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蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建
被引量：
7
1
作者
徐剑文
林建银
+2 位作者
林旭
齐元麟
张晓艳
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期755-764,共10页
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)...
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。
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关键词
蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)
基因合成
基因克隆
基因突变
重组杆状病毒载体
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职称材料
人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定
被引量：
4
2
作者
孙丽翠
王雅梅
+3 位作者
闫豫东
张静宜
司杨
祁雅慧
《首都医科大学学报》
CAS
2006年第5期623-626,共4页
目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,...
目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。
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关键词
人血管内皮细胞生长因子
重组杆状病毒载体
Western
BLOT
SF9细胞
MTT
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职称材料
题名
蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建
被引量：
7
1
作者
徐剑文
林建银
林旭
齐元麟
张晓艳
机构
福建医科大学分子医学研究中心
出处
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期755-764,共10页
基金
福建省重大科技项目(XZ04002)
福建省高技术产业项目闽发改(2004-686)。
文摘
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。
关键词
蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)
基因合成
基因克隆
基因突变
重组杆状病毒载体
Keywords
snake venom metalloproteinase inhibitor（ BJ46a）
gene synthesis
gene cloning
gene mutation
recombinant baculovirus vector
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定
被引量：
4
2
作者
孙丽翠
王雅梅
闫豫东
张静宜
司杨
祁雅慧
机构
首都医科大学生物化学与分子生物学系
首都医科大学医学实验与测试中心
出处
《首都医科大学学报》
CAS
2006年第5期623-626,共4页
基金
北京市科委科技合同奖金(954024800)资助项目
文摘
目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。
关键词
人血管内皮细胞生长因子
重组杆状病毒载体
Western
BLOT
SF9细胞
MTT
Keywords
human VEGF
recombinant baculovirus vector
Western blot
sf9 cell
MTT
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建
徐剑文
林建银
林旭
齐元麟
张晓艳
《中国生物医学工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
7
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职称材料
2
人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定
孙丽翠
王雅梅
闫豫东
张静宜
司杨
祁雅慧
《首都医科大学学报》
CAS
2006
4
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