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表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建 被引量：1
1
作者 田静格 徐鸣荷 +16 位作者 王向东 张意航 李岩 刘俊杰 李星雨 韩城昊 张伯顺 卜德新 于春梅 丛雁方 杨盼盼 乔麒龙 王增 李建丽 李永涛 王白玉 赵军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期659-665,共7页
为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa S... 为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 重组嵌合型新城疫病毒 gD蛋白 二联活疫苗
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重组新城疫病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的研究 被引量：2
2
作者 王子龙 葛金英 +3 位作者 王云鹤 于桂梅 孙继国 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期979-981,共3页
为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的... 为构建表达猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)的重组新城疫病毒(NDV),本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株为活病毒载体,通过反向遗传操作系统构建出表达PCV2 Cap的重组病毒(r La-PCV2/Cap),以及表达删除核定位信号(NLS)的Cap(CapΔ41)的重组病毒(r La-PCV2/CapΔ41),并对外源蛋白的表达效果进行了检测。通过间接免疫荧光试验证明,两种重组病毒感染的BHK-21细胞中,PCV2 Cap蛋白以及删除NLS的CapΔ41蛋白均获得正确表达;其中,完整的Cap蛋白定位于核内,而删除NLS的CapΔ41蛋白则定位于胞浆中,本研究结果为研究新型PCV2疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组新城疫病毒 CAP蛋白 核定位信号
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人白细胞介素18和新城疫病毒HN基因嵌合表达载体的构建与表达
3
作者 解丽华 金宁一 +4 位作者 邵国喜 米志强 连海 薛丽娟 李萍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期352-354,共3页
目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合... 目的:构建人白细胞介素18(IL - 18)与新城疫病毒(NDV) HN基因嵌合表达质粒。方法:选用适当的限制性核酸内切酶将NDV的HN基因连接至真核表达质粒p VAX1IL - 18中IL - 18基因的尾部,同时替换掉IL - 18基因的终止子,构建表达IL - 18HN嵌合基因的p VAX1IL - 18HN质粒,经酶切鉴定正确后,通过脂质体介导转染He L a细胞,应用Western blotting及血凝试验检测其表达情况。结果:酶切鉴定证实正确地构建了p VAX1IL - 18HN嵌合表达质粒,Western blotting和血凝试验检测结果表明,嵌合后的IL - 18和HN基因均能够表达,且表达的HN蛋白具有较高的血凝活性。结论:IL - 18和HN基因嵌合后不影响二者的表达,而且表达的HN蛋白具有血凝活性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 重组 遗传 白细胞介素18 嵌合表达质粒 基因表达
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嵌合跨膜型人CD55基因的重组逆病毒表达质粒的构建 被引量：1
4
作者 杜瑞琴 白云 +1 位作者 黎万玲 姜曼 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期48-51,共4页
目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5... 目的　构建嵌合跨膜型CD5 5基因的重组逆病毒表达质粒。方法　采用PCR技术扩增编码CD5 5信号肽及成熟蛋白胞外区 (-3 4 -3 0 4aa)的DNA片段 ,双侧引入EcoRⅠ、SspⅠ位点 ,与编码CD46分子的跨膜区及膜内区 (2 70～ 3 5 0aa)的DNA片段的5’末端自身的StuI位点连接 ,构建嵌合跨膜型CD5 5DNA片段 ,序列测定后将此嵌合CD5 5片段与pLXSN逆病毒载体连接构建重组表达质粒 ,酶切鉴定插入片段的方向。结果　DNA序列测定证实所构建的嵌合跨膜型CD5DNA阅读框完整、连接部位序列正确 ;HindⅢ酶切鉴定得到了正向插入的CD5 5TM pLXSN重组表达质粒。结论　我们成功构建了嵌合跨膜型CD5 5DNA片段及含此片段的重组逆病毒表达载体CD5 5TM pLXSN ,为进一步在真核细胞中表达嵌合分子 ,比较研究GPI锚固型CD5 5分子与细胞活化信号转导的关系建立良好对照并为应用跨膜型的CD5 5分子对PNH进行基因治疗奠定了分子生物学基础。 展开更多
关键词 嵌合跨膜型分子 重组逆转录病毒表达载体 CD55基因 质粒
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融合域点突变的埃博拉病毒GP蛋白重组新城疫病毒的构建与免疫评价
5
作者 张海琳 王金良 +4 位作者 王翀 温志远 刘任强 步志高 葛金英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期171-177,共7页
扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋... 扎伊尔型埃博拉病毒(EBOV)的感染会引起人类以严重出血和发热为主要症状的传染病,死亡率高达90%,对公共卫生构成严重威胁。EBOV囊膜蛋白(GP)是病毒主要的免疫原性蛋白。本团队前期的研究表明,以新城疫病毒(NDV)为载体构建表达EBOV GP蛋白的重组病毒rLa-EBOVGP改变了NDV的侵入方式。为了研制出安全性更高的埃博拉候选疫苗株,本研究将EBOV GP蛋白的融合域I532突变为R后插入NDV LaSota疫苗株(rLa)基因组中,通过反向遗传学操作拯救表达EBOV GP(I532R)蛋白的重组NDV,并将经PCR鉴定正确的重组病毒在鸡胚中连续传代检测了其的体外遗传稳定性。RT-PCR鉴定结果显示,EBOV突变的GP(I532R)蛋白基因正确插入了NDV基因组中,表明获得了重组病毒rLa-EBOVGP(I532R);在鸡胚中连续传20代后,经RT-PCR扩增EBOV GP(I532R)基因后经测序鉴定,结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够保持良好的遗传稳定性。利用蔗糖梯度超速离心法纯化rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)病毒,分别进行western blot检测。结果显示,EBOV GP和GP(I532R)蛋白均能够正确表达;将rLa、rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)分别感染BHK-21细胞后,利用激光共聚焦试验分析EBOV GP(I532R)的表达和定位,结果显示GP(I532R)能够表达且位于BHK-21细胞的细胞膜上;对纯化病毒利用免疫电镜观察病毒颗粒,结果可见rLa-EBOVGP(I532R)与亲本病毒rLa结构特征相似,且GP(I532R)蛋白能够嵌合在重组病毒粒子表面;生长动力学试验结果表明,rLa-EBOVGP(I532R)与亲本株rLa在鸡胚中的生长特性基本一致,且能够稳定增殖;分别将重组病毒rLa-EBOVGP和rLa-EBOVGP(I532R)经肌肉注射和滴鼻两种途径免疫小鼠,经稀释血清固定病毒的方法分别检测各组小鼠针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。结果显示rLa-EBOVGP(I532R)能够诱导小鼠产生较高的针对NDV和EBOV GP蛋白的中和抗体。以上结果表明rLa-EBOVGP(I532R)具有作为防控EBOV感染的储备性候选疫苗株的潜力。本研究为进一步研究GP(I532R)的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 扎伊尔型埃博拉病毒 囊膜蛋白突变 重组新城疫病毒
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HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建
6
作者 张东威 金宁一 +6 位作者 王宏伟 张应玖 王莉馨 罗坤 李萍 于洪臣 殷震 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期114-116,共3页
目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基... 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 人I型免疫缺陷病毒 嵌合基因 载体 基因重组 杆状病毒
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禽流感-新城疫重组二联苗分两阶段注射的意义 被引量：3
7
作者 甄润深 关建新 +1 位作者 袁海峰 李玉群 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第3期139-141,共3页
关键词 A型禽流感病毒 二联苗 新城疫 高致病性禽流感病毒 低致病性禽流感病毒 H7亚型 注射 重组
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肉用鸡、鹌鹑禽流感-新城疫重组二联活疫苗免疫试验 被引量：2
8
作者 洪建伟 顾小根 +7 位作者 陈伟杰 陆国林 俞国乔 徐辉 倪柏锋 赵灵燕 曹生福 陈英宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期679-680,682,共3页
关键词 高致病性禽流感 二联活疫苗 新城疫 免疫试验 重组 肉用鸡 鹌鹑 A型流感病毒
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中国预防兽医学报2006年第28卷总目次
9
《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期732-736,共5页
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 法氏囊病病毒 猪瘟病毒石门株 传染性支气管炎病毒 柔嫩艾美耳球虫 艾美尔属 预防兽医学 重组鸡痘病毒 猪附红细胞体 猪血虫体 传染性喉气管炎 新城疫病毒 圆环病毒 蔡雪辉 鸭瘟病毒 鸭疱疹病毒1型 鸭疫里默氏菌 禽流感病毒 流感病毒群 丝状支原体丝状亚种 猪繁殖与呼吸综合征病毒 目次 中华人民共和国
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