枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌发酵条件优化 被引量：7

1

作者 廖朝勇 张铁鹰 +1 位作者 刘俊丽 隋景巍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期44-52,共9页

本试验旨在对已构建枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌WB600-K进行发酵条件优化,获得最佳产酶条件,以期提高重组菌角蛋白酶的产量;同时通过研究不同种类碳源和氮源间的组合优化获得成本低廉的重组菌发酵培养基配方。结果显示,当发酵液D 6... 本试验旨在对已构建枯草芽孢杆菌WB600角蛋白酶重组菌WB600-K进行发酵条件优化,获得最佳产酶条件,以期提高重组菌角蛋白酶的产量;同时通过研究不同种类碳源和氮源间的组合优化获得成本低廉的重组菌发酵培养基配方。结果显示,当发酵液D 600 nm=1.0时添加0.5%木糖诱导发酵WB600-K分泌表达角蛋白酶酶活最佳(P<0.05);山梨醇作为碳源可显著提高WB600-K角蛋白酶酶活(P<0.05),但成本较高不宜作为混合碳源来源;不同种类碳源(葡萄糖、玉米粉、糖蜜、甘油)组合添加能显著提高重组菌角蛋白酶酶活(P<0.05)。不同种类氮源(蛋白胨、酵母粉、豆粕粉、尿素)组合添加对于重组菌提高角蛋白酶酶活效果不如单一氮源(蛋白胨)(P<0.05)。在诱导发酵48 h时WB600-K产角蛋白酶酶活最高(P<0.05)。对发酵配方进行正交试验优化,WB600-K在玉米粉5.1 g/L、葡萄糖5.9 g/L、糖蜜5.9 g/L、甘油3.0 g/L、蛋白胨20 g/L、NaCl 10 g/L,发酵液D 600 nm=1.0时加0.5%木糖诱导发酵48 h能显著提高角蛋白酶酶活(P<0.05),达到56.9 U/mL,较初始培养条件提高49.74%。综上,在优化发酵条件下进行发酵及不同种类碳源间组合能提高WB600-K角蛋白酶活性,可为角蛋白酶工业化生产提供试验依据。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌wb600 角蛋白酶 发酵条件 优化

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重组芽孢杆菌在鸡养殖中的研究现状与发展趋势

2

作者 吴丹 王洪壮 《西藏农业科技》 2025年第2期111-114,共4页

芽孢杆菌(Bacillus-like)作为一类重要的益生菌,其可通过调节肠道菌群平衡、增强肌体免疫力、促进营养物质吸收、抑制病原菌生长等方式,显著提升畜禽的健康水平和生产性能。而重组芽孢杆菌则是在天然芽孢杆菌的基础上,通过基因工程技术... 芽孢杆菌(Bacillus-like)作为一类重要的益生菌,其可通过调节肠道菌群平衡、增强肌体免疫力、促进营养物质吸收、抑制病原菌生长等方式,显著提升畜禽的健康水平和生产性能。而重组芽孢杆菌则是在天然芽孢杆菌的基础上,通过基因工程技术,对其基因组进行人为改造,使其获得新的优良性状。作为微生物制剂的重要成员,重组芽孢杆菌具有独特的生物学特性和功能优势。通过对重组芽孢杆菌在鸡养殖领域的研究现状与发展趋势进行全面综述,旨在为重组芽孢杆菌在鸡生产实际中的广泛应用提供理论参考和实践指导。 展开更多

关键词 重组芽孢杆菌 鸡 枯草芽孢杆菌 研究现状

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枯草芽孢杆菌同源重组表达外源基因在畜牧业应用的研究进展 被引量：1

3

作者 赵荪琦 张明辉 高学军 《吉林畜牧兽医》 2024年第1期7-9,共3页

枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性益生菌,因其分布广泛、操作安全、易于培养、易遗传转化而被广泛用于畜牧业、农业、食品、工业和医药领域的异源蛋白生产。已报道了许多基于质粒的枯草芽孢杆菌表达系统,本文进一步介绍了枯草芽孢杆菌分泌... 枯草芽孢杆菌是一种革兰氏阳性益生菌,因其分布广泛、操作安全、易于培养、易遗传转化而被广泛用于畜牧业、农业、食品、工业和医药领域的异源蛋白生产。已报道了许多基于质粒的枯草芽孢杆菌表达系统,本文进一步介绍了枯草芽孢杆菌分泌系统、启动子、质粒载体、转化方法,以及利用同源重组表达外源基因在畜牧业应用的研究进展,为畜牧科技工作者提供参考。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 外源基因 同源重组 畜牧业

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绿色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

4

作者 雍婕 杨辉 +2 位作者 肖红仕 田云 周海燕 《生物产业技术》 2019年第5期71-75,共5页

根据绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的特性,将GFP作为目的基因,与穿梭载体pHY300PLK结合,构建一个芽孢杆菌WB600的蛋白表达体系,为在枯草芽孢杆菌中表达其他蛋白提供了一定的技术和理论支持。本文结合pHY300PLK的克隆位点... 根据绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的特性,将GFP作为目的基因,与穿梭载体pHY300PLK结合,构建一个芽孢杆菌WB600的蛋白表达体系,为在枯草芽孢杆菌中表达其他蛋白提供了一定的技术和理论支持。本文结合pHY300PLK的克隆位点,设计gfp基因的引物,PCR扩增后回收的gfp基因片段进行双酶切,与相同双酶切的pHY300PLK连接获得pHY300PLK-GFP,通过电转化将pHY300PLK-GFP转化至芽孢杆菌WB600中并检测。获得转化子WB1,检测到转化子在荧光显微镜下显示绿色荧光,且后续测序检测表明重组质粒构建成功。 展开更多

关键词 芽孢杆菌wb600 荧光蛋白 蛋白表达体系

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海参溶菌酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的整合及表达 被引量：1

5

作者 李丹 李成 +3 位作者 孙璐 邹丹 刘志文 丛丽娜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期139-146,共8页

采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys,将B.subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF0364... 采用枯草芽孢杆菌WB600(Bacillus subtilis WB600)在体外表达海刺参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SjLys)蛋白。通过构建克隆质粒pMD18-P43-SjLys,将B.subtilis自身强启动子P43序列和已分离得到的SjLys基因(GenBank登录号EF036468)连接(P43-SjLys)。经BamH I/EcoR I酶切,将P43-SjLys片段连接到B.subtilis整合载体pDG1730上,构建整合重组质粒pDG-P43-SjLys。经Xho I酶切处理,线性化的pDG-P43-SjLys质粒转化B.subtilis WB600细胞。P43-SjLys片段通过同源双交换重组整合到B.subtilis WB600染色体上,成功得到具有稳定遗传的基因工程菌B.subtilis WB600/P43-SjLys。经SDS-PAGE和抑菌试验分析表明,培养60 h后,B.subtilis WB600/P43-SjLys能够表达可溶的,对常见的海洋细菌溶壁微球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性的SjLys蛋白。首次在B.subtilis表达系统中得到可溶且具有酶活功能的SjLys蛋白,为SjLys的生产提出了一种具有可行性的和潜力的新方法。 展开更多

关键词 海参溶菌酶 枯草芽孢杆菌 启动子P43 同源重组 整合表达

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木聚糖酶xynZF 318在枯草芽孢杆菌WB600中的表达及发酵条件优化 被引量：5

6

作者 田艳杰 宋兆祥 +3 位作者 马振武 王朝阳 徐佳 周晨妍 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第22期120-125,133,共7页

为了获得产木聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌工程菌,本研究将木聚糖酶基因xynZF-318与高表达载体pWB980连接,获得重组载体pWB980/xynZF-318,并将其通过电击转化的方法导入枯草芽孢杆菌感受态细胞WB600,获得重组工程菌WB600/pWB980/xynZF-318... 为了获得产木聚糖酶的重组枯草芽孢杆菌工程菌,本研究将木聚糖酶基因xynZF-318与高表达载体pWB980连接,获得重组载体pWB980/xynZF-318,并将其通过电击转化的方法导入枯草芽孢杆菌感受态细胞WB600,获得重组工程菌WB600/pWB980/xynZF-318。采用单因素及响应面法对该工程菌进行摇瓶发酵工艺优化。结果表明:重组工程菌WB600/pWB980/xynZF-318最优的发酵条件为:接种量为1.2%、装液量为20 mL、种龄为11 h、培养温度为37℃、摇床转速为160 r/min、发酵时间为168 h。验证后实际酶活力为0.359 U/mL,与野生株WB600相比酶活提高了2.66倍。本研究成功构建了产木聚糖酶的枯草芽孢杆菌工程菌,有望为木聚糖酶的工业应用尤其是食品工业应用提供新思路。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 木聚糖酶 重组工程菌 发酵条件

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氮源对重组枯草芽孢杆菌24/pMX45核黄素发酵的影响 被引量：7

7

作者 李建国 班睿 +1 位作者 司马迎春 赵学明 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2003年第2期180-183,187,共5页

考察了无机氮源NH4 Cl和不同有机氮源对重组枯草芽孢杆菌 2 4 / pMX4 5核黄素发酵的影响 .实验结果表明 ,NH4 Cl作为基础氮源对菌体生长和核黄素合成均有抑制作用 .采用不同有机氮源进行核黄素发酵 ,以酵母粉为氮源时发酵单位最高 ,而... 考察了无机氮源NH4 Cl和不同有机氮源对重组枯草芽孢杆菌 2 4 / pMX4 5核黄素发酵的影响 .实验结果表明 ,NH4 Cl作为基础氮源对菌体生长和核黄素合成均有抑制作用 .采用不同有机氮源进行核黄素发酵 ,以酵母粉为氮源时发酵单位最高 ,而蛋白胨为氮源时核黄素发酵单位最低 . 展开更多

关键词 核黄素 枯草芽孢杆菌 氮源 维生素B2 发酵生产 基因工程 基因重组

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甘露聚糖酶基因Man23在芽孢杆菌WB600中的表达 被引量：4

8

作者 胡杨 周海燕 +1 位作者 董蕾 吴永尧 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期539-541,共3页

兼具纤维素酶和半纤维素酶活性的Man23基因(Man23)来自于芽孢杆菌B23,将其连接到质粒pHY-P43上,由强启动子P43来启动Man23的表达,重组质粒pHY-p43-Man23转入蛋白酶缺陷型芽孢杆菌WB600中,表达产物与原体系相比,甘露聚糖酶活力提高了21%... 兼具纤维素酶和半纤维素酶活性的Man23基因(Man23)来自于芽孢杆菌B23,将其连接到质粒pHY-P43上,由强启动子P43来启动Man23的表达,重组质粒pHY-p43-Man23转入蛋白酶缺陷型芽孢杆菌WB600中,表达产物与原体系相比,甘露聚糖酶活力提高了21%,电泳检测得到的蛋白图谱显示目的酶丰度有显著提高,杂蛋白未见大量表达,可见构建的WB600体系适用于Man23基因表达. 展开更多

关键词 甘露聚糖酶 基因表达 芽孢杆菌wb600

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γ-谷氨酰转肽酶在枯草芽孢杆菌中高效表达及发酵培养基优化 被引量：1

9

作者 张祖政 毛泽敬 +4 位作者 余华顺 张彦 杨潇 龚大春 郑贤良 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第24期76-83,共8页

γ-谷氨酰转肽酶是一种能催化底物谷胺酰胺形成γ-谷氨酰-酶复合体,再被受体底物(如氨基酸、短肽)亲核取代,发生转肽反应形成γ-谷氨酰肽的酶,在食品、医药等领域有重要应用价值。该研究选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SCK6作为表... γ-谷氨酰转肽酶是一种能催化底物谷胺酰胺形成γ-谷氨酰-酶复合体,再被受体底物(如氨基酸、短肽)亲核取代,发生转肽反应形成γ-谷氨酰肽的酶,在食品、医药等领域有重要应用价值。该研究选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SCK6作为表达宿主,以来源于枯草芽胞杆菌的173种信号肽为基础构建γ-谷氨酰转酶信号肽筛选文库,筛选出最优信号肽SP_(cotC),在此基础上进行启动子筛选,得到最优启动子P_(aprE),最终构建了一株高效分泌表达γ-谷氨酰肽酶的重组菌株BS-gts3,摇瓶发酵胞外酶活力最高为5.04 U/mL。通过单因素试验和响应面试验筛选出最优培养基:乳糖31.73 g/L、FM80250.26 g/L、硫酸镁1.24 g/L、KH_(2)PO_(4)1.25 g/L、K_(2)HPO_(4)0.75 g/L,胞外酶活提高了12%,为5.623 U/mL。并进行5 L发酵罐放大培养,在38 h,胞外酶活力达到最高28.18 U/mL,是已报道的最高水平。该研究对γ-谷氨酰转肽酶的产品开发及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 Γ-谷氨酰转肽酶 启动子 信号肽 重组表达

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重组枯草芽孢杆菌产角蛋白酶的发酵培养基及发酵条件优化 被引量：6

10

作者 利刚慧 刘俊杰 +3 位作者 彭帅英 梁颖茵 鄢陆琪 李昆太 《中国饲料》 北大核心 2023年第19期29-36,共8页

角蛋白是潜在的优良饲用蛋白资源,其中角蛋白酶作为可特异性降解角蛋白的酶类,在角蛋白饲料化领域展现出广泛的应用潜力和价值。本研究以自主构建的重组角蛋白酶工程菌枯草芽孢杆菌WB600-pMA5-kerJY-23为研究对象,利用单因素和二次通用... 角蛋白是潜在的优良饲用蛋白资源,其中角蛋白酶作为可特异性降解角蛋白的酶类,在角蛋白饲料化领域展现出广泛的应用潜力和价值。本研究以自主构建的重组角蛋白酶工程菌枯草芽孢杆菌WB600-pMA5-kerJY-23为研究对象,利用单因素和二次通用旋转组合设计试验对其摇瓶发酵产角蛋白酶的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明:该菌株最佳发酵产酶条件为:葡萄糖25 g/L,蔗糖25 g/L,酵母浸膏20 g/L,硫酸铵10 g/L,磷酸氢二钾1.5 g/L,氯化钠0.3 g/L,氯化钙0.025 g/L,硫酸镁0.025 g/L,硫酸亚铁0.015 g/L,氯化锰0.05 g/L,初始pH 8,装液量45 mL/250 mL三角瓶,接种量6%,培养温度37℃,摇床转速200 r/min,发酵周期36 h。在该优化条件下,重组枯草芽孢杆菌WB600发酵产角蛋白酶的酶活达到(2110±15.011)U/mL,较优化前提高了5.10倍(P<0.05),为该酶在角蛋白降解及资源化利用领域的应用提供了理论依据与研究基础。 展开更多

关键词 角蛋白酶 重组枯草芽孢杆菌wb600 发酵培养基 发酵条件 优化

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重组枯草芽孢杆菌PaE菌株的构建及碳代谢阻遏效应研究 被引量：1

11

作者 李元召 孙俊良 +1 位作者 梁新红 张永帅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第23期134-138,共5页

通过基因重组的方法,将枯草芽孢杆菌168的α-淀粉酶基因amy E(除掉启动子)整合在Paxo1质粒上,然后将重组表达质粒Paxo1-amy E导入枯草芽孢杆菌168菌株基因组中的半乳糖苷酶基因lac Z位点。通过转化筛选和重组基因分析,获得含有重组α-... 通过基因重组的方法,将枯草芽孢杆菌168的α-淀粉酶基因amy E(除掉启动子)整合在Paxo1质粒上,然后将重组表达质粒Paxo1-amy E导入枯草芽孢杆菌168菌株基因组中的半乳糖苷酶基因lac Z位点。通过转化筛选和重组基因分析,获得含有重组α-淀粉酶基因的工程菌株Pa E。经过添加4种不同的碳源发酵实验检测,在外加2?g/100?m L木糖诱导的情况下,重组菌株的α-淀粉酶产量均有增加。而且重组菌株在一定程度上能够克服葡萄糖等还原性糖引起的碳代谢阻遏现象,提高了α-淀粉酶产量。 展开更多

关键词 Α-淀粉酶 枯草芽孢杆菌 基因重组 木糖

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同源重组法构建枯草芽孢杆菌dhbC基因缺失突变株和回复株 被引量：1

12

作者 余贤美 林超 +3 位作者 杨芩 李锐 贺春萍 郑服丛 《热带作物学报》 CSCD 2009年第10期1517-1521,共5页

为了验证dhbC基因的功能,以质粒pEGFP-N1为模板,通过PCR扩增获得新霉素抗性基因(neor)DNA片段,构建重组质粒pMD18-neo,电击转化法将pMD18-neo导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAS15感受态细胞中,使neor基因片段与dhbC基因片段发生置... 为了验证dhbC基因的功能,以质粒pEGFP-N1为模板,通过PCR扩增获得新霉素抗性基因(neor)DNA片段,构建重组质粒pMD18-neo,电击转化法将pMD18-neo导入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CAS15感受态细胞中,使neor基因片段与dhbC基因片段发生置换,获得dhbC基因缺失突变株。再通过电击转化将dhbC基因全长编码序列导入dhbC基因缺失突变株CAS15 dhbC-del,获得dhbC基因回复株CAS15dhbC-com。经CAS平板法检测表明,CAS15 dhbC-del不能产生橘黄色晕圈,而CAS15 dhbC-com产生与CAS一致的橘黄色晕圈,证明了dhbC基因与嗜铁素的合成密切相关。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 同源重组 缺失突变 基因回复

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表达谷氨酸脱羧酶重组枯草芽孢杆菌的构建及其发酵条件的优化 被引量：6

13

作者 丁伟 张明俐 +2 位作者 史吉平 柳鹏福 宋礼华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期194-198,共5页

谷氨酸脱羧酶(GAD)是生物合成γ-氨基丁酸(GABA)的关键酶,本研究通过基因工程构建了一株产GAD的重组枯草芽孢杆菌,并对其产GAD的发酵条件进行优化。分别通过单因素法、正交实验、极差分析和响应面法确定了最佳培养基成分(g/L)及发酵条件... 谷氨酸脱羧酶(GAD)是生物合成γ-氨基丁酸(GABA)的关键酶,本研究通过基因工程构建了一株产GAD的重组枯草芽孢杆菌,并对其产GAD的发酵条件进行优化。分别通过单因素法、正交实验、极差分析和响应面法确定了最佳培养基成分(g/L)及发酵条件为:蔗糖23.5,豆粕10、乙酸铵为8.5、磷酸二氢钾4.1、七水硫酸镁0.5,p H7.0,培养温度37℃。在优化条件下GAD酶活达到0.413 U/m L,与优化前的GAD酶活0.143 U/m L相比,酶活提高了188.8%。本研究有助于后续开发枯草杆菌生产γ-氨基丁酸的工艺,以克服现在γ-氨基丁酸生产工艺中,大肠杆菌安全性的问题和乳酸菌成本过高的问题。 展开更多

关键词 谷氨酸脱羧酶 Γ-氨基丁酸 重组枯草芽孢杆菌 发酵条件优化

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重组枯草芽孢杆菌分泌表达腺苷酸脱氨酶 被引量：3

14

作者 郭自涛 张梁 +4 位作者 李由然 李赢 顾正华 丁重阳 石贵阳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第21期135-139,共5页

目的:利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株。方法:以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚... 目的:利用基因重组技术,构建腺苷酸脱氨酶高效表达的重组菌株。方法:以前期构建的产腺苷酸脱氨酶重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28α-AMPD中来源于鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)目的基因为模板,设计特异性引物扩增腺苷酸脱氨酶基因,亚克隆至游离型表达载体pHY-WZX,转化枯草芽孢杆菌WB600。结果:成功筛选获得了一株产腺苷酸脱氨酶重组枯草芽孢杆菌WB600/pHY-AMPD,进一步在摇瓶中探究了发酵培养基成分对重组酶发酵的影响。获得了较优发酵培养基为:葡萄糖10 g/L、?酵母膏30 g/L、CaCl2 0.5 g/L、柠檬酸三钠1 g/L、NaH2PO4 10 g/L、K2HPO4 10 g/L、(NH4)2SO4 5 g/L,37℃、200 r/min发酵60 h摇瓶发酵液酶活力可达到(2 230±50)U/m L。结论:本研究实现了鼠灰链霉菌来源的腺苷酸脱氨酶基因在枯草芽孢杆菌中表达。 展开更多

关键词 腺苷酸脱氨酶 鼠灰链霉菌 枯草芽孢杆菌 重组表达

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产碱性淀粉酶重组枯草芽孢杆菌的构建与发酵优化 被引量：3

15

作者 王静丽 刘松 +1 位作者 堵囯成 陈坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期296-302,共7页

碱性淀粉酶催化淀粉在碱性环境中高效降解,广泛应用于纺织退浆、洗涤、制药等领域。通过信号肽筛选,将来源于嗜碱单胞菌Alkalimonas amylolytica的碱性淀粉酶基因于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600实现分泌表达,并优化了重组菌产... 碱性淀粉酶催化淀粉在碱性环境中高效降解,广泛应用于纺织退浆、洗涤、制药等领域。通过信号肽筛选,将来源于嗜碱单胞菌Alkalimonas amylolytica的碱性淀粉酶基因于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600实现分泌表达,并优化了重组菌产酶的发酵条件。在最佳信号肽ywb N介导下,重组B.subtilis发酵51 h,胞外Amy K酶活最高达146.86 U/m L,且能在发酵上清液中检测到与Amy K理论相对分子质量(60 k Da)一致的蛋白质条带。通过单因素实验优化了发酵培养基(糊精32 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母粉24 g/L,KH_2PO_42.32 g/L,K2HPO_4·3H_2O 16.43 g/L),并在发酵24 h后添加0.2 g/d L Na_2CO_3调节发酵液p H,发酵72 h胞外Amy K酶活达640.33 U/m L,较优化前提高了336%,是目前已报道重组B.subtilis产碱性淀粉酶的最高水平。研究结果为Amy K发酵生产的工业化提供了数据支撑。 展开更多

关键词 碱性淀粉酶 信号肽 重组枯草芽孢杆菌 发酵优化 碳酸钠

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地衣芽孢杆菌几丁质酶在枯草芽孢杆菌中的重组表达及其制备氨基寡糖的研究 被引量：2

16

作者 袁源 宿玲恰 +3 位作者 张康 朱昫飏 夏伟 吴敬 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期39-47,共9页

将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的几丁质酶基因blchiA在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中进行重组表达,构建了枯草芽孢杆菌工程菌株(B.subtilisWS9/pHY300PLK-blchiA),发酵上清液的酶活为0.73 U·mL^(-1)。对重组酶BLCHIA... 将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源的几丁质酶基因blchiA在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中进行重组表达,构建了枯草芽孢杆菌工程菌株(B.subtilisWS9/pHY300PLK-blchiA),发酵上清液的酶活为0.73 U·mL^(-1)。对重组酶BLCHIA的酶学性质进行表征,其在pH 6.0和60℃时表现出最佳活性,比活为3.68 U·mg^(-1)。10 mmol·L^(-1)的铜离子(Cu^(2+))和亚铁离子(Fe^(2+))对其活性有一定促进作用,在pH 5.0~8.0和50~60℃下稳定性较好。此外,研究表明重组酶对脱乙酰度>95%的壳聚糖的催化能力明显优于胶体几丁质,并且水解胶体几丁质和壳聚糖的产物类型具有明显差异,以胶体几丁质为底物主要生成几丁二糖,以壳聚糖为底物可生成聚合度为2~7的壳寡糖。研究获得的重组酶BLCHIA在壳聚糖降黏和制备不同聚合度的低聚糖方面具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 几丁质酶 枯草芽孢杆菌 重组表达 氨基寡糖

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同源重组整合vgb基因提升枯草芽孢杆菌亚麻脱胶能力 被引量：3

17

作者 张懿翔 丁若垚 +2 位作者 陈婷 郁崇文 张兴群 《中国麻业科学》 2015年第2期87-94,共8页

【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,以改善枯草芽孢杆菌的呼吸强度,通过高密度培养提高果胶酶的表达量,最终明显改善脱胶效果。【方法】构建含有vgb基因、amy E基因以及启动子P43的p SK-vgb(+)质粒... 【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,以改善枯草芽孢杆菌的呼吸强度,通过高密度培养提高果胶酶的表达量,最终明显改善脱胶效果。【方法】构建含有vgb基因、amy E基因以及启动子P43的p SK-vgb(+)质粒,通过同源重组的方法,将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌A5的染色体上,得到稳定表达透明颤菌血红蛋白的枯草芽孢杆菌A5-vgb(+)。分别采用PCR和CO差光谱分析法检测vgb基因的整合状态与血红蛋白的稳定表达,并通过发酵摇瓶试验研究VHb对菌株果胶酶产量的影响。将构建好的A5-vgb(+)菌株进行脱胶试验,通过XRD结晶度与电镜扫描分析鉴定脱胶效果。【结果】PCR与CO差光谱检测表明,vgb基因成功整合在A5菌株中,且正确表达的VHb具有生物学活性,在150 rpm,37℃,p H=8.0,16小时发酵的条件下,vgb基因的表达促使A5-vgb(+)菌株的果胶酶产量较不含vgb基因的菌株提升了29.5%。XRD与电镜扫描结果表明,构建的A5-vgb(+)菌株的脱胶效果相较于不含vgb的菌株,在结晶度上提高了0.55%,表面更光滑。【结论】将vgb基因整合至枯草芽孢杆菌A5菌株中,可提高A5菌株的脱胶效果。 展开更多

关键词 生物脱胶 果胶酶 枯草芽孢杆菌 VGB基因 同源重组

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重组枯草芽孢杆菌发酵产青霉素G酰化酶的条件优化 被引量：1

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作者 吴卓颖 邵威平 +2 位作者 张永玲 杨富民 田常庆 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期116-126,共11页

【目的】研究提高PGA酶活力及稳定性.【方法】以重组枯草芽孢杆菌10397(pMA5-PGA)产PGA酶活力为研究对象,在单因素试验基础上,采用响应面设计,对重组菌发酵产PGA的培养基及发酵条件进行了研究.【结果】以葡萄糖20.39g/L、胰蛋白胨15.48... 【目的】研究提高PGA酶活力及稳定性.【方法】以重组枯草芽孢杆菌10397(pMA5-PGA)产PGA酶活力为研究对象,在单因素试验基础上,采用响应面设计,对重组菌发酵产PGA的培养基及发酵条件进行了研究.【结果】以葡萄糖20.39g/L、胰蛋白胨15.48g/L、糊精6.1g/L为培养基,在三角瓶装液量16.23%、接种量4.32%、温度35.43℃、时间48.34h、摇床转速220r/min的条件下,所产PGA的酶活力为14.167U/mL,比初始发酵条件下发酵重组菌产PGA的酶活提高了1.14倍.【结论】通过条件优化,可提高重组枯草芽孢杆菌PGA的酶活力,并为工业化生产PGA提供科学依据. 展开更多

关键词 重组枯草芽孢杆菌 发酵 青霉素G酰化酶 工艺优化

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脲酶基因挖掘及其在枯草芽孢杆菌中的重组表达 被引量：2

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作者 周霞 景晓冉 +4 位作者 顾洁 毕家华 伍伦杰 聂尧 徐岩 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期28-37,共10页

氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,简称EC)是一种存在于黄酒中的潜在致癌物,酶法降解EC及其前体物质尿素因此备受关注。该研究通过基因挖掘获得了解淀粉芽孢杆菌IT-45的脲酶(Ba-urease)基因并在食品级系统枯草芽孢杆菌中实现了表达与应用... 氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,简称EC)是一种存在于黄酒中的潜在致癌物,酶法降解EC及其前体物质尿素因此备受关注。该研究通过基因挖掘获得了解淀粉芽孢杆菌IT-45的脲酶(Ba-urease)基因并在食品级系统枯草芽孢杆菌中实现了表达与应用。通过密码子优化、核糖体结合位点优化重构脲酶基因簇后,酶活力从6.85 U/mL提升至9.01 U/mL;通过调整基因ureC的位置,脲酶活力进一步提升至10.15 U/mL。研究发现,重组脲酶的最适反应温度为37℃;最适反应pH范围为6.5~7.0,为中性脲酶。摇瓶发酵的最佳培养条件为:TB培养基、接种体积分数5%、诱导温度28℃、Ni^(2+)添加量4 mmol/L。在最佳发酵条件下,酶活力达到12.5 U/mL,在酶法降解黄酒中的尿素具有应用前景。 展开更多

关键词 脲酶 枯草芽孢杆菌 尿素降解 重组表达 食品级表达系统

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基因重组型枯草芽孢杆菌芽孢表面展示技术与应用 被引量：1

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作者 张国艳 张欢欢 +7 位作者 员君华 杨苗苗 袁娇 郭明明 邹樊 周志成 李雯 齐向辉 《广西科学》 CAS 2018年第3期242-247,257,共7页

枯草芽孢杆菌是一种好氧型革兰氏阳性益生菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽孢。其芽孢独特的结构和生理功能使得芽孢表面展示技术相较于其他表面展示技术具有多种优势,构建的重组芽孢不但易纯化、回收率高,而且安全性好。... 枯草芽孢杆菌是一种好氧型革兰氏阳性益生菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽孢。其芽孢独特的结构和生理功能使得芽孢表面展示技术相较于其他表面展示技术具有多种优势,构建的重组芽孢不但易纯化、回收率高,而且安全性好。近年来,枯草芽孢杆菌芽孢表面展示技术得到迅猛发展,已成功利用CotB、CotC、CotG、CotZ、CotA、OxdD、CotE、CotZ、CgeA等多种锚定蛋白将外源蛋白或多肽展示在芽孢表面,并应用于工业化酶、口服疫苗和药物、大分子量多聚体蛋白的生产以及环境污染的生物治理等领域。本文首先介绍了芽孢展示系统整合策略,并重点阐述了基因重组型枯草芽孢杆菌芽孢展示技术中涉及的锚定蛋白以及该技术在各领域的应用与展望。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 芽孢表面展示 基因重组 锚定蛋白应用

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