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重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3: 1; 作者邓林刘孝菊 +5 位作者龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页; 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2... 展开更多; 关键词高效表达重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2; 作者薛萍朱小静 +4 位作者刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页; 目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d2... 展开更多; 关键词角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞杆状病毒系统; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究被引量：3: 3; 作者周昭范清林宋礼华《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期13-16,20,共5页; 在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构... 展开更多; 关键词重组人角质细胞生长因子-1 SUMO蛋白原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

KGF-1二硫键突变体对肝纤维化的保护作用: 4; 作者谢敏万颖 +3 位作者张增涛何建军杨黎范开《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第4期45-49,共5页; 观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含... 展开更多; 关键词重组人角质细胞生长因子-1突变体二硫键肝纤维化四氯化碳; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3: 1; 作者邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃; 机构吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉林农业大学生命科学学院吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室温州医学院药学院生物技术制药工程重点实验室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页; 基金科技部重大新药创制项目资助课题(2009ZX09102); 文摘目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。; 关键词高效表达重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化; Keywords high expression recombinant truncated human keratinocyte growth factor-1 purification; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2; 作者薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃; 机构吉林农业大学生命科学学院吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心温州医学院药学院浙江省生物技术与制药工程重点实验室吉林大学第二医院检验科吉林大学白求恩医学院生物化学教研室; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期633-639,共7页; 基金国家863计划项目资助课题(2010AA100069); 文摘目的:探讨重组截短型人角质细胞生长因子1(rhKGF1D23)蛋白在昆虫细胞中表达的可行性,为rhKGF1D23蛋白的生产提供新的途径。方法:PCR法扩增昆虫偏爱密码子优化截短序列kgf1d23亚克隆到pFastbac载体。在辅助质粒的作用下,pFastBac-kgf1d23载体Tn7片段转座到Bacmid中mini-attTn7位点,得到穿梭载体Bacmid-kgf1d23,并通过脂质体法转染sf-9细胞得到杆状病毒P1。继续转染细胞扩增病毒并提高病毒滴度,蛋白表达分析从P3代病毒转染细胞开始,收集细胞超声裂解后进行纯化,MTT法检测纯化后目的蛋白生物活性。结果:昆虫偏好密码子改造的kgf1d23基因构建进转移载体pFastBac-kgf1d23和穿梭载体Bacmid-kgf1d23载体中。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在60h后开始大量表达,优化的收获蛋白时间在84～96h;利用肝素亲和层析和SP阳离子交换层析可以去除90%以上的杂蛋白。纯化的rhKGF1D23蛋白在0.3～25.0μg.L-1时,随浓度的增加HaCat细胞的促有丝分裂能力增强,在25.0μg.L-1时达到平台期。结论:重组截短型角质细胞生长因子rhKGF1D23蛋白在昆虫细胞中得到表达,保持其特有的肝素亲和特性,并具有免疫原性及细胞生物学活性。; 关键词角质细胞生长因子1 截短突变 sf-9细胞杆状病毒系统; Keywords keratinocyte growth factor 1 truncated mutation sf-9 cells baculovirial expression system; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究被引量：3: 3; 作者周昭范清林宋礼华; 机构安徽大学生命科学学院安徽安科生物股份有限公司; 出处《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期13-16,20,共5页; 文摘在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。; 关键词重组人角质细胞生长因子-1 SUMO蛋白原核表达; Keywords recombinant human keratinocyte growth factor-1 SUMO protein prokaryotic expression; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名KGF-1二硫键突变体对肝纤维化的保护作用: 4; 作者谢敏万颖张增涛何建军杨黎范开; 机构重庆理工大学药学与生物工程学院重庆富进生物医药有限公司; 出处《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第4期45-49,共5页; 基金国家科技重大专项资助项目(2012zx09103301-052) 重庆市自然科学基金资助项目(CSTC2007BB5412); 文摘观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含二硫键)进行体内抗纤维化活性的比较,并研究其对人肝星状细胞系的抑制作用。结果表明,与模型组相比,KGF-1突变体的各项指标均优于模型组,并且△23Ser102 KGF-1可明显抑制人肝星状细胞系的生长,可见KGF-1突变体不含二硫键组对大鼠试验性肝损伤有明显保护作用。此外实验还证明二硫键的有无会直接影响蛋白质的生物活性。; 关键词重组人角质细胞生长因子-1突变体二硫键肝纤维化四氯化碳; Keywords KGF-1 mutant disulfide bond hepatic fibrosis CCl4; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化	邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2010	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组截短型人角质细胞生长因子1在昆虫细胞中的表达	薛萍朱小静刘孝菊李一兰南佳姜潮李校堃	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究	周昭范清林宋礼华	《生物学杂志》 CAS CSCD	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	KGF-1二硫键突变体对肝纤维化的保护作用	谢敏万颖张增涛何建军杨黎范开	《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料