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重组人骨形态发生蛋白-2用于骨壁缺损拔牙位点保存的效果 被引量:1
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作者 汤正婷 许滢洁 +1 位作者 杨德钊 孟凡文 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期254-258,共5页
目的:评价重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant bone morphogenetic proteinrh-2,rhBMP-2)用于骨壁缺损拔牙位点保存的临床效果。方法:2019年2月~2023年1月将符合条件的142例患者随机分组,A组使用rhBMP-2+胶原蛋白海绵填充拔牙窝,B组使... 目的:评价重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant bone morphogenetic proteinrh-2,rhBMP-2)用于骨壁缺损拔牙位点保存的临床效果。方法:2019年2月~2023年1月将符合条件的142例患者随机分组,A组使用rhBMP-2+胶原蛋白海绵填充拔牙窝,B组使用胶原蛋白海绵,C组不使用移植物。于拔牙后18周、24周开展种植手术,并编为A1、A2;B1、B2;C1、C2组,种植术中发现有牙槽嵴顶骨缺损的病例测量牙槽嵴缺损的最大近远中径(L)、颊舌径(W)及深度(H),计算体积(V)值(V=L×W×H);无牙槽骨顶骨缺损的病例取种植窝骨块进行组织学分析。结果:A1、A2组牙槽嵴顶骨缺损的发生频率分别为:0.32、0.14;B1、B2组分别为:0.75、0.43;C1、C2组分别为:0.72、0.37。A1B1组间、A2B2组间、A1C1组间及A2C2组间V值差异有统计学意义(P<0.05)。A1B1组间及A1C1组间新生骨占比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rhBMP-2用于骨壁缺损的拔牙位点保存可缩短成骨时间(18周),减少不良愈合的发生,为后期种植手术的开展创造更有利的骨条件。 展开更多
关键词 拔牙位点保存 重组人骨形态发生蛋白-2 口腔种植
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负载重组人骨形态发生蛋白2的α型半水硫酸钙/纳米羟基磷灰石复合植骨材料的成骨性能研究 被引量:4
2
作者 罗有福 高金鉴 +4 位作者 高浩然 张恩尉 薛为高 文艳华 钱济先 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期348-353,共6页
目的:评价负载重组人骨形态发生蛋白2(rh BMP-2)的α型半水硫酸钙/纳米羟基磷灰石(α-CSH/n HA)复合植骨材料的成骨性能。方法:制备可注射性α-CSH/n HA/rh BMP-2复合材料,取12只成年绵羊,分别经左侧椎弓根在L1-L6椎体上制作直径... 目的:评价负载重组人骨形态发生蛋白2(rh BMP-2)的α型半水硫酸钙/纳米羟基磷灰石(α-CSH/n HA)复合植骨材料的成骨性能。方法:制备可注射性α-CSH/n HA/rh BMP-2复合材料,取12只成年绵羊,分别经左侧椎弓根在L1-L6椎体上制作直径6mm、深15mm的6个洞形缺损,第一只绵羊的椎体缺损随机分为3组,其余羊的椎体都按此进行分组,即L2、L5为实验组,L1、L4为对照组,L3、L6为空白对照组。实验组植入α-CSH/n HA/rh BMP-2复合材料;对照组植入可注射性磷酸钙骨水泥(CPC);空白对照组不植入任何材料。术后4、8、12周各处死4只动物,取椎体标本分别行X线及micro-CT扫描,观察缺损修复情况;行生物力学检查,测定椎体压缩强度和压缩模量;行组织学观察比较新骨生成率。结果:术后4周时,实验组压缩强度及压缩模量与CPC组的差异无统计学意义(P〉0.05),实验组和对照组均显著性高于空白对照组(P〈0.05);术后8周和12周时实验组和对照组均显著性高于空白对照组(P〈0.05),实验组显著性高于对照组(P〈0.05)。影像学及组织学结果显示,术后4周时,实验组复合材料大部分已降解,密度稍低于正常骨,可见大量纤细短小、尚未塑形的新生骨小梁,边缘有大量成骨细胞环绕;对照组CPC材料呈高密度充满整个缺损,未见明显降解吸收征象,材料与骨的界限明显,缺损边缘有少量幼稚骨小梁形成;空白对照组缺损较大,边缘整齐,几乎看不到有新骨生成。术后8周时,实验组复合材料完全降解,缺损内新生骨小梁数量增多,增粗变长,且开始早期塑形;对照组材料开始部分降解,在边缘和中心降解区可见明显新骨形成,新生骨小梁数量较实验组少;空白对照组缺损修复不明显,边缘只可见少量新生骨小梁。术后12周时,实验组缺损完全被新生骨小梁充满,骨小梁趋于成熟,结构与正常骨小梁相似,密度与正常骨接近,很难与正常部位区分;对照组CPC大量降解,只残留一小团块状和零星的材料,缺损边缘修复明显,新生骨小梁长入残余材料内,将其分割成岛屿状;空白对照组缺损依然较大,呈低密度影清晰可见,新骨生成很少。结论:α-CSH/n HA/rh BMP-2复合材料在绵羊体内具有良好的成骨活性,是较好的微创植骨材料。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2 半水硫酸钙 纳米羟基磷灰石 胸腰椎 微创 绵羊
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明胶海绵复合重组人骨形态发生蛋白-7植入物的体内异位成骨实验 被引量:1
3
作者 王国栋 李萍 +2 位作者 韩金祥 王世立 刘丽娜 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2012年第12期1349-1354,共6页
目的:考察以明胶海绵为载体的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)在小鼠体内异位成骨能力,评价大肠杆菌表达的rhBMP-7生物学活性。方法:昆明种小鼠随机分为两组,将复合rh-BMP-7的明胶海绵植入小鼠肌间隙作为实验组,对照组植入明胶海绵,分... 目的:考察以明胶海绵为载体的重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)在小鼠体内异位成骨能力,评价大肠杆菌表达的rhBMP-7生物学活性。方法:昆明种小鼠随机分为两组,将复合rh-BMP-7的明胶海绵植入小鼠肌间隙作为实验组,对照组植入明胶海绵,分别于术后1、2、3、4周取出埋植材料,HE染色进行组织学观察,测定蛋白含量、钙含量与碱性磷酸酶(ALP)活性。结果:复合rhBMP-7的明胶海绵组在术后2、3、4周有骨细胞类似细胞和钙化灶的形成,术后2、3、4周蛋白含量、ALP活性和钙含量均明显高于明胶海绵对照组。结论:明胶海绵复合rhBMP-7植入小鼠体内有较强的异位成骨能力,是良好的生物载体,可用于rhBMP-7体内活性检测。 展开更多
关键词 明胶海绵 重组人骨形态发生蛋白-7 异位成 小鼠
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神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究 被引量:1
4
作者 夏胜利 戴尅戎 汤亭亭 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期273-277,共5页
目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用。方法ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物。术后第3天开始,连续7d,在实验... 目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用。方法ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物。术后第3天开始,连续7d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS)。术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测。结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则。结论NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用。 展开更多
关键词 神经生长因子 形态发生蛋白 诱导 重组人骨形态发生蛋白-2 诱导成
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重组人骨形态发生蛋白-9对人牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响 被引量:3
5
作者 陆蓓 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2018年第8期857-861,共5页
目的:研究重组人骨形态发生蛋白-9(recombinant human bone morphogenetic protein-9,rhBMP-9)对体外人牙周膜成纤维细胞成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,成骨分化培养基(osteogenic differentiation medium,ODM)... 目的:研究重组人骨形态发生蛋白-9(recombinant human bone morphogenetic protein-9,rhBMP-9)对体外人牙周膜成纤维细胞成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,成骨分化培养基(osteogenic differentiation medium,ODM)诱导成骨分化,加入不同浓度rhBMP-9或p38和胞外信号调节激酶1/2(extracellular signalregulated kinase1/2,ERK1/2)抑制剂SB203580和U0126处理。采用LabAssayTM碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)检测试剂盒检测ALP活性。提取总RNA,实时荧光定量聚合酶链反应(Real time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测RUNT相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、分化抑制因子1(inhibitor of differentiation factor 1,ID1)、骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达情况。结果:rhBMP-9可以显著增加人牙周膜成纤维细胞ALP活性,且呈浓度和时间依赖性。成骨分化相关转录因子RUNX2和ID1以及晚期成骨标志物BSP和OPN的表达在rhBMP-9的刺激下也显著升高。与rhBMP-9单独刺激组比较,加入SB203580和U0126共刺激后可完全抑制rhBMP-9促人牙周膜成纤维细胞成骨分化的作用。结论:rhBMP-9能够显著诱导人牙周膜成纤维细胞向成骨细胞样细胞分化,且其可能机制为调节p38和ERK1/2通路。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-9 成纤维细胞 细胞分化 胞外信号调节激酶1/2
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重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备
6
作者 王婧 张杰 +2 位作者 张颖 马宁宁 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期543-548,共6页
目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP... 目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP-2m经稀释复性,获得具有生物学活性的rhBMP-2m。并以此作为抗原,免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。结果获得还原SDS-PAGE下95%以上纯度的rhBMP-2m。细胞活性结果分析显示,所获得的rhBMP-2m具有较强的生物学活性。免疫小鼠最终获得两株稳定分泌抗rhBMP-2m抗体的杂交瘤细胞株。结论成功制备了具有生物学活性的rhBMP-2m及其单克隆抗体,为rhBMP-2未来的研究和制备奠定良好的基础。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽 蛋白复性 单克隆抗体
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重组人骨形态发生蛋白2复合物对犬胫骨骨折愈合中4种相关细胞因子的作用 被引量:4
7
作者 梁倩 陈智华 +3 位作者 亢心 年聚盆 王雯慧 韩鹏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期56-60,共5页
研究重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、纤维蛋白凝胶(FG)与妥布霉素复合物加速骨折愈合。bFGF与rhBMP-2和妥布霉素以纤维蛋白胶为载体复合,将具有抗生素缓释系统的复合物注入犬胫骨骨折处,并做内固定,于... 研究重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、纤维蛋白凝胶(FG)与妥布霉素复合物加速骨折愈合。bFGF与rhBMP-2和妥布霉素以纤维蛋白胶为载体复合,将具有抗生素缓释系统的复合物注入犬胫骨骨折处,并做内固定,于术后第2周,采集犬胫骨骨折处样品,每隔2周采集1次,共采集4次,将每次采集的样品制成组织切片,采用免疫组织化学的方法检测4种因子,并对组织切片进行分析,用多功能真彩色细胞图象分析管理系统,分析所得数据用SPSS18.0版统计软件进行统计学分析。血管内皮细胞生长因子(VEGF)在试验组第2周表达强阳性,而对照组阳性表达较弱;前4周,试验组血小板源性生长因子(PDGF)阳性率呈上升趋势,强于对照组;前8周,试验组胰岛素样生长因子(IGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性率均高于对照组。说明bFGF与rhBMP-2和妥布霉素以纤维蛋白胶为载体的复合物在骨折愈合具有中促进细胞增殖、黏附、趋化、分化,以及骨折末端血管生长和形成的作用。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白2 碱性成纤维细胞生长因子 血小板衍生生长因子 血管内皮生长因子 折愈合
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重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性 被引量:79
8
作者 赵明 王会信 周廷冲 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第3期319-324,共6页
报告了人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用AflⅡ酶剪除BMP-2cDNA中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的cDNA3′端0.36kb基因片段克隆于大肠杆菌表达载体p... 报告了人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用AflⅡ酶剪除BMP-2cDNA中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的cDNA3′端0.36kb基因片段克隆于大肠杆菌表达载体pMX-1质粒的ATG下游,受控于PLPR启动子。重组子以大肠杆菌DH5α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经42℃6h诱导后,在SDS-PAGE上出现一条新蛋白带,分子量约为12kD,约占菌体总蛋白的20%。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后,可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m)。小鼠肌肉植入试验发现。rhBMP-2m植入后的不同时间,在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成,证明rhBMP-2m具有明显的诱导新骨形成的作用。 展开更多
关键词 形态发生 蛋白 DNA 重组 表达
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重组人骨形态发生蛋白-2诱发黄韧带骨化的实验模型 被引量:10
9
作者 陈雄生 贾连顺 +4 位作者 倪斌 孔庆毅 徐爱民 陈华江 李玉莉 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2002年第1期31-34,共4页
目的 :建立脊柱黄韧带骨化的实验模型。方法 :以中国大白兔为实验对象 ,采用重组人骨形态发生蛋白 2(rhBMP 2 )作为诱导物 ,分别将rhBMP 2 /明胶海绵植入双侧黄韧带腹侧的硬膜外腔 (E1组 ) ,或直接将rhBMP 2注射到双侧的黄韧带内 (E2组... 目的 :建立脊柱黄韧带骨化的实验模型。方法 :以中国大白兔为实验对象 ,采用重组人骨形态发生蛋白 2(rhBMP 2 )作为诱导物 ,分别将rhBMP 2 /明胶海绵植入双侧黄韧带腹侧的硬膜外腔 (E1组 ) ,或直接将rhBMP 2注射到双侧的黄韧带内 (E2组 ) ,每一侧植入物中含rhBMP 2 10 0 μg。设立相应的对照组 (C1组、C2组 )。对手术节段进行X线、CT扫描及病理组织学检查。结果 :脊柱CT扫描发现E1组 4周时手术节段后正中椎板前方出现结节状高密度增高影 ,8周时密度进一步增高。病理组织学检查发现E1组手术节段韧带细胞分化为软骨细胞并发生骨化。E2组仅见黄韧带轻度增生肥厚及少量散在的软骨细胞。C1组和C2组黄韧带组织均未见明显异常改变。结论 :rhBMP 2可诱导脊柱黄韧带骨化 ;明胶海绵可作为BMP诱导成骨的载体。 展开更多
关键词 黄韧带 形态发生蛋白-2 动物模型 病理 X线诊断
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重组人骨形态发生蛋白2诱发黄韧带骨化的病理学研究 被引量:3
10
作者 陈雄生 贾连顺 +3 位作者 倪斌 袁文 陈华江 李玉莉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第7期642-644,F003,共4页
目的 :研究实验性黄韧带骨化的病理演变特点。方法 :将重组人骨形态发生蛋白 2 ( rh BMP-2 )诱发的骨化过程中不同时期的动物黄韧带 ,采用石蜡切片苏木精 -伊红 ( H-E)染色、阿尔辛蓝 ( AB)染色和免疫组化染色 (分别以 S-10 0单抗和胶原... 目的 :研究实验性黄韧带骨化的病理演变特点。方法 :将重组人骨形态发生蛋白 2 ( rh BMP-2 )诱发的骨化过程中不同时期的动物黄韧带 ,采用石蜡切片苏木精 -伊红 ( H-E)染色、阿尔辛蓝 ( AB)染色和免疫组化染色 (分别以 S-10 0单抗和胶原 单抗为第一抗体 ) ,然后光镜观察。 结果 :rh BMP-2植入后 ,成纤维细胞代谢活跃 ,出现软骨化生 ,并逐渐增生活跃 ,基质中 型胶原纤维和硫酸软骨素增多 ,4周时达到高峰 ,此后 ,肥大的软骨细胞开始退变 ,基质钙化逐渐明显 , 型胶原纤维和硫酸软骨素随之减少 ,8周时出现编织骨 ,并可见脊髓神经纤维水肿、断裂、脱髓鞘和神经元细胞变性等改变。结论 :rh BMP-2以软骨内骨化方式诱导黄韧带骨化 ;在软骨细胞增生最为活跃时 ,基质内 型胶原和硫酸软骨素的含量最高 ,并随着骨化的成熟逐渐下降 ; 展开更多
关键词 黄韧带 重组形态发生蛋白2 病理学
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重组人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:6
11
作者 熊绍虎 余 磊 +4 位作者 谭海燕 黄 涛 王朝阳 刘大庸 钟世镇 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期413-416,共4页
目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)。方法hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化 E coli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系。离子交换层析 DEAE和分子筛 S-300... 目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)。方法hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化 E coli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系。离子交换层析 DEAE和分子筛 S-300纯化重组蛋白,自然缓降复性法对其复性。结果SDS-PAGE显示在相对分子质量约为13000时出现明显外源蛋白表达带,而且当工程菌30℃活化至D600约为0.45时,其表达效率较高;在此状态下,温度诱导衣达4h,目的蛋白表达量最高,以后随着时间的延长,表达量稍下降。重组蛋白经纯化后植人小鼠肌肉,组织学观察到肌肉内大量间允质细胞增生以及软骨与骨形成。结论重组hBMP-2具有良好异位成骨活性。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 大肠杆菌 基因工程 蛋白表达 动物实验
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微流芯片表面生物改性用于重组人骨形态发生蛋白-2的检测
12
作者 陈婧 何宏燕 刘昌胜 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期391-399,共9页
为了开发一种快速、特异、精准的基于大肠埃希菌表达系统制备的重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2)质量浓度检测方法,将酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)与... 为了开发一种快速、特异、精准的基于大肠埃希菌表达系统制备的重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2)质量浓度检测方法,将酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)与微流控技术相结合,筛选合适的用于rhBMP-2的特异抗体,并基于调控抗体的特异性方向的策略,采用等离子体-蛋白A方法对高分子微流芯片的检测微流道孔进行修饰,以评价抗体蛋白在微流芯片表面的吸附效率以及最终的检测信号强度。结果表明:用等离子体处理微流道后,蛋白A和筛选的抗体成功包埋到微流芯片的检测孔表面。等离子体处理功率越高,抗体的吸附效果越好;当等离子体功率为100 W、处理时间为30 s时,第1抗体的吸附效果最好。改性后的微流孔可以有效地检测rhBMP-2质量浓度,在0~2 000 pg/mL范围内,rhBMP-2的质量浓度与荧光平均密度呈线性相关,而传统96孔ELISA法的线性区间范围是0~250 pg/mL。与传统ELISA法的试剂用量(600μL/样品)相比,微流芯片-ELISA方法试剂用量减少约97.3%。可见,本文开发的微流芯片表面改性技术具备应用于生物医药、食品安全及环境检测的潜力。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 重组人骨形态发生蛋白-2 微流控检测 表面改性 特异性抗体
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重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定 被引量:6
13
作者 刘礼初 梁国栋 +5 位作者 杜靖远 付士红 陈飞 郑启新 肖宝筠 侯云德 《同济医科大学学报》 CSCD 1999年第4期292-295,共4页
构建重组人骨形态发生蛋白-2/7融合体, 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用DNA 重组技术,将编码人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2) 成熟肽的0.36 kb 基因片段与编码人骨形态发生蛋白-7 (BMP-7) 成... 构建重组人骨形态发生蛋白-2/7融合体, 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用DNA 重组技术,将编码人骨形态发生蛋白-2 (BMP-2) 成熟肽的0.36 kb 基因片段与编码人骨形态发生蛋白-7 (BMP-7) 成熟肽的0.44kb 基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白-2/7 融合基因; 经测序鉴定后,将其克隆到表达载体pBV222中,转化大肠杆菌DH5α, 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌,经42℃诱导4~6 h 后,高效表达重组人骨形态发生蛋白-2/7, 在SDS-PAGE上出现一新的蛋白带, 分子量约29 ku,约占菌体总蛋白的20% ,表达蛋白以包涵体的形式存在,经初步纯化、裂解、复性后的BMP-2/7 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。BMP-2/7 融合基因的构建和表达。 展开更多
关键词 形态发生蛋白 融合基因 构建 表达 大肠杆菌
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阳离子脂质体介导重组人骨形态发生蛋白-2基因转染的兔骨骼肌干细胞体外成骨分化的实验研究 被引量:3
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作者 尚咏 伍骥 +1 位作者 卢世璧 袁玫 《中国康复理论与实践》 CSCD 2005年第1期1-3,共3页
目的初步探讨阳离子脂质体介导的重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )基因对兔骨骼肌干细胞 (SMSCs)体外成骨活性的影响。方法 pEGFP rhBMP 2的扩增、浓度及纯度鉴定。脂质体包裹质粒DNA ,转染SMSCs后测定转染率。检测rhBMP 2、碱性磷酸... 目的初步探讨阳离子脂质体介导的重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )基因对兔骨骼肌干细胞 (SMSCs)体外成骨活性的影响。方法 pEGFP rhBMP 2的扩增、浓度及纯度鉴定。脂质体包裹质粒DNA ,转染SMSCs后测定转染率。检测rhBMP 2、碱性磷酸酶 (ALP)和Ⅰ型胶原的表达。结果脂质体介导 pEGFP rhBMP 2SMSCs转染后最大转染率为 14 18% ,rhBMP 2、ALP和Ⅰ型胶原的表达呈阳性 ,而 pEGFP转染的细胞和未染细胞rhBMP 2、ALP和Ⅰ型胶原的表达弱阳性。 结论SMSCs是一种较理想的骨组织工程种子细胞。脂质体介导质粒rhBMP 2的基因转移安全性好 ,但转染率相对较低。 展开更多
关键词 形态发生蛋白 阳离子脂质体 骼肌干细胞 基因治疗 缺损
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重组人骨形态发生蛋白7基因腺相关病毒载体的构建及其体外生物学活性 被引量:2
15
作者 时志斌 强辉 +2 位作者 樊立宏 王坤正 党晓谦 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期573-577,共5页
目的构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标记并携带人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因的无致病性重组的腺相关病毒(AAV),以其作为基因载体感染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),体外检测病毒生物学活性及功能。方法从含有hBMP-7基因的pBluescript KS-hBMP7... 目的构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标记并携带人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因的无致病性重组的腺相关病毒(AAV),以其作为基因载体感染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),体外检测病毒生物学活性及功能。方法从含有hBMP-7基因的pBluescript KS-hBMP7质粒中扩增出hBMP-7片段,构建重组骨架质粒pAAV-hBMP7-IRES-GFP。将此质粒和AAV包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper共转染AAV-293细胞,通过同源重组产生重组腺相关病毒rAAV-hBMP7-IRES-GFP。感染AAV-HT1080测定病毒滴度,应用该重组病毒感染体外培养的兔BMSCs,荧光细胞计数法检测病毒最佳感染复数,Western blot法检测BMP-7基因的体外表达,成骨诱导实验检测BMP-7的体外生物学活性。结果重组腺相关病毒表达质粒经酶切、测序验证正确。重组腺相关病毒感染滴度约为3.6×1011v.p./mL。重组病毒感染兔BMSCs的最佳感染复数为5×104v.p/细胞。Western blot结果显示重组病毒rAAV-hBMP7-IRES-GFP转染组BMSCs细胞内有BMP表达。成骨诱导实验证实rAAV-hBMP7-IRES-GFP表达的BMP体外具有良好的成骨活性。结论成功制备了rAAV-hBMP7-IRES-GFP病毒,实验获得的病毒载体滴度高、感染性好,可以满足骨组织工程的需要,为进一步体内和体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有利的工具。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白7 腺相关病毒 基因转染
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原核表达重组人骨形态发生蛋白-7对牙槽骨修复再生的实验研究 被引量:2
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作者 卞翠荣 肖水清 汲平 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期323-326,共4页
目的研究原核表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对牙槽骨修复再生的影响。方法采用新西兰白兔建立动物模型,以明胶海绵作为载体,将大肠杆菌原核表达的rhBMP-7与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行干预治疗,术后2、4、8及12周处... 目的研究原核表达重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对牙槽骨修复再生的影响。方法采用新西兰白兔建立动物模型,以明胶海绵作为载体,将大肠杆菌原核表达的rhBMP-7与之复合后植入即刻拔除牙齿的牙槽窝内进行干预治疗,术后2、4、8及12周处死动物,取标本进行大体观察、扫描电镜分析、碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果大体观察结果显示,实验组和对照组牙槽嵴高度的吸收差异有显著性;扫描电镜观测显示,实验组的骨创愈合比对照组大约提前4~6周;ALP活性测定显示实验组均明显高于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论原核表达rhBMP-7具有促进新骨修复再生、防止牙槽骨吸收的作用。 展开更多
关键词 原核表达 形态发生蛋白-7 牙槽嵴
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重组人骨形态发生蛋白9和2体外诱导成骨的活性分析 被引量:1
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作者 甘强 胡侦明 +5 位作者 郝杰 江维 沈皆亮 王大武 钟小明 方剂 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期70-72,共3页
利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4/His Max-BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有100μg/ml博来霉素的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达r... 利用PCR扩增hBMP-9全长序列构建真核表达载体pcDNA4/His Max-BMP-9,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有100μg/ml博来霉素的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-9的表达量。经过细胞分离培养,得到稳定表达rhBMP-9的6株单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-9表达水平,最高可达1.13μg/24h/106cells。收集最高表达蛋白的单克隆株培养基上清,经His标签的蛋白纯化柱纯化,冻干法浓缩得到100μg/ml的rhBMP-9。用浓度100μg/ml的rhBMP-9和rhBMP-2分别刺激培养C3H10,各项成骨指标显示rhBMP-9具有一定的体外诱导成骨能力,但不及rhBMP-2。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白9 真核表达 纯化蛋白 诱导 C3H10
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重组人骨形态发生蛋白-7对NIH3T3细胞生物学行为的影响
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作者 王国栋 吴少云 +2 位作者 韩金祥 张翠 王世立 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1253-1255,共3页
目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对NIH3T3增殖和骨向分化的影响。方法:向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-7,观察NIH3T3增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量的变化。结果:rh-BMP-7在一定浓度范围内可以... 目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)对NIH3T3增殖和骨向分化的影响。方法:向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-7,观察NIH3T3增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量的变化。结果:rh-BMP-7在一定浓度范围内可以明显促进NIH3T3细胞增殖、提高ALP活性与OCN水平。结论:rhBMP-7可以刺激NIH3T3细胞增殖,诱导NIH3T3细胞向成骨细胞表型分化。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-7 NIH3T3细胞 增殖 细胞分化
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重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽在大肠杆菌中融合可溶表达
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作者 林陈水 陈洪 《浙江工业大学学报》 CAS 2013年第4期418-421,共4页
将N-利用基质(NusA)和人骨形态发生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的编码基因进行基因融合,实现了hBMP-2m在大肠杆菌中的融合可溶表达.以大肠杆菌基因组DNA为模板PCR扩增得到NusA基因,通过NdeⅠ和AflⅡ酶切位点将其置换出重组融合表达载体pDsbA-... 将N-利用基质(NusA)和人骨形态发生蛋白-2成熟肽(hBMP-2m)的编码基因进行基因融合,实现了hBMP-2m在大肠杆菌中的融合可溶表达.以大肠杆菌基因组DNA为模板PCR扩增得到NusA基因,通过NdeⅠ和AflⅡ酶切位点将其置换出重组融合表达载体pDsbA-hBMP-2m中的DsbA基因,使hBMP-2m基因重组于NusA基因的下游,重组质粒转化E.coli BL21(DE3),获得工程菌.在30℃条件下,经IPTG诱导表达后,融合蛋白占细胞总蛋白的45%左右,并且主要以可溶形式存在,可溶部分达90%以上.经过简单的Ni 2+柱一步纯化即可得到纯度较高的融合蛋白.通过融合表达的方式表达出可溶性的目的蛋白,有望复性后通过肠激酶酶切得到hBMP-2m单体,进一步二聚体化得到具有生物活性的hBMP-2m. 展开更多
关键词 可溶性表达 形态发生蛋白 融合表达 NUSA
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重组人骨形态发生蛋白2对壳聚糖-明胶多孔复合支架理化性能的影响 被引量:1
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作者 王一腾 白希壮 +2 位作者 朱志勇 白茗 张杭州 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期912-914,932,共4页
目的以组织工程学技术为基础,制备壳聚糖-明胶/骨形态发生蛋白2(BMP-2)多孔复合支架,讨论壳聚糖与明胶的不同配比及向复合材料中加入BMP-2对支架的微观结构和理化性能的影响。方法分别用不同配比的壳聚糖和明胶制备复合支架,并向1组配... 目的以组织工程学技术为基础,制备壳聚糖-明胶/骨形态发生蛋白2(BMP-2)多孔复合支架,讨论壳聚糖与明胶的不同配比及向复合材料中加入BMP-2对支架的微观结构和理化性能的影响。方法分别用不同配比的壳聚糖和明胶制备复合支架,并向1组配比中加入BMP-2。以扫描电镜观察支架的表面特征,测定支架的孔径值、材料的吸水率及表观密度。结果壳聚糖-明胶多孔复合支架比表面积大,内孔结构多形性高、且大量连通;壳聚糖与明胶配比为4︰1时的复合支架孔径最小,孔壁最厚;配比为1︰4时孔径最大,孔壁最薄;壳聚糖与明胶配比为1︰1时吸水率及表观密度达到最大,分别为(318±75)%和(0.085±0.013)g/cm3;向复合支架中加入BMP-2对支架的微观结构、吸水率及表观密度无明显影响。结论应用冷冻干燥法可以成功制备壳聚糖-明胶多孔复合支架,支架的微观结构与理化性能与壳聚糖与明胶的配比密切相关,向支架中加入BMP-2对材料的理化性能无明显影响。 展开更多
关键词 壳聚糖 明胶 理化性能 形态发生蛋白-2 自体软细胞移植
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