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重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体的构建及表达
被引量：
2
1
作者
柴锡庆
刘凌云
+3 位作者
郑龙
王俊霞
程桂花
杨涛
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期633-636,共4页
目的:构建重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体(rAAV-HIF-1α).并观察其在原代培养海马神经细胞中的表达。方法:构建含人类HIF-1α基因的AAV载体质粒pSNAV-HIF-1α.转染BHK21细胞并选择培养获得的G418抗性细胞,即AAV载体细胞株.以重...
目的:构建重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体(rAAV-HIF-1α).并观察其在原代培养海马神经细胞中的表达。方法:构建含人类HIF-1α基因的AAV载体质粒pSNAV-HIF-1α.转染BHK21细胞并选择培养获得的G418抗性细胞,即AAV载体细胞株.以重组单纯疱疹病毒感染此细胞株获得rAAV-HIF-1α,PCR技术鉴定病毒.地高辛标记的CMV探针点杂交方法测定重组病毒滴度.SDS-PAGE电泳测定病毒纯度.Western印迹检测目的蛋白的表达。结果:PCR证实rAAV- HIF-1α内含有人HIF-1α基因序列,病毒滴度为1×10^(12)/ml.纯度大干98%,感染原代培养海马神经细胞后能够表达目的蛋白。结论:成功构建了rAAV-HIF-1α,为进一步应用该基因进行临床基因治疗提供了实验依据。
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关键词
缺氧
诱导
因子
-
1α
原代培养
海马
腺
相关
病毒
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职称材料
侧脑室注射rAAV-HIF-1α基因治疗AD模型大鼠的研究
被引量：
4
2
作者
孙祎敏
郝宏强
+2 位作者
孔卫娜
刘凌云
柴锡庆
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期2711-2714,共4页
目的在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)腺相关病毒rAAV-HIF-1α对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①...
目的在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)腺相关病毒rAAV-HIF-1α对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①正常组(normal组):未作任何特殊处理;②AD模型组(AD组):右侧脑室注射2μlβ-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)25-35(10mg/m1);③假手术组(sham组):右侧脑室注射2μl生理盐水;④AD模型+rAAV-HIF-1a组(AD+rAAV-HIF-1a组):右侧脑室注射2μl Aβ25-35后1周右侧脑室注射10μl rAAV-HIF-1a(1×1012v.g/.m1)。以上各组动物于注射Aβ25-35或生理盐水后5周取材检测海马神经细胞HIF-1a蛋白表达及凋亡百分率。结果 Western blot检测表明rAAV-HIF-1α组海马神经细胞HIF-1α蛋白表达明显增强(P<0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率。结论侧脑室注射rAAV-HIF-1α能够在AD模型大鼠海马高效表达HIF-1α蛋白并抑制海马神经细胞凋亡。
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关键词
基因治疗
阿尔茨海默病
重组人类缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体
海马
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职称材料
题名
重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体的构建及表达
被引量：
2
1
作者
柴锡庆
刘凌云
郑龙
王俊霞
程桂花
杨涛
机构
河北医科大学研究生院
河北省实验动物中心
河北化工医药职业技术学院
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期633-636,共4页
文摘
目的:构建重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体(rAAV-HIF-1α).并观察其在原代培养海马神经细胞中的表达。方法:构建含人类HIF-1α基因的AAV载体质粒pSNAV-HIF-1α.转染BHK21细胞并选择培养获得的G418抗性细胞,即AAV载体细胞株.以重组单纯疱疹病毒感染此细胞株获得rAAV-HIF-1α,PCR技术鉴定病毒.地高辛标记的CMV探针点杂交方法测定重组病毒滴度.SDS-PAGE电泳测定病毒纯度.Western印迹检测目的蛋白的表达。结果:PCR证实rAAV- HIF-1α内含有人HIF-1α基因序列,病毒滴度为1×10^(12)/ml.纯度大干98%,感染原代培养海马神经细胞后能够表达目的蛋白。结论:成功构建了rAAV-HIF-1α,为进一步应用该基因进行临床基因治疗提供了实验依据。
关键词
缺氧
诱导
因子
-
1α
原代培养
海马
腺
相关
病毒
Keywords
hypoxia
-
inducible factor
-
lα
primary culture
hippocampus
adeno
-
associated virus
分类号
R338.2 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
侧脑室注射rAAV-HIF-1α基因治疗AD模型大鼠的研究
被引量：
4
2
作者
孙祎敏
郝宏强
孔卫娜
刘凌云
柴锡庆
机构
河北化工医药职业技术学院
河北医科大学基础医学院病理生理学教研室
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期2711-2714,共4页
基金
河北省教育厅科研计划项目(No2007433)
河北省自然科学基金(NoC2010001471)
文摘
目的在体观察侧脑室注射缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)腺相关病毒rAAV-HIF-1α对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只:①正常组(normal组):未作任何特殊处理;②AD模型组(AD组):右侧脑室注射2μlβ-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)25-35(10mg/m1);③假手术组(sham组):右侧脑室注射2μl生理盐水;④AD模型+rAAV-HIF-1a组(AD+rAAV-HIF-1a组):右侧脑室注射2μl Aβ25-35后1周右侧脑室注射10μl rAAV-HIF-1a(1×1012v.g/.m1)。以上各组动物于注射Aβ25-35或生理盐水后5周取材检测海马神经细胞HIF-1a蛋白表达及凋亡百分率。结果 Western blot检测表明rAAV-HIF-1α组海马神经细胞HIF-1α蛋白表达明显增强(P<0.05),同时可显著降低Aβ25-35诱导海马神经细胞凋亡百分率。结论侧脑室注射rAAV-HIF-1α能够在AD模型大鼠海马高效表达HIF-1α蛋白并抑制海马神经细胞凋亡。
关键词
基因治疗
阿尔茨海默病
重组人类缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体
海马
Keywords
gene therapy
Alzheimer disease
rAAV
-
HIF
-
1α
apoptosis
分类号
R749.16 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体的构建及表达
柴锡庆
刘凌云
郑龙
王俊霞
程桂花
杨涛
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
侧脑室注射rAAV-HIF-1α基因治疗AD模型大鼠的研究
孙祎敏
郝宏强
孔卫娜
刘凌云
柴锡庆
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
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