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9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
被引量：
1
1
作者
何永林
张黎
+3 位作者
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期441-444,共4页
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片...
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。
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关键词
颗粒溶素
真核表达质粒
重组减毒沙门菌
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职称材料
携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究
被引量：
1
2
作者
熊朝丽
张华
+3 位作者
程振涛
周碧君
王开功
文明
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1970-1975,共6页
为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于...
为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7、15、30和45d的山羊消化道特异性SIgA含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P<0.05),45d时到达最高值(18.172±0.122)μg·L-1;(2)在诱导产生特异性P32抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P>0.05);(3)在特异性淋巴细胞转化效率上,免疫15d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫30d后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P>0.05);(4)在诱导产生特异性细胞因子方面,重组细菌组山羊血清IL-2含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清IL-5含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P<0.05),而血清IFN-γ和TNF-α含量与弱毒疫苗组差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,构建的携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。
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关键词
重组减毒沙门菌
免疫应答
山羊
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职称材料
减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展
被引量：
4
3
作者
杨冬梅
王鹏雁
+1 位作者
王远志
陈创夫
《动物医学进展》
CSCD
2007年第4期85-88,共4页
活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以...
活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。
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关键词
鼠伤寒
沙门
菌
活载体疫苗
重组减毒沙门菌
基因
减
毒
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职称材料
题名
9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
被引量：
1
1
作者
何永林
张黎
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
机构
重庆医科大学免疫学与微生物学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期441-444,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30400375)
重庆市自然科学基金项目(CSTC2006BB5273)
文摘
目的构建人9ku颗粒溶素(granulysin)的重组减毒沙门菌,并在真核细胞中表达,为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础。方法以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后,定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,获得重组表达质粒pBudCE4.1-S9K,通过PCR、双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定;采用RT-PCR,免疫细胞化学与Dot-ELISA法检测pBudCE4.1-S9K在RAW264.7细胞的瞬时表达与分泌;重组质粒电转化减毒沙门菌后,将重组菌感染巨噬细胞,以RT-PCR检查颗粒溶素的表达。结果成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段;经酶切,PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒;转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素;重组减毒沙门菌感染细胞后,检测到颗粒溶素的表达。结论成功构建含9ku颗粒溶素活性肽基因的重组减毒沙门菌,该菌能成功递呈携带基因在感染细胞内表达。
关键词
颗粒溶素
真核表达质粒
重组减毒沙门菌
Keywords
granulysin
eukaryotic expression plasmid
recombinant attenuated Salmonella
分类号
R730.59 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究
被引量：
1
2
作者
熊朝丽
张华
程振涛
周碧君
王开功
文明
机构
贵州大学动物疫病研究所
贵州省动物疫病预防控制中心
贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1970-1975,共6页
基金
贵州省优秀科技教育人才省长专项基金项目(黔省专合字[2006]12号)
贵州省重大科技专项计划项目(黔科合重大专项字[2011]6009号)
贵州省重点实验室培育项目(黔科合Z字[2011]4008号)
文摘
为探讨携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答效果,将60只健康黑山羊随机分为3组,即重组细菌组、弱毒疫苗组和空白对照组,重组细菌组灌服重组减毒沙门菌,弱毒疫苗组股内侧皮内注射山羊痘弱毒疫苗,空白对照组不作任何处理;于不同时间段采集山羊血液、呼吸道/消化道分泌液及组织样本进行检测。结果:(1)在免疫后7、15、30和45d的山羊消化道特异性SIgA含量中,重组细菌组明显高于弱毒疫苗组(P<0.05),45d时到达最高值(18.172±0.122)μg·L-1;(2)在诱导产生特异性P32抗体上,重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但差异不明显(P>0.05);(3)在特异性淋巴细胞转化效率上,免疫15d前重组细菌组略低于弱毒疫苗组,但免疫30d后重组细菌组高于弱毒疫苗组,但差异均不显著(P>0.05);(4)在诱导产生特异性细胞因子方面,重组细菌组山羊血清IL-2含量低于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清IL-5含量高于弱毒疫苗组,差异极显著(P<0.01),血清TNF-β高于弱毒疫苗组,差异显著(P<0.05),而血清IFN-γ和TNF-α含量与弱毒疫苗组差异不显著(P>0.05)。上述结果表明,构建的携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌能诱导山羊产生较好的免疫应答反应。
关键词
重组减毒沙门菌
免疫应答
山羊
Keywords
recombinant attenuated Salmonella
immune response
goat
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
S852.654 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展
被引量：
4
3
作者
杨冬梅
王鹏雁
王远志
陈创夫
机构
石河子大学新疆地方与民族高发病实验室
出处
《动物医学进展》
CSCD
2007年第4期85-88,共4页
文摘
活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路。沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体。现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功。文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述。
关键词
鼠伤寒
沙门
菌
活载体疫苗
重组减毒沙门菌
基因
减
毒
Keywords
Salmonella typhimurium live vector vaccine recombinant attenuated Salmonella typhimurium attenuation by mutated gene
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
9ku颗粒溶素活性肽重组减毒沙门菌的构建与表达
何永林
张黎
朱道银
伊正君
杨春
徐蕾
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
携带pVAX1-GPV-P32重组减毒沙门菌诱导山羊免疫应答研究
熊朝丽
张华
程振涛
周碧君
王开功
文明
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展
杨冬梅
王鹏雁
王远志
陈创夫
《动物医学进展》
CSCD
2007
4
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职称材料
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