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重组日本血吸虫铁蛋白的表达纯化及诱导小鼠保护性免疫研究 被引量:4
1
作者 王敏 易新元 +3 位作者 曾宪芳 袁仕善 李先平 罗秀菊 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期113-116,共4页
目的 表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法 用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离... 目的 表达、纯化重组日本血吸虫铁蛋白 ,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫的免疫保护作用。方法 用基因重组技术 ,将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆至表达载体 pGMC上 ;在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫铁蛋白得到高效表达 ;用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS -PAGE和Western -blot鉴定表达纯化产物 ;用纯化的重组铁蛋白免疫小鼠三次 ,分别在 0、2、4周进行。第 6周每鼠经腹部感染 4 0± 1条日本血吸虫尾蚴。 4 2天后剖杀冲虫 ,计数虫数及肝卵数。结果 纯化的重组铁蛋白分子量为 4 0kD ,具有较好的免疫原性 ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。与对照组相比 ,纯化重组铁蛋白免疫小鼠组的减虫率为 2 4 5 % ,减卵率为 4 5 8%。结论 重组日本血吸虫铁蛋白不仅在大肠杆菌中得到高效表达 ,而且纯化的铁蛋白分子能诱导抗日本血吸虫病的保护性免疫。 展开更多
关键词 重组日本血吸虫铁蛋白 表达 纯化 诱导 小鼠 保护性免疫
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重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂可通过调节炎症微环境对“二次打击”脓毒症小鼠发挥治疗作用
2
作者 多文娟 王怡祥 +9 位作者 王家兴 许鑫龙 李林献 杨栋臣 申启利 杨立春 刘晓静 金启旺 褚亮 杨小迪 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期110-117,共8页
目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首... 目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首先腹腔注射PBS(100μL/只),24 h后开腹探查盲肠,但不进行盲肠结扎和穿刺(CLP),术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只);C组和D组小鼠首先腹腔注射含LPS(5 mg/kg)的PBS(100μL/只),24 h后行CLP手术,术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只)。每组随机抽取6只,造模12 h后取小鼠血清、脾、肝、肺和肾组织。肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤并进行评分;酶联免疫吸附实验(ELISA)检验血清和肝、肺、肾组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平以及组织中巨噬细胞极化标志物iNOS和Arg-1水平;流式细胞术检测脾脏CD3+CD4+CD25+Foxp3+T的比例变化;剩余小鼠造模后记录72 h生存率并观察小鼠状态。结果与A、B组(100%)相比,C组(0%)72 h生存率降低,经rSj-Cystatin蛋白治疗后,D组生存率较C组增高(20%)。与A、B两组相比,C组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05);经蛋白治疗后,病理损伤程度减轻,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),调节因子IL-10、TGF-β水平明显升高(P<0.05),同时CD3+CD4+CD25+Foxp3+T比例升高(P<0.05);与A、B两组相比,C组各器官组织中iNOS水平均升高,而Arg-1水平呈差异性,仅在肾中呈下降趋势(P<0.01);与C组相比,D组iNOS水平下降(P<0.05),Arg-1水平升高(P<0.001)。结论rSj-Cystatin可通过调节炎症微环境进而对“二次打击”脓毒症起到明显的治疗作用。 展开更多
关键词 重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 脂多糖 盲肠结扎穿刺 脓毒症 免疫调节因子
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日本血吸虫中国株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白真核重组体的构建及其免疫小鼠的保护性研究 被引量:7
3
作者 余俊龙 汪世平 +3 位作者 戴橄 徐绍锐 刘雪琴 何卓 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期110-114,共5页
目的研究日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护性效果。方法将全长SjSDISP基因克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP,用重组裸DNA免疫昆明小鼠3次,间隙2W,末次免疫后... 目的研究日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SjSDISP)全长编码基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫保护性效果。方法将全长SjSDISP基因克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP,用重组裸DNA免疫昆明小鼠3次,间隙2W,末次免疫后第二周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42 d处死小鼠,剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率。结果经双酶切、PCR和测序验证,表明真核表达质粒pcDNA3-SjSDISP构建成功。动物免疫保护性实验结果显示:pcDNA3-SjSDISP疫苗组减虫率较低,与对照组相比减虫效果不明显(P>0.05);但在每克肝卵、每克粪卵和每雌子宫内卵方面,与对照组相比差异均具有显著性(P<0.01)。结论日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白DNA疫苗可能主要在抗血吸虫卵胚发育或抗生殖起作用,具有潜在的疫苗研究与开发价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 琥珀酸脱氢酶蛋白 DNA疫苗
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日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的体外扩增及逆转录病毒pLXSN-Fer1重组质粒的构建 被引量:4
4
作者 周俊梅 余新炳 +2 位作者 吴忠道 郑亦男 李焱 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期32-34,共3页
目的 构建日本血吸虫pLXSN- Fer1 真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及DNA免疫作准备。方法 用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增编码卵黄铁蛋白(yolk ferritin,Ferl) 的基... 目的 构建日本血吸虫pLXSN- Fer1 真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及DNA免疫作准备。方法 用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增编码卵黄铁蛋白(yolk ferritin,Ferl) 的基因片段,定向克隆入pLXSN 逆转录病毒载体,然后经氨苄LB培养基筛选,酶切、PCR鉴定。结果 从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增出特异的卵黄铁蛋白的基因片段,克隆成功pLXSN- Fer1 重组逆转录病毒。结论 构建成功pLXSN- Fer1 重组逆转录病毒。 展开更多
关键词 日本血吸虫 卵黄蛋白 pLXSN-Fer1 质粒
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日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白重组抗原的制备及其诊断价值的研究
5
作者 许进 汪世平 +7 位作者 周云飞 金晶 彭交凤 尹铁球 何鑫 李芬 何军 徐绍锐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期109-115,共7页
目的探讨重组日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(rSjSDISP)用于血吸虫病的诊断价值。方法利用经原核表达并纯化的rSjSDISP,建立基于重组抗原的快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA),检测血吸虫感染不同时期的兔血清、健康人血清、寄生虫病患者血... 目的探讨重组日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(rSjSDISP)用于血吸虫病的诊断价值。方法利用经原核表达并纯化的rSjSDISP,建立基于重组抗原的快速酶联免疫吸附试验(F-ELISA),检测血吸虫感染不同时期的兔血清、健康人血清、寄生虫病患者血清(其中包括血吸虫病患者血清、肝吸虫病患者血清、肺吸虫病患者血清),比较rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA两者的早期诊断价值及对rSjSDISP F-ELISA诊断方法的诊断效能做出评价;并与SEA-IHA法和SEA FELISA法平行检测血吸虫病疫区335份待测人血清比较3者的敏感性和特异性。结果成功构建pET32a/rSjSDISP重组质粒,当IPTG终浓度为0.1mmol/L,28℃诱导6h时SjSDISP重组蛋白表达量达到最大。rSjSDISP F-ELISA与SEA-IHA可区别出血吸虫感染28d后的兔血清,两者检测结果差异无统计学意义;rSjSDISP F-ELISA敏感度为94.4,特异度为93.0,Youden指数为0.88。在诊断335份血吸虫病疫区现场血清中,该方法与SEA-IHA、SEA F-ELISA具有相似的敏感性和特异性(P>0.05)。结论 rSjSDISP重组抗原可作为一种成分均一的优势诊断抗原,替代成分复杂的虫卵可溶性抗原(SEA)用于血吸虫病的诊断。rSjSDISP F-ELISA方法操作简便、快速,抗原制备易于标化,稳定性强,在血吸虫病诊断上具有较大的应用潜能。 展开更多
关键词 日本血吸虫 琥珀酸脱氢酶蛋白 重组抗原 快速酶联免疫吸附试验 诊断
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日本血吸虫铁蛋白基因的筛选、克隆与表达 被引量:18
6
作者 易新元 曾宪芳 +2 位作者 周金春 蔡春 舒新华 《湖南医科大学学报》 CSCD 1998年第5期425-428,共4页
采用Sj未成熟虫卵抗原超免疫兔血清(RASjIEA)对Sj成虫cDNA文库进行筛选,并对可能具有抗日本血吸虫生殖/卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Sj成虫文库,获得单个阳性克隆,PCR扩增后琼脂糖... 采用Sj未成熟虫卵抗原超免疫兔血清(RASjIEA)对Sj成虫cDNA文库进行筛选,并对可能具有抗日本血吸虫生殖/卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Sj成虫文库,获得单个阳性克隆,PCR扩增后琼脂糖电泳测定基因大小,DNA测序,基因库搜索,找出同源基因。共鉴定出6个不同的基因克隆。选择其中的铁蛋白(SjFer)基因亚克隆于pGMC载体。重组蛋白以GMCSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)-SjFer融合蛋白的形式在细菌中高效表达。表达产物仅溶于8M尿素溶液中,分子量为40kD。 展开更多
关键词 日本血吸虫 蛋白基因 克隆 基因表达
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日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在小鼠诱生的保护性免疫力 被引量:13
7
作者 周俊梅 余新炳 +2 位作者 吴忠道 郑亦男 卞国武 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期11-13,共3页
目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法 分两大组进行 ,实验Ⅰ小鼠有预感染 ,实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 pL SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2... 目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白基因DNA免疫小鼠诱生的保护性免疫力。方法 分两大组进行 ,实验Ⅰ小鼠有预感染 ,实验Ⅱ小鼠没有。将构建的日本血吸虫卵黄铁蛋白基因真核表达重组质粒 pL SjFerl经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5w以血吸虫尾蚴攻击感染 ,6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数和死亡卵百分比。设空质粒免疫组为对照组。结果 PL SjFerl免疫小鼠 ,在实验Ⅰ主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ主要诱生IgG2a和IgG2b ;实验组尚产生较高水平的IgA和IFN γ应答。pL SjFerl免疫小鼠诱生一定程度的减虫率 (2 6 .47% ,34 .0 8% ) ,减卵率(4 0 .0 2 % ,36 .83% )和死亡卵百分比 (2 7.5 0 % ,30 .13% )。结论 PL SjFerl免疫小鼠能产生较明显的保护性免疫力 ,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 卵黄蛋白 DNA免疫 保护性免力 小鼠
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日本血吸虫脂肪酸结合蛋白重组抗原对小鼠免疫保护性的研究 被引量:8
8
作者 赵巍 苏川 +7 位作者 吴海玮 胡雪梅 沈蕾 季敏君 王荣芝 马磊 陈淑贞 张兆松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期42-44,73,共4页
目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 )脂肪酸结合蛋白 (Sj FABPc)重组抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能 ,并探讨Sj FABPc/Sj2 6GST融合蛋白作为复合疫苗的可能性。 方法 用亲和层析法制备Sj FABPc重组抗原和Sj FABPc/Sj2 6GST融合蛋... 目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 )脂肪酸结合蛋白 (Sj FABPc)重组抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能 ,并探讨Sj FABPc/Sj2 6GST融合蛋白作为复合疫苗的可能性。 方法 用亲和层析法制备Sj FABPc重组抗原和Sj FABPc/Sj2 6GST融合蛋白。将两种蛋白分别免疫BALB/c小鼠后进行攻击感染试验。结果 Sj FABPc及Sj FABPc/Sj2 6GST分别诱导小鼠产生了 2 3 6 0 % (P <0 0 5 )和 2 1 72 % (P >0 0 5 )的成虫减虫率 ,5 9 36 % (P <0 0 0 1)和 4 9 6 8% (P <0 0 0 1)的总减卵率。 展开更多
关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 重组抗原 融合表达 免疫保护 血吸虫 动物实验
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含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjFABPc)基因DNA重组质粒pCD-SjFABPc在哺乳动物细胞中的表达 被引量:6
9
作者 冯新港 余新炳 +1 位作者 吴忠道 周俊梅 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期39-42,共4页
目的 观察裸DNA重组质粒pCD -SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达 ,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导DNA转染法将pCD -SjFABPc转染贴壁细胞HepG2 ,G418加压筛选获得阳性克隆细... 目的 观察裸DNA重组质粒pCD -SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达 ,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导DNA转染法将pCD -SjFABPc转染贴壁细胞HepG2 ,G418加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养 ,SDS -PAGE及Western -blot鉴定目的基因在HepG2细胞中的表达 ;将pCD -SjFABPc质粒肌注免疫BALB/c小鼠 ,于 6 5d后取注射部位的肌组织约 0 3cm3 大小 ,经固定、包埋、切片 ,免疫酶组织化学染色 ,显微照相记录。结果 在被转染的HepG2细胞裂解样品中 ,呈现一分子量约 14kDa大小且能被感染兔血清特异识别的条带 ;免疫组化结果显示免疫组切片标本中有特异性阳性反应。结论 pCD 展开更多
关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 重组质粒 DNA
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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3DNA免疫保护作用的观察 被引量:21
10
作者 刘庆中 沈继龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期230-232,共3页
目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 - 3- 3(rSj14 - 3- 3)DNA作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能。方法 碱裂解法大量制备rSj14 - 3- 3和rSjGSTDNA ,将两种DNA分别免疫BALB/c小鼠进行攻击感染实验。 结果 在尾蚴攻击感... 目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 - 3- 3(rSj14 - 3- 3)DNA作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能。方法 碱裂解法大量制备rSj14 - 3- 3和rSjGSTDNA ,将两种DNA分别免疫BALB/c小鼠进行攻击感染实验。 结果 在尾蚴攻击感染 6w后 ,剖杀小鼠计算各组的减虫率 ,rSj14 - 3- 3DNA组为 34 2 0 % ,rSj14 - 3- 3+rSjGSTDNA组为32 4 0 % ;减卵率为 (按以上组序 ) 5 0 74 %和 5 5 2 3%。结论 重组Sj14 - 3- 3DNA具有一定的抗血吸虫病潜能 ,有可能作为日本血吸虫病的候选疫苗 ,但未见Sj14 - 3- 3、SjGST两种重组DNA的协同作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组信号蛋白 14—3—3 DNA 免疫保护作用
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日本血吸虫铁蛋白基因的克隆、表达及其免疫诊断的研究 被引量:2
11
作者 王敏 易新元 +2 位作者 曾宪芳 袁仕善 李先平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期696-699,共4页
目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋... 目的 :构建、表达、纯化日本血吸虫铁蛋白基因的原核表达重组蛋白 ,并初步观察其免疫诊断价值。方法 :将日本血吸虫铁蛋白基因亚克隆于pGMC载体 ,转化重组体到大肠杆菌E .coli 2 5 6 6进行表达 ;采用电泳层析法分离纯化日本血吸虫铁蛋白 ;用SDS PAGE和Westernblot鉴定表达纯化产物 ;用Dot ELISA分别检测了血吸虫病人及正常人的血清。结果 :重组的日本血吸虫铁蛋白以GMC(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 ) 日本血吸虫铁蛋白融合蛋白的形式在细菌中得到高效表达 ,分子量为 4 0kD ,能被日本血吸虫感染兔血清识别。用重组铁蛋白检测 30例日本血吸虫病人血清和 30例正常人血清 ,阳性率和假阳性率分别为 93 3%和 3 3%。结论 :成功地表达纯化日本血吸虫重组铁蛋白 ,且该蛋白具有一定的免疫诊断价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 蛋白 基因克隆 表达 免疫诊断
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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值 被引量:15
12
作者 刘庆中 沈继龙 汪学龙 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第4期252-254,共3页
目的 探讨纯化的日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3(rSj14 3 3)诊断血吸虫病的价值。 方法 利用纯化的rSj14 3 3抗原与成虫抗原 ,间接ELISA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSj14 3 ... 目的 探讨纯化的日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3(rSj14 3 3)诊断血吸虫病的价值。 方法 利用纯化的rSj14 3 3抗原与成虫抗原 ,间接ELISA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSj14 3 3抗体检出率为 10 0 %和 92 0 % ,与正常人血清未出现交叉反应 ;抗AWA抗体检出率为 98 0 %和 94 0 % ,与正常人有 7 3%的交叉反应。结论 rSj14 3 3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性 ,具有实用价值。 展开更多
关键词 日本血吸虫 诊断 重组信号蛋白14—3—3 rSjl4—3—3抗原 成虫抗原 诊断
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日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察 被引量:2
13
作者 周俊梅 余新炳 +3 位作者 吴忠道 郑亦男 李焱 李晖婷 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第5期345-347,351,共4页
【目的】研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用。【方法】免疫小鼠分两大组进行 :实验Ⅰ组小鼠有预感染 ,实验Ⅱ组小鼠没有预感染。将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN Fer1经... 【目的】研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用。【方法】免疫小鼠分两大组进行 :实验Ⅰ组小鼠有预感染 ,实验Ⅱ组小鼠没有预感染。将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN Fer1经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠 ,共免疫 2次 ,间隔 2周。末次免疫后 5周以血吸虫尾蚴攻击感染 ,6周后剖杀小鼠 ,计数成虫负荷及肝组织虫卵数。设空载质粒免疫组为对照组。【结果】免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b ;实验组产生较高水平的IgA和IFN γ应答。pLXSN Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率 (2 6 47% ,34 0 8% )和减卵率 (4 0 0 2 % ,36 83% )。【结论】日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用 ,有可能成为有价值的疫苗候选分子 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 卵黄蛋白 MHCⅡ类基因 免疫应答 DNA免疫
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应用重组日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫病的研究 被引量:2
14
作者 肖西志 于三科 +4 位作者 林矫矫 顾越星 刘金明 张亮 沈阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期387-389,共3页
在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的O... 在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的OD值与阴性血清相当。结果表明 ,以重组日本血吸虫组织蛋白酶L作为诊断抗原检测日本血吸虫病牛感染情况 ,有一定的应用前景。 展开更多
关键词 重组日本血吸虫组织蛋白酶L 间接ELISA 诊断
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日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号转导蛋白epsilon亚型基因[Parasitol1]真核表达重组质粒的构建及序列分析
15
作者 唐小牛 汪学龙 +1 位作者 沈继龙 陈文魁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期220-222,227,共4页
目的 构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法 根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一... 目的 构建日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号转导蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,为进一步对重组蛋白的融合表达及保护性免疫的研究提供条件。方法 根据日本血吸虫 14 - 3- 3蛋白的核苷酸序列 ,设计合成一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫总RNA为模板 ,用RT -PCR法合成日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3蛋白epsilon亚型基因cDNA片段。将其克隆入 pGEM -T载体 ,经双酶切及PCR鉴定后 ,再亚克隆入 pBK -CMV真核表达质粒 ,构建重组质粒 pBK -Sj14 - 3- 3,转化到大肠杆菌BL2 1感受态细胞 ,提取重组质粒双酶切鉴定并进行序列分析。 结果 RT -PCR产物、pGEM -T -Sj14 - 3- 3及 pBK -Sj14 - 3- 3分别经双酶切均获得一特异性基因片段 经测序分析后该片段具有一个 75 3bp完整开放阅读框 (openreadingframe ,ORF) ,由此推导的氨基酸序列具有多种蛋白激酶的磷酸化位点。 结论 成功地构建了日本血吸虫中国大陆株 14 - 3- 3信号蛋白epsilon亚型基因真核表达重组质粒 ,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列蛋白激酶磷酸化位点进行分析。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14—3—3信号转导蛋白 epsilon亚型基因 真核表达 重组质粒 构建 序列分析
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重组日本血吸虫SjGST-Sj32蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究 被引量:16
16
作者 蔡春 易新元 +2 位作者 曾宪芳 周金春 舒新华 《湖南医科大学学报》 CSCD 1999年第3期225-228,共4页
应用基因工程技术分别表达出SjGSTSj32,Sj32和SjGST,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果:与对照组相比,重组SjGSTSj32组,Sj32组,Sj32+SjGST组均有明显的减... 应用基因工程技术分别表达出SjGSTSj32,Sj32和SjGST,用于保护性免疫的动物实验及其体液免疫机制的初步探讨。结果:与对照组相比,重组SjGSTSj32组,Sj32组,Sj32+SjGST组均有明显的减虫效果(P<0.05)。上述三组及SjGST组的肝脏虫卵计数均较对照组为少(P<0.01)。提示重组Sj32kD蛋白可诱导小鼠产生明显的抗日本血吸虫攻击感染的保护性免疫及抗生殖免疫效果,而SjGST仅表现出一定的抗生殖免疫效果。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组蛋白 疫苗 免疫 小鼠
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日本血吸虫rGST-Sj32蛋白免疫小鼠感染前后细胞因子水平的变化 被引量:6
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作者 蔡春 易新元 +3 位作者 王庆林 周金春 曾宪芳 Larry McReynolds 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期284-287,共4页
目的 :为进一步探讨rGST Sj32保护性免疫机制。 方法 :用rGST Sj32加弗氏完全佐剂 (FCA)皮下免疫BALB/c小鼠。于免疫前 ,攻击感染前 (第 3次免疫后 2wk)以及攻击感染后10d、30d及 4 5d ,各剖杀免疫组与对照组小鼠 5只 ,取脾细胞培养 ,... 目的 :为进一步探讨rGST Sj32保护性免疫机制。 方法 :用rGST Sj32加弗氏完全佐剂 (FCA)皮下免疫BALB/c小鼠。于免疫前 ,攻击感染前 (第 3次免疫后 2wk)以及攻击感染后10d、30d及 4 5d ,各剖杀免疫组与对照组小鼠 5只 ,取脾细胞培养 ,对体外培养的脾细胞诱生的细胞因子进行分析。结果 :用rSj32刺激体外培养的小鼠脾细胞时 ,第 3次免疫后2wk(即攻击感染前 )剖杀小鼠的脾细胞分泌IL 4、IL 5和IFN γ的水平与佐剂对照组相比较 ,均有不同程度的升高 ,分别为 ( 10 .2 1± 3.6 5 )ng/L (P >0 .0 5 )、( 19.89± 9.5 7)ng/L (P >0 .0 5 )、( 5 .0 9± 2 .5 1) μg/L (P <0 .0 1)。攻击感染后10d、30d及 4 5d ,对照组与免疫组IFN γ的水平未见升高 ;对照组IL 4和IL 5的水平随着感染时间的延长明显升高 ,免疫组升高不如对照组明显。结论 :rGST Sj32疫苗免疫BALB/c小鼠后 ,可诱导以Th1类细胞因子为主的免疫应答 ; 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组蛋白 免疫 细胞因子 小鼠
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日本血吸虫(中国大陆株)FABPc重组抗原高效融合表达、纯化及免疫学活性鉴定 被引量:4
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作者 赵巍 苏川 +4 位作者 吴海玮 胡雪梅 沈蕾 陈淑贞 张兆松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期43-45,共3页
目的 构建Sj-FABPc表达克隆 ,获得大量纯化rSj-FABPc重组 (日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )抗原 ,了解其作为候选疫苗抗原的潜能。方法 以PCR法从Sj-cDNA库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体pGEX - 6P - 1进行融合表达 ,经Glutathio... 目的 构建Sj-FABPc表达克隆 ,获得大量纯化rSj-FABPc重组 (日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )抗原 ,了解其作为候选疫苗抗原的潜能。方法 以PCR法从Sj-cDNA库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体pGEX - 6P - 1进行融合表达 ,经GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析柱和PreScissionTMProtease酶切后纯化出rSj-FABPc ,Westernblot鉴定其抗原性 ,以rSj-FABPc免疫小鼠 ,制备特异性抗血清 ,并用ELISA法检测重组抗原的免疫活性。结果 纯化的rSj-FABPc能被血吸虫成虫免疫兔血清和急、慢性血吸虫病人血清所识别 ,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答 ,抗体滴度为 1∶12 80 0。结论 rSj-FABPc具有良好的抗原性 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 脂肪酸结合蛋白 基因克隆 重组抗原
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蒿甲醚、血红素及Fe^3+对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶(rSjLDH)作用的初步研究 被引量:2
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作者 吕刚 胡旭初 +5 位作者 黄灿 谢红艳 徐劲 陈守义 吴忠道 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期132-136,共5页
目的检测蒿甲醚、血红素及Fe3+对rSjLDH的抑制作用,探讨蒿甲醚抗血吸虫幼虫可能的作用机制。方法在获得rSjLDH及建立标准酶活性测定体系的基础上,在标准酶活性测定体系中加入不同浓度的蒿甲醚、血红素及Fe3+,以药物相应的溶剂作为对照,... 目的检测蒿甲醚、血红素及Fe3+对rSjLDH的抑制作用,探讨蒿甲醚抗血吸虫幼虫可能的作用机制。方法在获得rSjLDH及建立标准酶活性测定体系的基础上,在标准酶活性测定体系中加入不同浓度的蒿甲醚、血红素及Fe3+,以药物相应的溶剂作为对照,测定药物对酶活性的影响。结果与相应对照组相比较,0.1 mmol/L的蒿甲醚对rSjLDH催化丙酮酸还原为乳酸及乳酸氧化为丙酮酸的反应无抑制作用(P>0.05);血红素对rSjLDH有极强的抑制作用,在0.015mmol/L时,rSjLDH催化乳酸氧化反应的活性被完全抑制(P<0.01),在浓度为0.02 mmol/L时,rSjLDH催化丙酮酸还原为乳酸的反应被抑制93.48%(P<0.01);0.1mmol/L蒿甲醚配伍0.004mmol/L血红素未发现对rSjLDH的抑制;Fe3+对rSjLDH有较强抑制作用,0.5mmol/L时rSjLDH催化正、逆反应的活性被完全抑制(P<0.01)。结论蒿甲醚对rSjLDH无抑制作用;血红素对rSjLDH有极强的抑制作用;蒿甲醚与血红素未发现有配伍作用;Fe3+对rSjLDH有较强的抑制作用。提示蒿甲醚不直接作用于SjLDH,血红素是SjLDH的强抑制剂,其在蒿甲醚作用机制中的作用需进一步研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 乳酸脱氢酶 重组蛋白 蒿甲醚 血红素 FE^3+
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日本血吸虫32kDa重组抗原的进一步研究 被引量:3
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作者 苏川 张兆松 +3 位作者 M.C.Huggins 吴海玮 陈淑贞 吴观陵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第6期3-6,共4页
用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以βgill构建的日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA表达库,获得一阳性克隆Sjgt4,将其插入片段经聚合酶链反应(PCR)法扩增后亚克隆入表达载体pTrcHisB并进行表达,获37kDa融合蛋白,它可溶于8M尿素,并可... 用慢性日本血吸虫病病人血清筛选以βgill构建的日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA表达库,获得一阳性克隆Sjgt4,将其插入片段经聚合酶链反应(PCR)法扩增后亚克隆入表达载体pTrcHisB并进行表达,获37kDa融合蛋白,它可溶于8M尿素,并可被日本血吸虫病病人血清中特异抗体所识别。以此37kDa融合蛋白免疫家免所得的抗血清,可特异地识别日本血吸虫成虫抗原的67kDa分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫 重组抗原 Sjgt4 融合蛋白
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