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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析
被引量：
1
1
作者
千爱君
萧耿苗
+4 位作者
李壮
梁志成
穆云萍
赵子建
李芳红
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,...
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。
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关键词
重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白
真核表达
悬浮CHO-S细胞
cAMP活性
基因工程
脂代谢
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职称材料
重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究
被引量：
1
2
作者
千爱君
萧耿苗
+6 位作者
李壮
田雪
刘晓红
宋玉萍
赵正刚
赵子建
李芳红
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期1272-1278,共7页
目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内...
目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内甘油三酯(TG)及培养上清中甘油的水平,油红O染色观察脂滴变化。Western blot检测各组脂肪细胞中HSL和ATGL脂解蛋白的表达水平。不同浓度rCGH加或不加PKA抑制剂H89对已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预实验,将培养细胞分为对照组、H89预处理组、1μmol·L^(-1)rCGH组和(1μmol·L^(-1)rCGH+H89)联合干预组。酶法测定胞内TG及游离甘油的含量,Western blot检测CREB及脂解相关蛋白的表达。结果不同浓度rCGH(0.25、0.5、1、2μmol·L^(-1))对脂肪细胞细胞活力无显著影响(P>0.05);与对照组相比,rCGH处理显著降低了脂滴大小和细胞内TG含量,同时显著升高了细胞上清液中的甘油浓度。rCGH处理还刺激了p-HSL、ATGL和p-PKA的蛋白表达。此外,加入PKA抑制剂H89,减弱了rCGH对游离甘油水平、细胞内TG含量以及p-HSL、p-PLIN1和p-CREB表达的影响。结论rCGH通过上调HSL、ATGL和PKA活性促进3T3-L1脂肪细胞的脂质分解,促进甘油释放,抑制TG合成和脂质积累,其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路激活有关。
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关键词
重组
糖蛋白
激素β
5/α
2
3T3-L1脂肪细胞
甘油
甘油三酯
脂解
cAMP/PKA/CREB
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职称材料
题名
重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析
被引量：
1
1
作者
千爱君
萧耿苗
李壮
梁志成
穆云萍
赵子建
李芳红
机构
广东工业大学生物医药学院
华南理工大学医学院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期390-396,共7页
基金
国家重点研发计划项目(No 2018YFA0800603)
广东省重点领域研发计划项目(No 2019B020201015)
+1 种基金
广东省“珠江人才计划”项目(No 2016ZT06Y432)
国家自然科学基金青年项目(No 82100064)。
文摘
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。
关键词
重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白
真核表达
悬浮CHO-S细胞
cAMP活性
基因工程
脂代谢
Keywords
recombinant human glycoprotein hormone beta
5/
alpha
2
fusion protein
eukaryotic expression
suspension CHO-S cells
cAMP activity
genetic engineering
lipid metabolism
分类号
R-332 [医药卫生]
R341 [医药卫生—基础医学]
R344 [医药卫生—基础医学]
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
R977.1 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究
被引量：
1
2
作者
千爱君
萧耿苗
李壮
田雪
刘晓红
宋玉萍
赵正刚
赵子建
李芳红
机构
广东工业大学生物医药学院
南方医科大学顺德医院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第7期1272-1278,共7页
基金
国家重点研发计划(No 2018YFA0800603)
广州市科技计划项目(No 2023B03J1291)
+1 种基金
广东省创新团队(No 2016ZT06Y432)
广东省重点领域研发计划“新药创制”专项(No 2019B020201015)。
文摘
目的研究重组糖蛋白激素β5/α2(rCGH)对3T3-L1脂肪细胞脂解的影响,并探究其潜在机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导分化为成熟脂肪细胞,给予不同浓度rCGH干预24 h。以CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞的细胞活力,酶学方法测定细胞内甘油三酯(TG)及培养上清中甘油的水平,油红O染色观察脂滴变化。Western blot检测各组脂肪细胞中HSL和ATGL脂解蛋白的表达水平。不同浓度rCGH加或不加PKA抑制剂H89对已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞进行联合干预实验,将培养细胞分为对照组、H89预处理组、1μmol·L^(-1)rCGH组和(1μmol·L^(-1)rCGH+H89)联合干预组。酶法测定胞内TG及游离甘油的含量,Western blot检测CREB及脂解相关蛋白的表达。结果不同浓度rCGH(0.25、0.5、1、2μmol·L^(-1))对脂肪细胞细胞活力无显著影响(P>0.05);与对照组相比,rCGH处理显著降低了脂滴大小和细胞内TG含量,同时显著升高了细胞上清液中的甘油浓度。rCGH处理还刺激了p-HSL、ATGL和p-PKA的蛋白表达。此外,加入PKA抑制剂H89,减弱了rCGH对游离甘油水平、细胞内TG含量以及p-HSL、p-PLIN1和p-CREB表达的影响。结论rCGH通过上调HSL、ATGL和PKA活性促进3T3-L1脂肪细胞的脂质分解,促进甘油释放,抑制TG合成和脂质积累,其作用机制与cAMP/PKA/CREB信号通路激活有关。
关键词
重组
糖蛋白
激素β
5/α
2
3T3-L1脂肪细胞
甘油
甘油三酯
脂解
cAMP/PKA/CREB
Keywords
recombinant glycoprotein hormone beta
5/
alpha
2
3T3-L1 adipocytes
glycerol
triglyceride
lipolysis
cAMP/PKA/CREB
分类号
R-332 [医药卫生]
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R349.15 [医药卫生—基础医学]
R344.3 [医药卫生—基础医学]
R589.2 [医药卫生—内分泌]
R977.1 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析
千爱君
萧耿苗
李壮
梁志成
穆云萍
赵子建
李芳红
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组糖蛋白激素β5/α2调控cAMP/PKA/CREB通路促进3T3-L1细胞脂肪分解的作用及机制研究
千爱君
萧耿苗
李壮
田雪
刘晓红
宋玉萍
赵正刚
赵子建
李芳红
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
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