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HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
1
作者
何秀霞
于源华
+1 位作者
张春兰
荀恒杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期631-633,共3页
目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将...
目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果：获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论：成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
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关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
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职称材料
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
被引量：
4
2
作者
林彦星
孙彦伟
+3 位作者
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
《动物医学进展》
CSCD
2006年第12期66-70,共5页
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE...
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。
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关键词
猪圆环病毒2型
重组原核表达载体
重组
CAP蛋白
表达
纯化
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职称材料
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
被引量：
2
3
作者
杨宏倩
李博
+1 位作者
蔡宏
朱玉贤
《动物医学进展》
CSCD
2006年第1期54-57,共4页
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切...
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。
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关键词
结核病
Mtb8.4
重组原核表达载体
核酸疫苗
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职称材料
题名
HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
1
作者
何秀霞
于源华
张春兰
荀恒杰
机构
长春理工大学生命科学技术学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期631-633,共3页
基金
吉林省教育厅基金资助项目(20050402-5)
文摘
目的：构建一个能够表达出乙/戊型肝炎二价抗原的重组原核表达载体,并在E.coliBL21（DE3）中表达。方法：采用PCR方法扩增出HBV的S基因和HEV的ORF2编码区的羧基末端中的414-606aa的基因片段,将两片段连接后克隆入T载体,得到融合基因,将融合基因克隆入含有Ω增强子的pTΩ-TE高效的原核表达载体中,构建重组质粒pTΩ-T7SE。将pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）,经IPTG诱导后用Western blot鉴定融合蛋白。结果：获得全长为1284bp的融合的HBV/HEV的基因片段。已构建的重组质粒pTΩ-T7SE转化E.coliBL21（DE3）后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量（Mr）约为50000重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于胞质中,表达量约占全菌蛋白的30.52%。Western blot结果表明在Mr为50000处可见特异性着色带。结论：成功构建了原核表达载体pTΩ-T7SE,并表达出目的蛋白,为研制预防乙型和戊型肝炎双价疫苗提供了实验技术基础。
关键词
HBV
HEV
重组原核表达载体
二价疫苗
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
被引量：
4
2
作者
林彦星
孙彦伟
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
机构
华南农业大学兽医学院
广东省动物防疫监督总所
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第12期66-70,共5页
文摘
对重组原核表达载体pET-ORF2的表达条件进行优化,结果表明,最佳IPTG诱导浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时间为5h。在最佳诱导条件下获得猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的基础上,利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,再分别用SDS-PAGE电泳和Westernblotting对纯化产物的纯化效果及特异性进行检测,结果显示表达产物纯化良好,并能被PCV-2阳性血清识别,具有良好的抗原性。
关键词
猪圆环病毒2型
重组原核表达载体
重组
CAP蛋白
表达
纯化
Keywords
PCV-2
recombinant prokaryot ic expression vector
recombinant Cap
expression
purification
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
被引量：
2
3
作者
杨宏倩
李博
蔡宏
朱玉贤
机构
北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
2006年第1期54-57,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2001AA213141)
文摘
低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。
关键词
结核病
Mtb8.4
重组原核表达载体
核酸疫苗
Keywords
tuberculosis
Mtb8.4 recombinant prokaryotic expression vectors
DNA vaccine
分类号
S852.618 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HBV/HEV融合二价抗原原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
何秀霞
于源华
张春兰
荀恒杰
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪圆环病毒2型ORF2截短基因的原核表达与纯化
林彦星
孙彦伟
刘镇明
徐铮
鲁俊鹏
龚善中
《动物医学进展》
CSCD
2006
4
在线阅读
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职称材料
3
结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达
杨宏倩
李博
蔡宏
朱玉贤
《动物医学进展》
CSCD
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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