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重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定
被引量：
2
1
作者
官孝群
王跃祥
+2 位作者
莫炜
吴良成
宋后燕
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期1-4,共4页
目的 分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计...
目的 分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计数 ;孵化 7d的鸡胚加r K4K5后继续孵育 72h ,观察新生血管生成 ;已经接种人SPC Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠 (Balb/c ,nu/nu) ,瘤旁注射r K4K5继续饲养 ,观察肿瘤生长变化。结果 r K4K5抑制BCE细胞增殖 ,48～ 72h作用明显 ;r K4K5处理的CAM组中直径小于 5 0 μm的小血管明显减少 ;高剂量r K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组 ,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r K4K5能够抑制BCE细胞增殖 ,抑制鸡胚CAM新生血管生成 ,抑制实验性人SPC Al肺腺癌生长。
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关键词
重组
血管
生成
抑制
因子
r-
k
4
k
5
分离
纯化
鉴定
肺腺癌
在线阅读
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职称材料
人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定
被引量：
1
2
作者
杨健
王跃祥
+3 位作者
官孝群
马春姑
陶贤梅
宋后燕
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期409-413,F002,共6页
目的 构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片...
目的 构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果 构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论 应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。
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关键词
乳腺癌
基因治疗
重组新生血管生成抑制因子k5
基因表达
真核表达载体
构建
活性鉴定
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职称材料
题名
重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定
被引量：
2
1
作者
官孝群
王跃祥
莫炜
吴良成
宋后燕
机构
复旦大学基础医学院分子遗传学研究室
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科
出处
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期1-4,共4页
文摘
目的 分离纯化r K4K5 ,探讨r K4K5对牛毛细血管内皮 (BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r K4K5 ,BCE细胞在含r K4K5的DMEM中培养 2 4、48、72h后分别计数 ;孵化 7d的鸡胚加r K4K5后继续孵育 72h ,观察新生血管生成 ;已经接种人SPC Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠 (Balb/c ,nu/nu) ,瘤旁注射r K4K5继续饲养 ,观察肿瘤生长变化。结果 r K4K5抑制BCE细胞增殖 ,48～ 72h作用明显 ;r K4K5处理的CAM组中直径小于 5 0 μm的小血管明显减少 ;高剂量r K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组 ,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r K4K5能够抑制BCE细胞增殖 ,抑制鸡胚CAM新生血管生成 ,抑制实验性人SPC Al肺腺癌生长。
关键词
重组
血管
生成
抑制
因子
r-
k
4
k
5
分离
纯化
鉴定
肺腺癌
Keywords
Cells
Gels
Pulmonary diseases
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定
被引量：
1
2
作者
杨健
王跃祥
官孝群
马春姑
陶贤梅
宋后燕
机构
复旦大学上海医学院细胞与遗传学系-教育部分子医学重点实验室
出处
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2003年第5期409-413,F002,共6页
文摘
目的 构建含人纤溶酶原K5区基因的真核表达载体 ,转染人乳腺癌细胞株MDA MB 2 31,观察阳性克隆表达的K5蛋白对人脐静脉内皮细胞株ECV30 4和MDA MB 2 31细胞增殖的影响。方法 应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5cDNA ,所得的目的片段与真核表达载体 pcDNA3重组 ,构建重组质粒pcDNA3K5 ,脂质体法将其转染MDA MB 2 31,G4 18筛选阳性克隆 ,PCR鉴定 ,RT PCR和Westernblot检测K5的表达。将鉴定正确的阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞 ,MTT法检测其增殖情况 ,并用MTT法检测转染 pcD NA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖的影响。结果 构建的重组质粒 pcDNA3K5经酶切鉴定、测序正确 ,将其转染MDA MB 2 31后挑取的阳性克隆有 3个经PCR鉴定正确 ,并经RT PCR和Westernblot检测证实K5的表达。阳性克隆的培养上清作用于ECV30 4细胞后 ,其存活率降低 ;转染 pcDNA3K5对MDA MB 2 31细胞增殖无明显影响。结论 应用脂质体法将带有人纤溶酶原信号肽序列的K5cDNA转染MDA MB 2 31细胞后 ,其分泌产生的有生物学活性的K5 ,呈现对ECV30 4细胞增殖的抑制作用 ,而对MDA MB 2 31细胞的生长则无影响。
关键词
乳腺癌
基因治疗
重组新生血管生成抑制因子k5
基因表达
真核表达载体
构建
活性鉴定
Keywords
Assays
Cells
Cloning
Gene transfer
Proteins
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定
官孝群
王跃祥
莫炜
吴良成
宋后燕
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2001
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人纤溶酶原K5区基因真核表达载体的构建和活性鉴定
杨健
王跃祥
官孝群
马春姑
陶贤梅
宋后燕
《复旦学报（医学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
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