时表达禽流感病毒(AIV)HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(p Fos A、p Fos B、p Fos C、p Fos D和p Fos E)为基础,利用猪捷申病毒2A蛋白的编码序列,将HA基因和VP2基因串联,并克隆于p CAGGs载体中,构建重组质粒p CA-HA-2A-VP2。利用Gateway LR克隆技术,将重组质粒中的HA-2A-VP2的表达盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到p Fos C粘粒中HVT片段的复制非必需区HVT053与HVT054基因之间,构建重组粘粒p Fos C-5354-HA-VP2。将p Fos A、p Fos B、p Fos D、p Fos E和p Fos C-5354-HA-VP2 5个重组粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),制备表达HA蛋白及VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(r HVT-5354-HA-VP2)。将重组病毒在CEF中连续传至20代后,通过PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定分析,结果显示HA与VP2基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与野生型病毒HVT无显著差异。该重组病毒的制备为研制AIV-IBDV-马立克病毒三联苗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组粘粒 重组火鸡疱疹病毒 三联苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

以畜禽疱疹病毒为载体的重组基因工程疫苗研究进展 被引量：2

14

作者 张璐 何慧芬 +1 位作者 秦爱建 钱琨 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期88-93,共6页

畜禽疱疹病毒常作为表达外源基因的活病毒载体,用于构建重组基因工程疫苗。论文从重组基因工程疫苗的常见构建方法着手,分析比较了利用不同方法构建重组疫苗的优缺点,并阐述了不同类重组病毒活载体疫苗的特征、免疫保护效果等研究现状,... 畜禽疱疹病毒常作为表达外源基因的活病毒载体,用于构建重组基因工程疫苗。论文从重组基因工程疫苗的常见构建方法着手,分析比较了利用不同方法构建重组疫苗的优缺点,并阐述了不同类重组病毒活载体疫苗的特征、免疫保护效果等研究现状,为今后新型疫苗的研发和相关疾病的防控提供参考。 展开更多

关键词 疱疹病毒 重组活载体疫苗 研究进展

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组牛疱疹病毒1型转移载体的构建与初步应用

15

作者 戴莎莎 马小静 +3 位作者 王景松 田兴苗 王健霖 李继东 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第10期2311-2320,共10页

为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋... 为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋白标记基因置于反向启动子下,构建BHV-1重组载体prPgP;以BHV-1囊膜糖蛋白基因gE作为重组位点,将gE上下游同源臂插入prPgP载体中,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E 2基因置于正向CMV启动子下,构建p△gErPgP-E2载体,用重组质粒转染已感染BHV-1的牛肾细胞(MDBK),产生的重组病毒经筛选、纯化、鉴定,命名为rBHV-1-△gE/E2,所含GFP和E 2基因正常表达。结果表明,重组载体prPgP能方便地用于BHV-1的重组,为相关研究及其疫苗研制提供了便捷。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 同源臂 转移载体 同源重组

在线阅读 下载PDF 职称材料

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：4

16

作者 杨慧兰 赵举峰 +3 位作者 樊建勇 周翠 黄小晏 齐维 《医学研究生学报》 CAS 2008年第9期899-903,I0001,共6页

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATO... 目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 潜伏相关转录子 开放读码框 重组载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组禽α疱疹病毒研究进展 被引量：2

17

作者 张馨月 张存 冉多良 《动物医学进展》 CSCD 2007年第6期61-65,共5页

禽α疱疹病毒可以引起多种家禽重要传染病,重组病毒是研究其基因组结构功能和新型基因工程疫苗的有效手段。文章综述了禽α疱疹病毒转移载体的构建和同源重组方法、感染性细菌人工染色体系统、基因缺失疫苗和重组活载体疫苗的最新进展。

关键词 禽α疱疹病毒 病毒载体 重组疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

火鸡疱疹病毒FCFC126株gB启动子的克隆与鉴定

18

作者 何东昌 郝小利 +13 位作者 刘晶晶 杨洁 金芳 邓永欢 徐云鹏 程昊 徐利军 顾敏 胡娇 王晓泉 陈素娟 刘晓文 甘军纪 刘秀梵 《中国家禽》 北大核心 2017年第1期24-29,共6页

启动子在重组火鸡疱疹病毒(HVT)载体疫苗中起着至关重要的作用,内源性启动子活性较弱,受载体病毒自身的复制调控。研究通过预测分析HVT(FC126株)囊膜糖蛋白(g B)启动子,将其克隆并与经密码子优化的H7N9亚型禽流感病毒的HA基因构建表达... 启动子在重组火鸡疱疹病毒(HVT)载体疫苗中起着至关重要的作用,内源性启动子活性较弱,受载体病毒自身的复制调控。研究通过预测分析HVT(FC126株)囊膜糖蛋白(g B)启动子,将其克隆并与经密码子优化的H7N9亚型禽流感病毒的HA基因构建表达盒质粒,再进一步通过间接免疫荧光试验和荧光定量PCR比较其与外源性强启动子CMV和马立克氏病病毒(MDV,CVI988株)g B启动子的转录表达活性。结果表明:3种启动子均能使目的基因在体外获得转录表达,CMV启动子的活性高于内源性g B启动子,而HVT的g B与MDV的g B表达活性差异不显著。研究结果为重组HVT载体疫苗启动子的选择提供了一定参考。 展开更多

关键词 启动子克隆 活性分析 重组载体疫苗 火鸡疱疹病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪伪狂犬病病毒载体重组疫苗研究进展 被引量：13

19

作者 王林青 郑兰兰 +4 位作者 李坤 陈红英 李文增 李坤陶 崔保安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期160-164,共5页

猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又名猪疱疹病毒I型（SuidherpesvimstypeI），属于疱疹病毒科（Herpesviridae）甲亚科（Alphaerpesvirinae）水痘病毒属（Varicellovirus），为线状双股DNA病毒，全长约150kb，含有77个读码... 猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又名猪疱疹病毒I型（SuidherpesvimstypeI），属于疱疹病毒科（Herpesviridae）甲亚科（Alphaerpesvirinae）水痘病毒属（Varicellovirus），为线状双股DNA病毒，全长约150kb，含有77个读码框，平均G＋C含量高达73．6％。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病病毒 重组疫苗 病毒载体 疱疹病毒 DNA病毒 G+C含量 痘病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

锦鲤疱疹病毒ORF126-ORF27融合蛋白的表达及免疫原性分析 被引量：2

20

作者 梁思源 吕春爽 +2 位作者 安红艳 李全振 赵宝华 《中国水产》 2017年第10期96-99,共4页

根据锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）囊膜蛋白ORF27基因和糖蛋白ORF126基因序列设计特异性扩增引物,通过PCR成功克隆了锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）ORF27基因和ORF126基因片段,分别将ORF27基因、ORF126基因以及ORF126-ORF2... 根据锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）囊膜蛋白ORF27基因和糖蛋白ORF126基因序列设计特异性扩增引物,通过PCR成功克隆了锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus,KHV）ORF27基因和ORF126基因片段,分别将ORF27基因、ORF126基因以及ORF126-ORF27融合基因与原核表达载体pMAL-c2x连接构建重组表达质粒pMAL-c2x-ORF126,pMAL-c2x-ORF27,pMAL-c2x-ORF126-ORF27, 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒 ORF126-ORF27 HERPESVIRUS 融合蛋白 免疫原性分析 基因片段 原核表达载体 重组表达质粒 扩增引物 受体菌

在线阅读 下载PDF 职称材料