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抗NI-35重组单链抗体表达载体的构建与融合表达
1
作者 孙涛 王勇 +2 位作者 王运杰 吴安华 公茂青 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期398-400,425,共4页
目的 :重新设计并人工合成抗NI 35重组单链抗体 (anti NI 35 scFv)的cDNA克隆 ,构建其表达载体 ,在原核系统中实现初步表达。方法 :根据抗NI 35抗体的轻链重链序列 ,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段 ,经退火、复性连接成目的... 目的 :重新设计并人工合成抗NI 35重组单链抗体 (anti NI 35 scFv)的cDNA克隆 ,构建其表达载体 ,在原核系统中实现初步表达。方法 :根据抗NI 35抗体的轻链重链序列 ,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段 ,经退火、复性连接成目的片段后 ,克隆到克隆载体 pUC 18中 ,经全自动序列分析仪测序证实 ,再亚克隆至表达载体 pET 2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1,诱导表达。 结果 :合成的基因序列与设计的仅差一个碱基 ,目的基因连接方向及阅读框架正确 ;SDS PAGE检测显示 ,表达出相对分子量 31kDa的融合蛋白 ,并得到了良好的生物活性。结论 :抗NI 35重组单链抗体基因表达载体的构建和表达 。 展开更多
关键词 抗NI-35重组单链抗体 基因合成 表达
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IN-1重组单链抗体表达载体的构建与融合表达
2
作者 郑伟 王勇 +1 位作者 吴安华 王运杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期329-331,共3页
目的 :设计并人工合成IN 1重组单链抗体 (recombinantIN 1single chainantibody)的cDNA克隆 ,构建其表达载体 ,在原核系统中实现初步表达。方法 :根据 genebank中发表的IN 1抗体的轻链重链序列 ,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片... 目的 :设计并人工合成IN 1重组单链抗体 (recombinantIN 1single chainantibody)的cDNA克隆 ,构建其表达载体 ,在原核系统中实现初步表达。方法 :根据 genebank中发表的IN 1抗体的轻链重链序列 ,重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段 ,该基因双链分 35个小片段合成 ,经退火、复性连接成目的片段后 ,克隆到克隆载体 pUC 18中 ,经全自动序列分析仪测序证实后 ,再亚克隆至表达载体pET 2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1,诱导表达。结果 :测序结果合成的基因序列与设计的仅差一个碱基 ;SDS PAGE检测显示 ,表达出相对分子量 31kd的融合蛋白。结论 :IN 1重组单链抗体基因表达载体的构建和表达 ,为深入研究其生物活性奠定了基础。 展开更多
关键词 IN-1重组单链抗体 原核表达 融合蛋白
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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库 被引量：2
3
作者 柴蔚然 杨涛 +1 位作者 胡晓年 牛勃 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期155-158,共4页
目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L in... 目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 单链抗体 噬菌体展示技术 重组人TNF-α单链抗体库
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抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定
4
作者 邓龙 王弘 +2 位作者 周思 冼燕萍 郭新东 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期178-182,共5页
为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及... 为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(sc Fv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达。以p CANTAB5E-sc Fv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到sc Fv基因,再与载体p LIP6/GN连接,转化大肠杆菌BL21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序。重组菌经0.6μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定。采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性。结果表明重组质粒p LIP6/GN-sc Fv含有插入片段,sc Fv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/m L。这说明成功构建了重组质粒p LIP6/GN-sc Fv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 克百威 重组单链抗体 可溶性表达
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