重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化 被引量：3

1

作者 邓林 刘孝菊 +5 位作者 龚守良 王会岩 田海山 王晓杰 马吉胜 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期629-633,共5页

目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest2... 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。 展开更多

关键词 高效表达 重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化

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重组人角质细胞生长因子-2对实验秃毛大鼠的毛发再生作用 被引量：9

2

作者 王泽 黄鹏煌 +3 位作者 赵海洋 李海燕 田海山 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1741-1746,共6页

目的建立实验秃毛大鼠模型,研究重组人角质细胞生长因子-2(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)对实验秃毛大鼠的毛发再生作用。方法对大鼠背部以脱毛膏拔毛,随机分为7个组,即正常对照组、5%米诺地尔组、aFGF组、r... 目的建立实验秃毛大鼠模型,研究重组人角质细胞生长因子-2(recombinant human keratinocyte growth factor-2,rhKGF-2)对实验秃毛大鼠的毛发再生作用。方法对大鼠背部以脱毛膏拔毛,随机分为7个组,即正常对照组、5%米诺地尔组、aFGF组、rhKGF2高、中、低剂量组、0.9%生理盐水组。造模次日皮肤涂抹给药,以给药第1、5、9、14天为观察时间点,记录实验大鼠的体重、实验区毛长、实验区毛发生长状况。于第14天处死实验大鼠,取实验区皮肤进行组织病理学检查。结果体重方面:在第1、5、9、14天,与正常对照组相比,各组差异无显著性(P>0.05);毛长方面:与0.9%生理盐水组相比,在第5、9天,rhKGF2高、中剂量组存在显著性差异(P<0.05,P<0.01)。在第14天,高、中、低剂量组差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.05);毛重方面:在第14天,与0.9%生理盐水组相比,各组(正常对照组除外)差异有显著性(P<0.01);病理检查结果显示:rhKGF2具有促进实验秃毛大鼠毛囊新生与成熟的作用。结论 rh-KGF2具有促进实验秃毛大鼠毛发再生的作用。rhKGF2具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 重组人角质细胞生长因子-2 秃毛大鼠 毛发再生作用 毛囊 临床应用

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ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用 被引量：5

3

作者 高丽昌 李婷婷 +4 位作者 李富勇 唐禄 李海燕 王晓杰 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1405-1408,共4页

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western b... 目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。 展开更多

关键词 角质细胞生长因子-2 ERK1/2 PERK1/2 信号通路 角膜基质细胞 细胞增殖

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兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究 被引量：5

4

作者 张传志 周跃 +4 位作者 李长青 周琳 郭国宁 曹国勇 李华壮 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第4期280-283,i0001,共5页

目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10n... 目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。 展开更多

关键词 组织工程 细胞培养 髓核细胞 重组人转化生长因子-β1 兔

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重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性 被引量：2

5

作者 田海山 唐禄 +3 位作者 王晓杰 王艳芳 官丽莉 李校堃 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1150-1156,共7页

从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过I... 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性. 展开更多

关键词 重组角质细胞生长因子-2(rhKGF.2) 高密度培养 柱层析 转受体FGFR2-Ⅲb BaF3细胞株 生物活性

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重组人转化生长因子-β1对大鼠正畸牙移动模型成骨细胞分化及ERK/MAPK信号通路的影响 被引量：5

6

作者 林维龙 吴晓沛 +1 位作者 何薇薇 安峰 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期118-123,共6页

目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、r... 目的:探讨重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对大鼠正畸牙移动模型细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及成骨细胞分化的影响。方法:将SD大鼠随机分为:对照组、模型组、rhTGF-β1低剂量组、rhTGF-β1中剂量组、rhTGF-β1高剂量组。模型组、rhTGF-β1低、中、高剂量组建立大鼠正畸牙移动模型,各组从造模第1天开始给药,rhTGF-β1(低、中、高)剂量组于双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下分别注射1.25、2.5、5 ng/mL的rhTGF-β1溶液0.1 mL,对照组注射0.1 mL生理盐水,每2 d给药1次,持续14 d。游标卡尺测量大鼠上颌第一磨牙移动距离;苏木精-伊红染色观察大鼠牙周及牙槽骨组织病理形态;酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)水平;Western blot检测大鼠牙周及牙槽骨组织成骨相关蛋白[骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)]和ERK/MAPK通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙张力侧牙周组织膜纤维拉伸变长,组织间隙变宽,基质增生,成骨细胞数量大量减少近乎消失,呈现病理损伤,上颌第一磨牙移动距离、血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平明显升高,血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,rhTGF-β1低、中、高剂量组大鼠牙张力侧牙周及牙槽骨组织病理损伤逐步减轻,血清TNF-α、IL-6、RANKL、牙周及牙槽骨组织p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平依次降低,上颌第一磨牙移动距离、血清OPG、牙周及牙槽骨组织OCN、OPN、Runx2蛋白表达水平依次升高(P<0.05),且各组之间呈剂量依赖性。结论:rhTGF-β1可减轻大鼠正畸牙移动模型炎症反应,促使成骨分化,加速正畸牙移动,可能与抑制ERK/MAPK信号通路激活有关。 展开更多

关键词 重组人转化生长因子-β1 大鼠正畸牙移动模型 ERK/MAPK信号通路 成骨细胞分化

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白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响 被引量：1

7

作者 潘燕 戚向敏 尹萌 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期636-639,共4页

目的检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响。方法将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别... 目的检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响。方法将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72 h后各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测每组细胞上清液中KGF蛋白浓度的变化。提取各组细胞RNA,用聚合酶链反应(PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化。结果 ELISA及PCR结果显示:加入IL-1β的正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞培养上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均升高,同时KGF mRNA表达量较对照组有较明显的上升趋势。正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞加DEX的上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均降低,KGF mRNA表达量较对照组则有降低的趋势。结论 IL-1β对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌及表达KGF有促进作用;而DEX对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌和表达KGF有抑制作用。 展开更多

关键词 口腔扁平苔藓 成纤维细胞 角质细胞生长因子 白细胞介素-1Β 地塞米松

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重组人胰岛素样生长因子-1对急性心肌缺血大鼠血管内皮细胞分泌功能的影响

8

作者 郑娟娟 芮家亮 +1 位作者 杨斌 曹蘅 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2007年第9期637-637,共1页

关键词 重组人胰岛素样生长因子-1 血管内皮细胞功能紊乱 心肌缺血大鼠 细胞分泌功能 急性 病理生理表现 动脉粥样硬化 血管活性物质

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人胰岛素样生长因子-1甄核表达质粒的构建及其在成肌细胞中的表达 被引量：4

9

作者 张鹏 陈世益 +1 位作者 陈疾忤 卫宏图 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期9-12,20,共5页

目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核... 目的 :构建人胰岛素样生长因子 - 1(hIGF - 1)真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1并通过转染成肌细胞来验证其生物活性。方法 :应用DNA重组方法将编码hIGF - 1cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(- )中 ,构建pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1真核表达质粒 ;应用阳性脂质体介导的基因转染技术 ,将真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1瞬时转染C2C12成肌细胞中 ;采用RT -PCR及免疫组化染色等方法检测hIGF - 1基因在成肌细胞中的表达情况 ;应用MTT法检测转染后细胞上清液中hIGF - 1的生物活性。结果 :将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1转染成肌细胞后 ,hIGF - 1mRNA及蛋白表达水平明显增高 ;转染后的成肌细胞培养上清液具有促使成纤维细胞增殖的生物活性。结论 :成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(- ) /hIGF - 1,其转染成肌细胞后可获得较高水平hIGF - 1蛋白的表达 ,所表达出hIGF - 1蛋白具有生物学活性。 展开更多

关键词 IGF-1 成肌细胞 真核表达质粒 转染 PCDNA3 人胰岛素样生长因子-1 蛋白 DNA重组 cDNA克隆 IGF—1

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不同物理和化学因素对重组人角质细胞生长因子2稳定性的影响 被引量：2

10

作者 周鑫 王晓杰 +5 位作者 田海山 唐禄 焦悦 朱家楠 王莘 李校堃 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期518-522,共5页

目的:研究重组人角质细胞生长因子2(rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法:rhKGF-2在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH4～9)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬... 目的:研究重组人角质细胞生长因子2(rhKGF-2)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液及反复冻融因素对rhKGF-2稳定性的影响作用。方法:rhKGF-2在不同温度(-20℃、4℃、25℃、40℃)、pH值(pH4～9)、缓冲溶液(柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、吉斐氏缓冲溶液)及反复冻融条件下分别保存,采用RP-HPLC法检测rhKGF-2纯度,同时观察外观性状。结果:-20℃、4℃分别保存时,rhKGF-2的各项性质在观察期内都无明显变化;25℃时,rhKGF-2存放28d纯度较0h(100.00%)下降至(68.20±0.14)%;40℃时,rhKGF-2存放9h纯度较0h(100.00%)下降至(4.80±0.39)%。rhKGF-2(pH6.0)在25℃条件下保存90d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.12)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.05);pH值为4.0、9.0的rhKGF-2液体在25℃条件下分别保存120h纯度较0h(100.00%)下降至(15.60±0.30)%和(67.30±0.10)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2在柠檬酸缓冲液中25℃条件下保存60d纯度较0h(100.00%)下降至(79.20±0.15)%,与对照组(0h)比较差异有显著性(P<0.01)。rhKGF-2原液反复冻融后其纯度变化差异无显著性(P>0.05)。结论:rhKGF-2在低温和pH6.0～7.0中性条件下稳定。高温、偏酸性和偏碱性条件下均不利于rhKGF-2稳定。柠檬酸缓冲液有利于rhKGF-2稳定。反复冻融对rhKGF-2稳定性影响不明显。 展开更多

关键词 重组人角质细胞生长因子-2 纯度 稳定性

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胰岛素样生长因子-1对甲状旁腺激素介导成骨细胞增殖及成骨活性的影响 被引量：7

11

作者 刘冰 卢蕾阳 +1 位作者 高飞 杨静 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1298-1301,共4页

目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶... 目的通过构建乳鼠颅盖骨成骨细胞分离培养与鉴定方法,研究胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)及IGF-1联合重组人甲状旁腺激素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)对成骨细胞增殖及I型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法培养乳鼠成骨细胞,并观察其形态及功能,以原代培养乳鼠成骨细胞为实验模型,分空白组、PTH组、IGF-1组及不同浓度IGF-1作用的PTH介导的成骨细胞组(0、10、50、100 ng/L)。通过不同剂量的胰岛素样生长因子-1(0、10、50、100 ng/L)联合10-9mol/L重组人甲状旁腺素刺激体外培养的成骨细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力,RT-PCR法检测成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达。结果 PTH和IGF-1均可促进成骨细胞增殖;IGF-1联合PTH可以促进成骨细胞增殖,且具有剂量依赖性。PTH联合IGF-1使成骨细胞增殖能力增强、I型胶原蛋白mRNA表达增强。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。IGF-1可以促进成骨细胞I型胶原蛋白mRNA的表达,且具有剂量依赖性。结论 PTH与IGF-1均可刺激成骨细胞增殖和分化,IGF-1可促进PTH对成骨细胞的分化、增殖。两者合用其作用增强,有协同促进作用。 展开更多

关键词 重组人甲状旁腺激素1-34 胰岛素样生长因子-1 成骨细胞 增殖 I型胶原蛋白mRNA

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胰岛素样生长因子1-磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对T细胞与角质形成细胞共培养模型中炎性细胞因子的影响

12

作者 马瑞洁 谭雅芹 周刚 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2019年第4期397-400,共4页

目的:检测在口腔扁平苔藓中异常活化的胰岛素样生长因子1-磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(insulin-like growth factor 1-phosphatidylinositol-3-kinase/the mammalian target of rapamycin,IGF1-PI3K/mTOR)信号通路对T细胞... 目的:检测在口腔扁平苔藓中异常活化的胰岛素样生长因子1-磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(insulin-like growth factor 1-phosphatidylinositol-3-kinase/the mammalian target of rapamycin,IGF1-PI3K/mTOR)信号通路对T细胞与角质形成细胞共培养环境中炎性细胞因子的影响。方法:通过外源性IGF1、LY294002、雷帕霉素评估IGF-PI3K/mTOR信号通路在活化T细胞中的作用,构建T细胞与角质形成细胞共培养模型,运用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)法检测细胞培养上清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌情况。结果:与单独培养的T细胞比较,T细胞与角质形成细胞共培养能促进TNF-α的分泌(P<0.05),而对IL-2的分泌无明显影响;而IGF1-PI3K/mTOR通路可减少共培养环境中IL-2和TNF-α水平(P<0.05)。结论:IGF1-PI3K/mTOR信号通路可调控T细胞与角质形成细胞共培养模型中炎性细胞因子的分泌,可能参与了口腔扁平苔藓免疫炎症的发生发展。 展开更多

关键词 口腔扁平苔藓 T细胞 角质形成细胞 胰岛素样生长因子1-磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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重组碱性成纤维细胞生长因子通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用 被引量：6

13

作者 王英 吴会平 +1 位作者 王冬冬 刘学政 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第10期911-915,共5页

目的探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的保护作用。方法雄性SD大鼠40只,随机分成对照组、糖尿病组、rb... 目的探讨重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant basic fibroblast growth factor,rbFGF)通过Notch1信号通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的保护作用。方法雄性SD大鼠40只,随机分成对照组、糖尿病组、rbFGF组、rbFGF+DAPT组(DAPT为Notch1通路的特异性拮抗剂),每组10只。后三组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病模型。模型诱导成功后,rbFGF组给予rbFGF 10μL(200 U)玻璃体内注射给药,rbFGF+DAPT组在给予rbFGF基础上加用DAPT(10μmol·L^-1)。注射12周后,HE染色检测RGC密度,免疫组织化学染色检测神经元再生相关蛋白GAP-43、Notch1蛋白表达,Western blot检测GAP-43、Notch1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3相对表达量。结果与对照组RGC密度(433.49±6.02)个·mm^-2,GAP-43荧光强度(8.96±0.26)%、Notch1阳性率(45.04±0.46)%及Caspase-3(27.91±0.63)%蛋白表达相比,糖尿病组RGC密度(328.35±6.43)mm^-2,Notch1荧光强度(31.66±0.40)%蛋白表达明显降低,GAP-43荧光强度(13.66±0.52)%、Caspase-3(48.91±0.64)%蛋白表达明显增加(均为P<0.05);而与糖尿病组相比,rbFGF组RGC密度(425.30±7.98)个·mm^-2,Notch1阳性率(41.76±0.62)%及GAP-43荧光强度(33.05±0.37)%蛋白表达明显增加,Caspase-3(28.86±0.71)%蛋白表达明显降低(均为P<0.05);而rbFGF+DAPT组RGC密度(324.91±8.22)个·mm^-2,GAP-43荧光强度(14.27±0.64)%、Notch1阳性率(30.40±0.82)%及Caspase-3(47.63±0.68)%蛋白表达均无明显变化(均为P>0.05)。结论rbFGF可上调糖尿病状态下视网膜GAP-43蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,进而提高RGC的存活,其机制可能与激活Notch1信号通路有关。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 视网膜神经节细胞 重组碱性成纤维细胞生长因子 Notch1信号通路 生长相关蛋白-43

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KGF-1二硫键突变体对肝纤维化的保护作用

14

作者 谢敏 万颖 +3 位作者 张增涛 何建军 杨黎 范开 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第4期45-49,共5页

观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含... 观察KGF-1二硫键突变体对人肝星状细胞的抑制作用和其对试验性肝损伤的修复作用,同时探讨二硫键对蛋白质生物活性的影响。运用CCl4诱导的肝纤维化模型对△23KGF-1组、△23Ser102 KGF-1组(不含二硫键)和△23Ser102 C40-C106 KGF-1组(含二硫键)进行体内抗纤维化活性的比较,并研究其对人肝星状细胞系的抑制作用。结果表明,与模型组相比,KGF-1突变体的各项指标均优于模型组,并且△23Ser102 KGF-1可明显抑制人肝星状细胞系的生长,可见KGF-1突变体不含二硫键组对大鼠试验性肝损伤有明显保护作用。此外实验还证明二硫键的有无会直接影响蛋白质的生物活性。 展开更多

关键词 重组人角质细胞生长因子-1突变体 二硫键 肝纤维化 四氯化碳

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大黄素通过抑制IGF-1介导的Akt/FoxO1信号通路调控人角质形成细胞脂质分泌的机制 被引量：4

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作者 邓方祺 刘思 +2 位作者 罗小华 柳宇峰 施歌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第14期1733-1739,共7页

目的探究中药单体大黄素(Emodin)对HaCaT人永生化角质形成细胞增殖、周期、凋亡、皮脂合成与分泌的影响。方法用0、25、50、100μmol/L大黄素处理HaCaT,行CCK-8细胞活力检测、结晶紫染色观察细胞集落、TUNEL荧光染色检测细胞集落、流式... 目的探究中药单体大黄素(Emodin)对HaCaT人永生化角质形成细胞增殖、周期、凋亡、皮脂合成与分泌的影响。方法用0、25、50、100μmol/L大黄素处理HaCaT,行CCK-8细胞活力检测、结晶紫染色观察细胞集落、TUNEL荧光染色检测细胞集落、流式细胞术检测细胞周期与凋亡、油红O染色观察并定量检测皮脂分泌水平、Western blot检测蛋白表达;利用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)诱导体外痤疮模型,检测皮脂分泌情况及Akt/FoxO1通路分子蛋白表达水平。结果大黄素处理组的HaCaT细胞融合度及集落形成数量随药物浓度增加而逐渐减少,HaCaT细胞活力降低,且具有浓度依赖性(P<0.001),PCNA表达水平降低(P<0.05);给药组内细胞周期发生G1/S阻滞,早期和晚期凋亡率均有所上升,Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调;细胞内脂滴堆积减少(P<0.05),成脂因子PPARγ、SREBP-1、LXR表达水平降低(P<0.05);IGF-1干预组内皮脂分泌增加,皮脂水平显著上调(P<0.001),Akt和FoxO1蛋白磷酸化程度增加(P<0.001);与IGF-1处理组相比,大黄素干预后,细胞皮脂分泌显著减少(P<0.001),Akt及FoxO1磷酸化程度明显降低(P<0.001)。结论大黄素能够减少HaCaT细胞皮脂合成与分泌,可能与抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡有关,并通过抑制IGF-1介导的Akt/FoxO1通路激活阻止痤疮发生。 展开更多

关键词 大黄素 HaCaT角质形成细胞 皮脂分泌 胰岛素样生长因子-1(IGF-1) 痤疮 Akt/FoxO1信号通路

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rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

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作者 李松 赵书芳 金岩 《口腔医学纵横》 CSCD 2002年第1期32-34,共3页

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 ... 目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF 展开更多

关键词 人重组细胞介素-1β 转化生长因子-Β 软骨细胞 细胞增殖 髁状突软骨细胞

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重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究 被引量：3

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作者 周昭 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期13-16,20,共5页

在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构... 在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rh KGF-1蛋白,研究其生物学活性,为rh KGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rh KGF-1(N端缺失23个氨基酸残基的rh KGF-1形式)的基因序列,应用重叠PCR技术,将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒p ET30a-6His-sumo-rh KGF1,转入E.coli BL21(DE3)中,表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后,切除SUMO标签,再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rh KGF-1蛋白。CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞(Ha Cat细胞)的促增殖作用。结果表明,成功构建了p ET30a-6His-sumo-rh KGF1表达质粒,测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,经纯化、酶切获得了ΔN23 rh KGF-1蛋白。制备的ΔN23 rh KGF-1蛋白具有促进Ha Cat细胞增殖的作用,EC50=6.11 ng/m L。 展开更多

关键词 重组人角质细胞生长因子-1 SUMO蛋白 原核表达

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rhIGF-1对成骨细胞增殖、BMP-2及Cbfa1基因表达的影响 被引量：5

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作者 张艳红 董进 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第3期157-160,共4页

目的通过重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子1(Cbfa1)基因表达的影响,探讨rhIGF-1对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度的rhIGF-1(0、10、50、100ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细... 目的通过重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)对体外成骨细胞增殖、骨形态蛋白-2(BMP-2)及核心结合因子1(Cbfa1)基因表达的影响,探讨rhIGF-1对骨代谢影响的可能机制。方法不同浓度的rhIGF-1(0、10、50、100ng/ml)刺激体外培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,用半定量RT-PCR法检测成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达。结果rhIGF-1可明显促进成骨细胞增殖(P<0.05),并促进成骨细胞BMP-2、Cbfa1基因的表达(P<0.01),具有浓度依赖性。结论rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖、分化及成熟,可能是通过增强BMP-2、Cbfa1基因的表达来实现的。 展开更多

关键词 重组人胰岛素样生长因子1 成骨细胞 增殖 骨形态蛋白-2 核心结合因子1

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rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的细胞活性研究 被引量：3

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作者 阳爱民 陈江 +4 位作者 闫福华 刘习红 梅雪霜 孙晓宝 葛凤华 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期783-785,共3页

目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体... 目的:检测不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性。方法:通过细胞计数(MTT法),碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的活性进行检测。结果:不同浓度的rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料对体外培养的Beagle犬骨髓基质细胞(MSC)的增殖和碱性磷酸酶的含量的影响不同。结论:rhBMP-2/hTGF-β1/胶原复合材料的生物学活性有剂量依赖性,和细胞浓度也有关。 展开更多

关键词 重组人骨形成蛋白-2 人转化生长因子-β1 胶原 复合材料 细胞浓度

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TGF-β1对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中植片IL-10表达的影响 被引量：1

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作者 黄晓莉 周炼红 +3 位作者 艾明 朱祥祥 邢怡桥 谭锦泉 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第1期12-17,共6页

目的研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associat-ed virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)... 目的研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associat-ed virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达的影响。方法构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒载体。40只角膜新生血管化的SD大鼠行穿透性角膜移植术。实验组(20只):角膜植片预浸泡在rAAV-TGF-β1(10×1012v.g.L-1)的达尔伯克必需基本培养液F12混合培养液中37℃孵育30min;对照组(20只):角膜植片预浸泡在0.1mol.L-1磷酸盐缓冲液中37℃孵育30min。裂隙灯观察TGF-β1对大鼠角膜植片存活时间、排斥反应指数的影响。术后第1周、第2周、第4周、第2个月对角膜植片行组织病理学检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IL-10的表达。结果对照组角膜植片平均存活时间为(10.40±2.45)d,实验组为(18.70±1.51)d,比对照组显著延长,差异具有显著统计学意义(P<0.01);术后第2周实验组角膜植片排斥反应指数(3.48±0.86)明显低于对照组(7.65±0.42),差异具有显著统计学意义(P<0.01)。IL-10在术后主要表达于角膜的上皮层与内皮层。术后各时期实验组IL-10的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,其机制与提高角膜组织中IL-10的表达有关。重组腺相关病毒是眼科基因治疗的有效载体。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒 高危角膜移植 免疫排斥反应 转化生长因子-β1 白细胞介素-10

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