重组抗体-白细胞介素2融合蛋白对重症免疫缺陷鼠人神经纤维瘤肝转移灶生长的抑制作用

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作者 雷虹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1994年第1期17-17,共1页

临床试验表明，在神经纤维瘤患者中单独应用rh IL-2或鼠抗GD2与人的嵌台变异体ch14.18能通过激活LAK细胞或通过外周血单核细胞介导的ADCC作用杀死瘤细胞，通过基因工程将二者融合成为ch14．18-IL-2融台蛋白能特异地将rh IL-2导向肿瘤位... 临床试验表明，在神经纤维瘤患者中单独应用rh IL-2或鼠抗GD2与人的嵌台变异体ch14.18能通过激活LAK细胞或通过外周血单核细胞介导的ADCC作用杀死瘤细胞，通过基因工程将二者融合成为ch14．18-IL-2融台蛋白能特异地将rh IL-2导向肿瘤位点，抑制瘤细胞播散与生长的能力要比单独使用rh IL-2更有效。本研究选用人神经纤维瘤系SKN—AS细胞5×10^5／100μl PBS注入CB—17scid小鼠脾包膜下构建肝转移模型。 展开更多

关键词 重组抗体-白细胞介素2融合蛋白 重症免疫缺陷 神经纤维瘤 肝转移灶 抑制作用

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重组小鼠白细胞介素-27融合蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

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作者 路晓红 付玉荣 伊正君 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期185-190,共6页

目的:制备重组小鼠白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性。方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到... 目的:制备重组小鼠白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性。方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到的小鼠IL-27单链融合基因片段克隆于p ET-32a(+)载体。阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,利用SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达。以纯化的IL-27融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗小鼠IL-27融合蛋白的多克隆抗体,利用Western blot和ELISA进行特异性及效价分析。结果:从小鼠脾细胞总RNA中扩增得到IL-27单链融合基因经测序与预期序列一致;在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,SDS-PAGE显示表达出的融合蛋白相对分子质量(molecular weight,Mr)约67 000;Western blot结果表明该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;该蛋白免疫新西兰大白兔后获得抗血清,Western blot结果显示该血清可以特异性地与IL-27融合蛋白结合,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶3 200。结论:在大肠杆菌中成功表达出小鼠IL-27融合蛋白,并制备出效价较高、特异性较好的兔抗小鼠IL-27多克隆抗体。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-27 重叠延伸PCR 融合蛋白 原核表达 多克隆抗体

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重组鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体内抗传染性法氏囊病病毒作用研究 被引量：8

3

作者 程俊贞 闫若潜 +9 位作者 吴志明 赵明军 闫志玲 刘梅芬 赵雪丽 孔刚锐 陈慧娟 杨晓璐 张书阳 刘毅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期140-145,共6页

为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV... 为研究原核表达的鸡干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN--Linker-ChIL-2)在SPF鸡体内的抗病毒作用,本研究将传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒株与rChIFN--Linker-ChIL-2同时接种21日龄SPF鸡,并分别通过临床观察和攻毒后(dpc)不同时间IBDV排毒率、带毒时间、在不同组织器官的动态分布及其体液和细胞免疫指标的检测以评价该重组融合蛋白抗IBDV的效果。结果显示:与IBDV攻毒对照组相比,融合蛋白与IBDV同时接种组鸡的发病率、死亡率和典型症状维持时间及排毒率、外周血持续带毒时间和不同组织器官带毒时间均显著低于对照组。但试验组鸡的IBDV抗体水平于7 dpc^42 dpc则极显著低于对照组(p<0.01)。然而,其血清中ChIFN-α、ChIFN-γ、ChIL-2、ChIL-6和ChIL-4表达水平(3 dpc^21 dpc)以及外周血T淋巴细胞(PBLC)增殖活性(7 dpc^21 dpc)、脾淋巴细胞增殖活性(7 dpc^14 dpc)均显著高于对照组(p<0.01)。结果表明:融合蛋白可以通过上调机体细胞因子的表达水平、增强鸡体PBLC和脾淋巴细胞增殖活性等方式增强机体的细胞免疫能力,从而发挥抗病毒作用和免疫增强作用。 展开更多

关键词 重组鸡干扰素 白细胞介素 2融合蛋白 传染性法氏囊病病毒 抗病毒 免疫增强 作用

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重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的纯化及复性 被引量：6

4

作者 胡志明 林来兴妹 +2 位作者 周明乾 陈泽洪 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期206-207,214,共3页

目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具... 目的探讨该所发明的新方法对重组人白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素(IL2-PE664Glu)融合蛋白进行纯化与复性的效果。方法采用该所发明的新方法提纯包涵体,包涵体复性后,样品经DEAE-SepharoseFF离子交换层析,获得融合蛋白纯品。结果获得的具有生物学活性的融合蛋白纯度达到95%,复性回收率为80%。结论此包涵体分离纯化技术简便、实用,可为中试研究和规模化生产提供基础。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-2 绿脓杆菌外毒素 融合蛋白 纯化 复性

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白体外活性评价方法研究 被引量：5

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作者 杨晓璐 闫若潜 +4 位作者 李勤楠 赵雪丽 谢彩华 刘梅芬 张书阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期3153-3159,共7页

为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应... 为建立稳定、便捷的重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白(rChIFN-α-Linker-ChIL-2蛋白,重组融合蛋白)体外活性评价方法,本研究分别采用ChIFN-α和ChIL-2ELISA方法检测重组融合蛋白与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性;采用细胞病变抑制法检测重组融合蛋白在DF1细胞上抑制水疱性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖活性;采用MTS法分别测定重组融合蛋白促鸡外周血T淋巴细胞(PBLC)和脾淋巴细胞增殖活性。结果表明,重组融合蛋白可以与抗ChIFN-α单抗和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应;重组融合蛋白在DF1细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV活性高于抗IBDV活性,且均明显高于rChIFN-α蛋白对照;不同浓度的重组融合蛋白均具有明显的促鸡PBLC和脾淋巴细胞增殖活性,且其促增殖活性明显高于rChIFN-α蛋白对照。本研究成功建立了重组融合蛋白体外活性检测评价方法,为进一步探究重组融合蛋白在鸡体内协同作用奠定基础。 展开更多

关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素-2 重组融合蛋白 体外活性

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重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白对鸡外周血T淋巴细胞亚群的影响研究 被引量：4

6

作者 杨晓璐 闫若潜 +6 位作者 吴志明 刘梅芬 张代宝 张书阳 王淑娟 赵雪丽 刘毅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期175-178,共4页

为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试... 为了研究重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白（rChIFN-α-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白）对SPF鸡外周血T淋巴细胞亚群含量影响,本研究采用流式细胞术对重组融合蛋白（第2组）和rChIFN-α蛋白（第3组）注射14日龄SPF鸡后不同时间对各试验组鸡外周血T淋巴细胞（PBLC）中CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分含量以及CD4^＋/CD8^＋比值进行检测。结果表明,与对照组相比,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白在鸡体内接种后3～14d均可明显提高鸡外周血T淋巴细胞中CD3^＋CD4^＋细胞百分含量,降低CD3^＋CD8^＋细胞的百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值;接种后3～7d期间,第2组鸡的CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞含量及CD4^＋/CD8^＋比值与PBS对照组（第1组）相比差异均极显著（P〈0.01）,第3组与第1组相比差异均显著（P〈0.05）。以上结果表明,重组融合蛋白和rChIFN-α蛋白接种鸡体后均可显著影响鸡PBLC中淋巴细胞亚群百分含量,提高CD4^＋/CD8^＋比值,增强机体的细胞免疫功能;重组融合蛋白对鸡淋巴细胞亚群百分含量、CD4^＋/CD8^＋比值影响程度和细胞免疫功能的增强作用优于rChIFN-α蛋白;重组融合蛋白在体内发挥了鸡α干扰素和白细胞介素-2对细胞免疫功能的协同增强作用。 展开更多

关键词 重组鸡α干扰素/白细胞介素-2融合蛋白 重组鸡α干扰素蛋白 T淋巴细胞亚群 CD4^+/CD8^+比值 免疫功能

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重组人白细胞介素-2/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白的纯化及复性研究 被引量：3

7

作者 林来兴妹 周明乾 +4 位作者 陈泽洪 胡志明 刘菁 黄树琪 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期245-247,共3页

目的 研究重组人白细胞介素－２／粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＩＬ－２／ＧＭ－ＣＳＦ）融合蛋白纯化及复性的最佳条 件。方法 常规方法提取包涵体，用本室专利技术提纯，复性后样品经 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ离子交换... 目的 研究重组人白细胞介素－２／粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＩＬ－２／ＧＭ－ＣＳＦ）融合蛋白纯化及复性的最佳条 件。方法 常规方法提取包涵体，用本室专利技术提纯，复性后样品经 ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ离子交换层析，获得融合蛋 白。结果获得具有生物活性的融合蛋白，其纯度达到９５％。结论 此工艺操作简便，纯化效果好，获得率高。 展开更多

关键词 白细胞介素-2 粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子 融合蛋白 包涵体 纯化 复性

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重组人抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

8

作者 余宙耀 陈文吟 +1 位作者 饶桂荣 粟宽源 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期153-155,共3页

目的　探讨抗 HBs单链抗体与白细胞介素 2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定方法。方法　将构建的目的蛋白表达工程菌M15[pQE ScFv IL 2 ]经IPTG诱导后 ,通过SDS PAGE及Westernblot分析鉴定表达产物 ;再通过Ni2 + 离子金属螯合亲和层析... 目的　探讨抗 HBs单链抗体与白细胞介素 2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定方法。方法　将构建的目的蛋白表达工程菌M15[pQE ScFv IL 2 ]经IPTG诱导后 ,通过SDS PAGE及Westernblot分析鉴定表达产物 ;再通过Ni2 + 离子金属螯合亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白 ;采用逐步透析法对纯化后的目的蛋白进行复性后 ,用间接ELISA实验和CTLL 2细胞增殖反应实验对其进行活性鉴定。结果　SDS PAGE及Westernblot分析结果显示有分子量约为 4 3kD的重组蛋白表达 ,表达量可达 18% ;两步纯化后凝胶成像分析目的蛋白的纯度达到 95 % ;复性后纯化产物的活性鉴定结果表明 ,重组抗体融合蛋白既能与HBsAg特异性结合 ,也能刺激CTLL 2细胞增殖。结论　获得的抗体融合蛋白兼具亲本分子的双特异性 ,为慢性乙型肝炎及相关疾病的导向治疗研究打下了良好基础。 展开更多

关键词 单链抗体 白细胞介素2 融合蛋白

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重组人白细胞介素-6融合蛋白的大肠杆菌发酵工艺

9

作者 甘一如 胡飞雄 +2 位作者 张瑛 林峰 马兰芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 1999年第5期82-85,共4页

研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入... 研究了重组大肠杆菌表达人白细胞介素-6(rhIL-6)融合蛋白的发酵工艺。摇瓶实验对比了不同培养基对重组菌密度和rhIL-6表达量的影响,确定了以含0.1%葡萄糖的2×YT培养基为最适培养基。同时,还对诱导剂异丙基疏基半乳糖苷(IPTG)加入量进行优化,按每升发酵液加入0.02mmol,就能有效诱导rhIL-6的表达。在10 L发酵罐间歇实验中,以含0.1%葡萄糖的2×YT为培养基,比较了溶氧、pH、诱导前培养时间、诱导后培养时间对rhIL-6的表达量和菌密度的影响,得到最优培养条件为pH为6.8～7.0,接种量4%,温度37℃,诱导前溶氧量30%,在O.D._(600)为1.2～1.8时加入IPTG诱导,控制诱导后溶氧为5%～10%,再培养5 h,最终rhIL-6表达量为38%,菌体密度为5.8 g/L。 展开更多

关键词 人白细胞介素-6 融合蛋白 发酵 重组大肠杆菌 化学诱导

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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2融合基因在PAK/2pfs细胞中的表达与鉴定

10

作者 刘艳环 郑皓 +1 位作者 苗利光 王克坚 《特产研究》 2004年第4期5-7,共3页

将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔... 将前期工作中筛选出的含有腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素-2(Pilin-IL-2)融合基因表达载体的PAK/2pfs工程菌[1]接种于营养肉汤,40℃培养16～18h,离心,向上清液中加入饱和(NH4)2SO4提取Pilin-IL-2融合基因表达蛋白。用羊抗兔E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的融合蛋白进行对流免疫电泳,证明该融合蛋白具有特异性,且有较高的表达量。经SDS-PAGE电泳和Westernblot确证其为Pilin-IL-2融合蛋白。 展开更多

关键词 融合基因 IL-2 白细胞介素-2 纤毛 融合蛋白 表达 杆菌 腐蹄病 绵羊 对流免疫电泳

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猪白细胞介素-2和融合抗菌肽重组酵母菌构建及其对小鼠免疫和生长的协同效应

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作者 胡冰 吴雪颖 +7 位作者 马常俊 万小平 肖永乐 陈建林 李江淩 吕学斌 王泽洲 高荣 《四川动物》 北大核心 2018年第6期609-619,共11页

为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和... 为了开发经济实用的新型免疫调节剂,以2A自剪切技术构建重组毕赤酵母Pichiapastoris共同表达猪白细胞介素-2(IL-2)和融合抗菌肽基因,然后以重组基因工程酵母菌饲喂ICR小鼠,以实时荧光定量PCR、ELISA和流式细胞计数评估其对小鼠免疫力和生长的影响。实验结果显示,处理组(融合抗菌肽重组酵母菌、IL-2和融合抗菌肽重组酵母菌)小鼠的生长明显优于对照组(空质粒酵母菌)(P <0. 05),且血清Ig G、Ig G1和Ig G2a含量显著升高(P <0. 05); TLR1、TLR4、TLR6、TLR9、IL-7、IL-15、IL-23、CD62L、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、CRP4和CAMP基因的表达水平显著增加(P <0. 05)。同时,处理组小鼠血液白细胞Th和Tc细胞明显增多(P <0. 05),免疫力和存活率均明显高于对照组(P <0. 05)。重组酵母菌能有效增强小鼠的先天和获得性免疫力,促进生长,可进一步开发成安全有效的免疫调节生物制剂,改善动物的生长和免疫力。 展开更多

关键词 猪白细胞介素-2 融合抗菌肽 重组毕赤酵母 小鼠 免疫

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重组白细胞介素-2对固始鸡免疫机能的影响 被引量：7

12

作者 张怀 高春生 +2 位作者 蒋媛媛 赵峰 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期48-51,共4页

本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗... 本试验旨在探讨重组白细胞介素-2(IL-2)对固始鸡免疫机能的影响。应用大体解剖技术和免疫技术,对重组IL-2对固始鸡免疫机能的影响进行了研究。注射固始鸡IL-2的各免疫组的抗体水平均高于鸡志贺氏菌苗组,明显高于空白对照组;各免疫组抗体水平在第2～3周达到最高水平,以后在4～7周内基本保持恒定水平;注射IL-2的各免疫组的脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数基本上均高于空白对照组和鸡志贺氏菌苗组。重组IL-2可促进固始鸡免疫器官的生长发育和成熟,增强鸡的免疫机能,可抵抗各种病原微生物的感染。 展开更多

关键词 重组白细胞介素-2 固始鸡 免疫机能 抗体

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重组白细胞介素-2对猪瘟疫苗免疫效果的影响 被引量：12

13

作者 张光勤 李旺 +1 位作者 赵星灿 李治力 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期174-176,共3页

观察了重组IL 2对经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗免疫效果的影响.结果表明,进行猪瘟免疫时应用重组IL 2,可以显著提高经产母猪和育成母猪猪瘟疫苗的抗体滴度水平及整齐度.

关键词 重组白细胞介素-2 猪瘟 疫苗 免疫效果 抗体滴度

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重组白细胞介素-2提高口蹄疫疫苗免疫效果的试验 被引量：9

14

作者 张光勤 赵星灿 +2 位作者 胡益源 李治力 姚延峰 《河南畜牧兽医》 2002年第10期4-5,共2页

本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶195... 本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶1955.6,两组中所有抗体滴度均大于1∶64;对育成母猪的试验显示类似结果:重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫55天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶1361.8,且抗体滴度均大于1∶64,而对照组平均抗体滴度为1∶855.4,且其中抗体滴度小于1∶64的占7.1%。说明重组IL-2可以显著提高经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗的抗体滴度水平,同时也可提高育成母猪口蹄疫抗体整齐度。 展开更多

关键词 重组白细胞介素-2 口蹄疫 疫苗 免疫效果 抗体滴度

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单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构的确证

15

作者 董标 梁月琴 +1 位作者 王杰 董方霆 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期125-127,共3页

建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素... 建立单克隆抗体-白介素2融合蛋白一级结构确证的方法。用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定单克隆抗体-白介素2融合蛋白的精确相对分子质量,毛细管等电聚焦方法测定其等电点,通过N_末端氨基酸序列的测定以及肽图分析,证实了抗体-白介素2融合蛋白一级结构表达的正确性,同时为单克隆抗体-白介素2融合蛋白的质量标准研究奠定了基础。 展开更多

关键词 单克隆抗体-白介素2融合蛋白 结构确证 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 肽图 毛细管等电聚焦

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双抗体夹心ELISA定量检测IL-2-HSA融合蛋白 被引量：4

16

作者 张红梅 李波 +3 位作者 段作营 雷楗勇 金坚 李华钟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期175-179,共5页

以抗人IL-2多克隆抗体为包被抗体,以IL-2-HSA融合蛋白为夹心抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定完整的IL-2-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度分别为为2... 以抗人IL-2多克隆抗体为包被抗体,以IL-2-HSA融合蛋白为夹心抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定完整的IL-2-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度分别为为2μg/mL和0.5μg/mL,方法的线性检测范围39.06～1250ng/mL,标准曲线回归方程为y=0.4429x-1.1433,r=0.9966,灵敏度可达10.25ng/mL,批内、批间变异系数分别为6.40%和7.81%,发酵上清液中回收率为98.13%～102.94%,与IL-2、HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液及小鼠血清组分及稀释倍数对该方法无影响。该方法可用于该融合蛋白的发酵过程优化、分离纯化工艺、后期药动学、临床研究等的定量检测。 展开更多

关键词 双抗体夹心ELISA 定量分析 融合蛋白 白介素2-人血清白蛋白

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重组白细胞介素2对固始鸡空肠黏膜免疫增强作用的研究 被引量：3

17

作者 赵珊珊 张怀 +2 位作者 徐亚平 李超 肖传斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期60-64,共5页

本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠... 本试验旨在研究重组白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对固始鸡空肠黏膜免疫的作用。以父母代固始鸡为试验动物,用添加不同剂量的重组IL-2佐剂的鸡新城疫疫苗对试验鸡进行分组免疫,应用免疫组织化学技术,通过Qwin图像处理系统对鸡空肠内分泌型免疫球蛋白A(sIgA)阳性细胞及其分泌物分布和阳性面积量进行系统分析。结果表明,sIgA阳性细胞及其分泌物主要分布于肠绒毛的固有层和肠腺腔中。在新城疫疫苗组中添加重组IL-2能够提高sIgA细胞的分泌,从而提高动物体的免疫能力。重组IL-2对增强免疫性有一定的作用,且IL-2的添加剂量在50μg时对增加新城疫疫苗的免疫性效果最佳。 展开更多

关键词 重组白细胞介素-2 空肠 分泌型免疫球蛋白 固始鸡

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rhIL-2/GM-CSF融合蛋白抗体制备、鉴定及其生物学活性研究

18

作者 林来兴妹 周明乾 +2 位作者 陈泽洪 张亚莉 王小宁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1103-1105,共3页

目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特... 目的 :制备 rh IL - 2 / GM- CSF融合蛋白的抗体 ,并观察该抗体的特异性及对融合蛋白生物学活性的影响。方法 :用纯化的融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF)作为抗原 ,免疫新西兰兔后制备抗血清 ,用 EL ISA和 Dot- EL ISA检测抗体滴度和特异性。用依赖株细胞增殖实验检测抗体对 rh IL - 2 / GM- CSF生物学活性的影响。 结果 :此抗体效价高 ,特异性好 ,不仅与融合蛋白(rh IL - 2 / GM- CSF)、IL - 2以及 GM- CSF发生反应 ,而且能够竞争抑制 rh IL - 2 / GM- CSF的生物学活性。 结论 :此抗体可用于融合蛋白 (rh IL - 2 / GM- CSF) 展开更多

关键词 RHIL-2 GM-CSF 融合蛋白 抗体 制备 鉴定 生物学活性 白细胞介素-2 粒-巨噬细胞集落刺激因子

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人白细胞介素-29cDNA克隆及其在大肠杆菌系统的表达

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作者 张胜权 鲁云霞 +2 位作者 罗欣 徐从贞 陈兵 《实用医学杂志》 CAS 2005年第1期5-7,共3页

目的:克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗IL-29多克隆抗体。方法:分离外周血单核细胞;vsv感染后,提取总RNA,通过一步RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后,将IL-29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+... 目的:克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在大肠杆菌中表达,制备抗IL-29多克隆抗体。方法:分离外周血单核细胞;vsv感染后,提取总RNA,通过一步RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后,将IL-29cDNA的编码框序列构建到原核表达载体pET28a(+)中。卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增、转化大肠杆菌进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Westernblotting鉴定,亲和层析分离纯化得到Mr为23000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。纯化的IL-29免疫家兔制备抗IL-29多克隆抗体。结果:成功获得人IL-29全长cDNA,并以包涵体形式表达于大肠杆菌中。免疫家兔后获得特异抗IL-29的多克隆抗体。结论:获得rhIL-29细胞因子及其多克隆抗体,为其进一步研究及应用奠定基础。 展开更多

关键词 重组人IL-2 表达 多克隆抗体 白细胞介素-2 大肠杆菌 感染后 外周血单核细胞 全长CDNA 阳性克隆 CDNA克隆

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双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

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作者 郭世梁 张颖丽 +1 位作者 张影杰 柏祥娥 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1029-1031,1035,共4页

目的:观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法:在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结... 目的:观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法:在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果:比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论:HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β) 双向电泳(2-DE) 蛋白质组 人牙髓细胞(HDPCs)

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