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表达GFP的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌体内感染抗原呈递细胞的动态变化 被引量：1
1
作者 王芳 焦新安 +4 位作者 顾健 马莉 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期425-427,共3页
目的 :阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞 (APC)的动态变化规律。方法 :用一定剂量的表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0(pYAGFP)口服接种BALB/c小鼠。 3d后 ,取腹腔巨噬细胞培养 2 4h ,用荧... 目的 :阐明重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内早期感染抗原呈递细胞 (APC)的动态变化规律。方法 :用一定剂量的表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌X4 5 5 0(pYAGFP)口服接种BALB/c小鼠。 3d后 ,取腹腔巨噬细胞培养 2 4h ,用荧光显微镜观察。另以该细菌静脉注射小鼠 ,于感染后 3、6和 12h,制备脾脏、肝脏低浮密度细胞。用流式细胞术检测巨噬细胞和树突状细胞的感染率。结果 :巨噬细胞感染X4 5 5 0 (pYAGFP)的百分率 ,腹腔中约为 5 0 % ,肝脏和脾脏中约为 2 0 %～ 4 0 %。树突状细胞感染X4 5 5 0 (pYAGFP)的百分率 ,脾脏中约为 4 %～ 10 % ,肝脏中约为 10 %～ 2 0 %。巨噬细胞的吞噬能力明显高于树突状细胞。结论 :感染早期 ,重组减毒鼠伤寒沙门氏菌在体内已被APC所摄取 ,为诱导有效的免疫应答提供了先决条件。 展开更多
关键词 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 绿色荧光蛋白 抗原呈递细胞 动态变化
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表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 被引量：9
2
作者 王芳 焦新安 +2 位作者 刘文博 张如宽 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期119-122,共4页
应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。在体外稳定试验中 ,重组菌经LB固体及液体培养基连续传 15代后 ,单个菌落和菌液均呈绿色 ;在体内稳定试验中 ,经ICR小鼠连续传代 10次 ,从肝脏、脾脏中分离的细... 应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。在体外稳定试验中 ,重组菌经LB固体及液体培养基连续传 15代后 ,单个菌落和菌液均呈绿色 ;在体内稳定试验中 ,经ICR小鼠连续传代 10次 ,从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色 ,证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。SDS_PAGE结果显示 ,鼠伤寒沙门氏菌表达的GFP分子量约为 2 7kD ,这与预计的分子量大小一致。用免疫剂量的重组细菌接种BALB/C小鼠后 ,观察 1个月未见有异常现象 ,同时剖检后也未见脏器有眼观病变。表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌的构建为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗的研制提供一个优良模型 ,为研究沙门氏菌疫苗和沙门氏菌疾病的致病机理提供了一个有力的工具 。 展开更多
关键词 基因表达 基因重组 基因构建 基因鉴定 绿色荧光蛋白 减毒鼠伤寒沙门氏菌
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表达幽门螺杆菌hpaA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建和鉴定 被引量：6
3
作者 朱森林 陈旻湖 +2 位作者 廖文俊 陈洁 胡品津 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期148-151,共4页
目的 :构建表达幽门螺杆菌 (H pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌。方法 :用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PC... 目的 :构建表达幽门螺杆菌 (H pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌。方法 :用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A ,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL32 6 1,提取重组疫苗菌质粒 ,PCR和酶切鉴定 ,筛选阳性克隆。用SDS PAGE电泳和Westernblot进行HpaA表达和鉴定。结果 :经PCR和酶切证实 ,构建了含hpaA的重组原核表达质粒pTrc99A hpaA ,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌。HpaA能在疫苗菌中以二聚体形式表达 ,HpaA量约占全菌体蛋白量的 17% ,Westernblot证实其有免疫原性。结论 :构建了表达H pylorihpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌 ,为探索制备H 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 HPAA基因 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗 重组
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携带TIP30与人IFN-γ基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及抗腺样囊性癌的初步研究 被引量：7
4
作者 江中明 赵平 +2 位作者 高军 湛先保 吕春堂 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第1期42-45,共4页
目的:构建含有TIP30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的减毒伤寒沙门氏菌,观察以减毒伤寒沙门氏菌为载体的,联合TIP30与IFN-γ的基因治疗对腺样囊性癌的疗效。方法:PCR扩增TIP30和人IFN-γ基因,分别插入真核表达载体pCI—neo,构建成重组... 目的:构建含有TIP30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的减毒伤寒沙门氏菌,观察以减毒伤寒沙门氏菌为载体的,联合TIP30与IFN-γ的基因治疗对腺样囊性癌的疗效。方法:PCR扩增TIP30和人IFN-γ基因,分别插入真核表达载体pCI—neo,构建成重组表达质粒pCI-TIP30、pCI-IFN和TIP30、IFN-γ基因共表达质粒pCI-TIP30/IFN。分别将重组表达质粒转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,体外感染小鼠巨噬细胞株,用免疫印迹和ELISA对表达产物进行鉴定,将重组菌口服给腺样囊性癌荷瘤裸鼠,观察其疗效。结果:免疫印迹试验表明质粒pCI-TIP30和pCI-TIP30/IFN转化菌感染的小鼠巨噬细胞能表达TIP30蛋白,ELISA检测则显示pCI-IFN和pCI-TIP30/IFN转化菌感染的小鼠巨噬细胞能分泌性表达人IFN-γ,减毒沙门氏菌本身和3种表达质粒转化的重组沙门氏菌对腺样囊性癌均有治疗作用,且TIP30与IFN-γ具有明显的协同作用。结论:成功构建了分别携有真核表达质粒pCI-TIP30、pCI—IFN、pCI-TIP30/IFN的减毒鼠伤寒沙门氏菌,对腺样囊性癌荷瘤裸鼠有显著的治疗作用。 展开更多
关键词 TIP30 干扰素-Γ 减毒伤寒沙门氏菌 基因治疗
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细菌重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗研究进展 被引量：6
5
作者 李文桂 陈雅棠 《动物医学进展》 CSCD 2004年第2期49-53,共5页
鼠伤寒沙门氏菌 ( St)是一种肠道致病菌 ,通过基因突变可构建许多鼠伤寒沙门氏菌减毒株 ,例如 :X40 72、X42 17、X45 5 0、X4989、X4990、 X40 64、 SL 3 2 61、 GID10 1、 GID10 5、GID10 6和 BRD5 0 9等 ,它们均是两个或多个基因的精... 鼠伤寒沙门氏菌 ( St)是一种肠道致病菌 ,通过基因突变可构建许多鼠伤寒沙门氏菌减毒株 ,例如 :X40 72、X42 17、X45 5 0、X4989、X4990、 X40 64、 SL 3 2 61、 GID10 1、 GID10 5、GID10 6和 BRD5 0 9等 ,它们均是两个或多个基因的精确突变 ,其基因型和表型均很稳定 ,可用作构建细菌性疫苗的表达载体。国内外学者相继研制了肺炎链球菌、结核杆菌、百日咳杆菌、产单核细胞李斯特菌、鼠疫耶尔森菌、土拉弗郎西斯菌、铜绿假单胞菌、淋病奈瑟菌、牛布氏杆菌、破伤风梭菌、炭疽芽孢杆菌、沙眼衣原体和猪肺炎支原体等细菌的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗。文章着重讨论了这些疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展 。 展开更多
关键词 细菌重组减毒疫苗 鼠伤寒沙门氏菌 肠道致病菌 免疫机制 细菌性疾病
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食源和人源鼠伤寒沙门氏菌单相变种的基因组特征和毒力因子对比分析 被引量：1
6
作者 干鸿翔 许安宁 +7 位作者 周璐 罗芳芳 冯仲阳 高彬茹 李卓思 王翔 董庆利 秦晓杰 《食品科学》 北大核心 2025年第6期116-123,共8页
基于前期获得的32株食源和人源鼠伤寒沙门氏菌单相变种,通过全基因组测序比较分析菌株的毒力因子和可移动遗传元件,并构建系统进化树,进一步分析菌株的酸抗性、生物被膜及细胞黏附与侵袭能力,明确不同来源鼠伤寒沙门氏菌单相变种的毒力... 基于前期获得的32株食源和人源鼠伤寒沙门氏菌单相变种,通过全基因组测序比较分析菌株的毒力因子和可移动遗传元件,并构建系统进化树,进一步分析菌株的酸抗性、生物被膜及细胞黏附与侵袭能力,明确不同来源鼠伤寒沙门氏菌单相变种的毒力特征。结果显示,食源和人源鼠伤寒沙门氏菌单相变种均携带大量毒力因子和基因组岛、转座子等可移动遗传元件。进化关系分析显示,32株菌与数据库中参考的鼠伤寒沙门氏菌单相变种处于同一分支,表明具有较近的亲缘关系。另外,所有菌株在pH 3处理1 h后均能存活,25%的菌株生物被膜形成能力强,但人源和食源菌株的生物被膜形成和细胞黏附与侵袭能力无显著差异。总之,不同来源鼠伤寒沙门氏菌单相变种均携带大量毒力因子和可移动遗传元件,且菌株的毒力相关表型具有异质性,结果可为该菌的风险评估提供重要数据支撑。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌单相变种 毒力因子 酸抗性 生物被膜 细胞黏附与侵袭
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重组减毒沙门氏菌疫苗减毒策略及应用研究进展
7
作者 沙宇轩 孙明军 +11 位作者 焉鑫 张培培 亓菲 张研博 孙世雄 南文龙 张皓博 孙翔翔 刘蒙达 樊晓旭 邵卫星 格日勒图 《中国动物检疫》 2025年第10期70-77,共8页
沙门氏菌作为一种典型的胞内寄生菌,能激发强大的免疫反应,其中减毒沙门氏菌疫苗是当前疫苗研究的热点之一。为了解重组减毒沙门氏菌疫苗(reco mbinant attenuated Salmonella vaccines,RASV)的减毒策略和应用,综述了RASV的3种减毒策略... 沙门氏菌作为一种典型的胞内寄生菌,能激发强大的免疫反应,其中减毒沙门氏菌疫苗是当前疫苗研究的热点之一。为了解重组减毒沙门氏菌疫苗(reco mbinant attenuated Salmonella vaccines,RASV)的减毒策略和应用,综述了RASV的3种减毒策略——通过调控脂多糖合成以减弱毒力、通过L-阿拉伯糖调节毒力基因以延迟表达、通过L-阿拉伯糖调节存活关键基因合成以延迟细菌裂解,以及近年来利用这3种策略构建的表达异源抗原的RASV在递送细菌、病毒、寄生虫、肿瘤等相关抗原方面的应用。随着分子生物技术的进步及对沙门氏菌基因组的研究,未来可利用减毒沙门氏菌为载体构建多个表达异源抗原的递送平台,可进一步增强异源抗原诱导的免疫反应,并提高疫苗的安全性和免疫性,为进一步研究和应用RASV提供参考和借鉴。 展开更多
关键词 重组减毒沙门氏菌疫苗 疫苗载体 免疫原性 延迟表达
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以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定 被引量：2
8
作者 方希修 乐国伟 +2 位作者 王冬梅 刘建文 施用辉 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期98-102,共5页
采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的... 采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的稳定性,该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代。试验结果表明,携带HBsAg的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X8786/pcDNA3s已成功构建,为研究和应用人和动物治疗用乙型肝炎病毒口服基因工程活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 电转化 乙肝表面抗原 SDS—PAPG 基因序列分析
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以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组NDV-HN口服疫苗的构建与鉴定 被引量：5
9
作者 田芳华 程相朝 +3 位作者 张春杰 李银聚 李静 刘一尘 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期59-63,共5页
试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒... 试验旨在构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)。以pMD18-T-HN为模板,通过PCR扩增出NDV HN基因片段,定向插入原核表达载体pYA3493中,将重组表达质粒pYA3493-HN转入χ6097,再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd,通过双酶切和PCR对质粒进行鉴定。结果表明,携带NDV HN基因片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL1344ΔcrpΔasd(pYA3493-HN)构建成功。本研究结果为开发鸡新城疫的口服基因工程活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫 HN基因 原核表达载体pYA3493 减毒鼠伤寒沙门氏菌
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携带pEGFPC3的减毒鼠伤寒沙门氏菌在雏鸡体内的表达
10
作者 方希修 王冬梅 +3 位作者 杨晓志 管军军 孙进 乐国伟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期403-407,共5页
构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液... 构建了重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/pEGFP-C3,检测了PEGFP-C3在雏鸡体内荧光表达。将重组减毒鼠伤寒沙门菌SL8786/pEGFP-C3分别灌胃饲服3日龄雏鸡,结果表明,在体外稳定试验中,重组菌经LB固体及液体培养基连续传20代后,单个菌落和菌液均呈淡绿色。流式细胞仪结果证实,减毒鼠伤寒沙门菌可以将pEGFP-C3转入脾脏细胞,并在其中表达。在体内稳定试验中,经雏鸡连续传代12次,从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色,证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。用免疫剂量的重组细菌接种雏鸡后,观察1个月未见有异常现象,同时剖检后也未见脏器有眼观病变。免疫一定时间后,在雏鸡肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠、肌肉等组织有荧光表达。表达PEGFP-C3的重组鼠伤寒沙门氏菌在鸡体产生荧光表达,为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗研制提供一个优良模型。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白C3(EGFP—C3) 重组减毒鼠伤寒沙门氏菌 荧光表达
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鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及耐药与毒力基因检测 被引量：8
11
作者 陆凡 王鹏 +6 位作者 刘林敏 黄振兴 张明霞 杜文珍 吴颖臻 韦平 韦天超 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期36-43,共8页
旨在鉴定广西某鸽场分两批送检的疑似鸽副伤寒病例的病原并对病原菌的耐药性和毒力基因进行检测分析;对从病鸽肝脏组织分离的病原菌进行培养特性观察、生化鉴定、血清型鉴定及16S rRNA测序分析,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测... 旨在鉴定广西某鸽场分两批送检的疑似鸽副伤寒病例的病原并对病原菌的耐药性和毒力基因进行检测分析;对从病鸽肝脏组织分离的病原菌进行培养特性观察、生化鉴定、血清型鉴定及16S rRNA测序分析,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测对分离菌株进行耐药性和毒力分析。分离到2株革兰氏阴性短杆菌,结合生化鉴定、血清型鉴定和16S rRNA分析结果,表明2株分离菌株均为鼠伤寒沙门氏菌。药敏试验结果表明,2株鼠伤寒沙门氏菌均对萘啶酸、链霉素和四环素耐药,并呈现多重耐药表型,耐药基因检测结果与耐药表型相符。2株鼠伤寒沙门氏菌中invA等12种毒力基因检测呈阳性。结果表明,成功分离鉴定2株具有多重耐药性并携带大量毒力基因的鸽源鼠伤寒沙门氏菌,可为鸽源鼠伤寒沙门氏菌的防治和研究提供参考。 展开更多
关键词 鸽 鼠伤寒沙门氏菌 分离鉴定 多重耐药性 毒力基因
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鸡体内减毒鼠伤寒沙门氏菌的繁殖和免疫反应 被引量：8
12
作者 覃宗华 艾哈迈德 +4 位作者 谢明权 蔡建平 吴惠贤 彭新宇 魏文康 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期378-383,共6页
初步研究了cya和crp双基因突变减毒鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium )在鸡体内的繁殖和免疫反应。 1、4或 7日龄肉鸡分别经口感染 10 8或 10 9CFU减毒S .typhimuriumX4 5 5 0 ,接种后 3～ 4周鸡体内特异性细胞和体液免疫达到最... 初步研究了cya和crp双基因突变减毒鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium )在鸡体内的繁殖和免疫反应。 1、4或 7日龄肉鸡分别经口感染 10 8或 10 9CFU减毒S .typhimuriumX4 5 5 0 ,接种后 3～ 4周鸡体内特异性细胞和体液免疫达到最高峰。 4日龄口服 10 9CFU组免疫效果最佳 ,但 1日龄高剂量组表现增重降低及免疫抑制。 2 8日龄每鸡口服攻击 10 10 CFU强毒S .typhimurium 5 0 333,各免疫组保护率为 10 0 %。同时免疫鸡还能全部或部分阻止沙门氏菌在肝脏和脾脏的繁殖。接种后减毒S .typhimurium在泄殖腔的检出时间为 4周左右。 展开更多
关键词 减毒 鼠伤寒沙门氏菌 鸡 免疫 繁殖
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表达PRRSV GP3蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建 被引量：8
13
作者 赵红妮 许信刚 +1 位作者 童德文 罗小毛 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期6-11,共6页
构建表达猪PRRSV GP3蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。将去信号肽序列的PRRSV ORF3基因插入到表达载体pYA3341(Asd+)中,构建重组质粒pYA3341-ORF3。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(Asd-、Cya-、Crp-),获得... 构建表达猪PRRSV GP3蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。将去信号肽序列的PRRSV ORF3基因插入到表达载体pYA3341(Asd+)中,构建重组质粒pYA3341-ORF3。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(Asd-、Cya-、Crp-),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF3)。体外鉴定重组菌表达的GP3蛋白、重组菌特性并进行小鼠免疫试验。酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,SDS-PAGE电泳及Western blot检测有GP3特异性蛋白条带,小鼠免疫后可检测到GP3蛋白抗体。成功构建能稳定表达PRRSV GP3蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株。 展开更多
关键词 PRRSV GP3 减毒鼠伤寒沙门氏菌 活疫苗
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建及动物免疫试验 被引量：7
14
作者 许信刚 赵红妮 童德文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期955-962,共8页
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏... 本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-ORF5)。鉴定重组菌GP5蛋白的表达;测定重组菌定居特性及安全性;检测免疫小鼠血清抗体;流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群的影响;最后进行免疫猪血清抗体检测。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合;重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中,并在其中表达出GP5蛋白;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性;重组菌株能不同程度地使CD4+、CD4+/CD8+升高,而使CD8+下降,表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用;淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答;重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体。本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 PRRSV GP5蛋白 活载体疫苗
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1株asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌作为核酸疫苗载体的构建与鉴定(英文) 被引量：2
15
作者 于斌 罗语思 +4 位作者 彭晓 袁硕峰 牛憨笨 屈军乐 张科 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期663-668,共6页
目的利用载体-宿主平衡致死系统,将1株香港分离的野生型沙门氏菌(S129)构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌;以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的asdA基因,并以卡那霉素抗性基因代替;通... 目的利用载体-宿主平衡致死系统,将1株香港分离的野生型沙门氏菌(S129)构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌;以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的asdA基因,并以卡那霉素抗性基因代替;通过菌落PCR鉴定后挑取阳性克隆asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌(asdAΔS129),在含2,6-二氨基庚二酸(2,6-diaminopimelic acid,DAP)或无DAP的LB培养基中培养,与野生株S129对比生长曲线以验证asdAΔS129构建的成功;以S129和asdAΔS129攻击BALB/c小鼠验证asdAΔS129减毒情况;结果菌落PCR鉴定得到阳性克隆,asdAΔS129必需外源性添加DAP方能生长;asdAΔS129不能致死BALB/c小鼠,得到成功的减毒;结论成功将1株野生型沙门氏菌构建成asdA缺陷型减毒核酸疫苗载体,并在体外和体内实验中验证,为下一步的疫苗呈递和肿瘤治疗实验提供了合适的载体。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 核酸疫苗载体 λ-RED同源重组
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减毒鼠伤寒沙门氏菌载体在兽用疫苗中的运用 被引量：3
16
作者 訾占超 石佩 +2 位作者 陈瑞 熊惠军 宋立 《中国兽药杂志》 2009年第5期33-39,共7页
减毒鼠伤寒沙门氏菌可以作为重组疫苗研究中真核表达载体。其原理是将免疫原基因片段连接到某种真核质粒中,然后将质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌,构建针对该特异病原的重组活疫苗。本文介绍了减毒鼠伤寒沙门氏菌作为DNA载体,在动物细菌、... 减毒鼠伤寒沙门氏菌可以作为重组疫苗研究中真核表达载体。其原理是将免疫原基因片段连接到某种真核质粒中,然后将质粒导入减毒鼠伤寒沙门氏菌,构建针对该特异病原的重组活疫苗。本文介绍了减毒鼠伤寒沙门氏菌作为DNA载体,在动物细菌、病毒和支原体重组活疫苗中的最新运用成果,为兽用的重组DNA疫苗的研究提供参考。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 载体 重组疫苗
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融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 被引量：4
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作者 王芳 焦新安 +5 位作者 潘志明 张晓明 黄金林 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-17,共4页
依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经... 依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 卵清白蛋白 T细胞表位 减毒鼠伤寒沙门氏菌
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减毒鼠伤寒沙门氏菌对鸡的致病力及免疫保护效果研究 被引量：2
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作者 覃宗华 蔡建平 +4 位作者 谢明权 艾哈迈德 吴惠贤 彭新宇 魏文康 《广东畜牧兽医科技》 2003年第3期37-39,共3页
初步研究了cya/crp双基因突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium X4550)对鸡的致病力及免疫保护效果。给1日龄岭南黄肉鸡口服感染不同剂量(10~7、10~8、10~9、10^(10)、10^(11)CFU/只)的S.typhimuriumX4550,所有试验鸡均未... 初步研究了cya/crp双基因突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium X4550)对鸡的致病力及免疫保护效果。给1日龄岭南黄肉鸡口服感染不同剂量(10~7、10~8、10~9、10^(10)、10^(11)CFU/只)的S.typhimuriumX4550,所有试验鸡均未出现死亡,仅在最高剂量(10^(11)CFU/只)组试验鸡出现食欲减退和轻微下痢等症状。1、4或7日龄岭南黄肉鸡分别经口免疫接种10~8或10~9CFU减毒S.typhimurium X4550,28日龄每只鸡口服攻击10^(10)CFU强毒S.typhimurium 50333,结果不免疫对照组死亡率55％(11/20),免疫组保护率为100％(20/20),但1日龄高剂量免疫导致试验鸡的生长抑制。同时,免疫鸡还能全部或部分阻止沙门氏菌在肝脏和脾脏的繁殖。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 鸡 致病力 免疫保护效果 弱毒苗 疫苗 免疫接种
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靶向抗原递呈细胞激活Flk1重组减毒鼠伤寒沙门菌的构建及其抑制树突状细胞凋亡的初步研究
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作者 冯珂珂 戴科芳 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2009年第6期557-561,共5页
目的观察靶向抗原递呈细胞激活血管内皮生长因子受体-2(Flk1)的重组减毒鼠伤寒沙门菌对树突状细胞凋亡的抑制作用。方法构建含Flk1与靶向抗凋亡基因BAK siRNA的重组质粒载体pFlk1-U6BAK,将其转化至减毒鼠伤寒沙门菌株中,携带pFlk1-U6BAK... 目的观察靶向抗原递呈细胞激活血管内皮生长因子受体-2(Flk1)的重组减毒鼠伤寒沙门菌对树突状细胞凋亡的抑制作用。方法构建含Flk1与靶向抗凋亡基因BAK siRNA的重组质粒载体pFlk1-U6BAK,将其转化至减毒鼠伤寒沙门菌株中,携带pFlk1-U6BAK和pFlk1的重组减毒鼠伤寒沙门菌分别感染经体外培养的小鼠树突状细胞;Western blotting法检测树突状细胞Flk和BAK表达水平,MTT法检测树突状细胞增殖活性。结果成功构建了含Flk1和靶向抗凋亡基因BAK siRNA的重组质粒载体pFlk1-U6BAK。经携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌感染后,树突状细胞在稳定表达Flk的同时,BAK表达水平显著降低;而经携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌感染后,树突状细胞增殖活性明显升高。结论携带pFlk1-U6BAK的重组减毒鼠伤寒沙门菌可以在稳定表达Flk的同时,通过下调凋亡基因BAK表达水平而抑制树突状细胞凋亡,有望成为较为有效的抗肿瘤血管生成疫苗。 展开更多
关键词 受体 血管内皮生长因子 RNA 小分子干扰 沙门菌 鼠伤寒 疫苗 DNA 疫苗 减毒 树突细胞 细胞凋亡
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减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗的研究进展 被引量：3
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作者 张雪彬 丁军涛 《新疆畜牧业》 2016年第8期20-23,共4页
减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗是通过基因工程手段等方法将鼠伤寒沙门氏菌减毒,利用减毒鼠伤寒沙门氏菌将外源蛋白或抗原基因运送到机体免疫细胞内,诱导机体产生特异性免疫应答。近年来,国内外学者已通过多种方法构建了不同疾病的减毒... 减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗是通过基因工程手段等方法将鼠伤寒沙门氏菌减毒,利用减毒鼠伤寒沙门氏菌将外源蛋白或抗原基因运送到机体免疫细胞内,诱导机体产生特异性免疫应答。近年来,国内外学者已通过多种方法构建了不同疾病的减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗,其展示了良好的应用前景。本文主要对鼠伤寒沙门氏菌的生物学特性、减毒途径、应用现状及应用前景进行阐述。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门氏菌 生物学特性 减毒方法 活载体疫苗
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