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重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合
1
作者
王宏
沈子龙
+5 位作者
奚涛
李治国
刘红如
赵周英
吴国祥
成国祥
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期73-77,共5页
目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片...
目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片段 ,下游同源臂为 3.3kb从 β- 酪蛋白外显子 6至外显子 9的基因组片段。rPA小基因起始密码子位于 β- 酪蛋白信号肽编码区下游。将载体瞬时转染C12 7小鼠乳腺癌细胞 ,并通过激素进行诱导 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能。将载体通过电穿孔的方法转染同基因型的山羊胎儿成纤维细胞。利用G4 18和GANC进行药物筛选 ,并通过PCR和southern杂交的方法进行基因组DNA检测。结果 :获得了一株定点整合的细胞克隆 ,绝对基因打靶效率为 2× 10 7。结论 :本实验结果为后续利用核移植技术制备乳腺生物反应器提供了坚实的实验基础。
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关键词
体细胞
基因打靶
胎儿成纤维细胞
乳腺生物反应器
重组人瑞替普酶
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题名
重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合
1
作者
王宏
沈子龙
奚涛
李治国
刘红如
赵周英
吴国祥
成国祥
机构
中国药科大学生命与科学技术学院
上海市转基因研究中心
出处
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期73-77,共5页
基金
国家高技术研究发展计划 ("863"计划 )资助项目 (No .AA2 0 665 2 )~~
文摘
目的 :利用体细胞基因打靶技术来获得定点整合有重组人瑞替普酶 (rPA)的山羊胎儿成纤维细胞株。方法 :构建了针对山羊 β- 酪蛋白基因座的定点打靶载体 ,其上游同源臂为 β 酪蛋白启动子端同时包含其信号肽编码区长约 6 .1kb的基因组片段 ,下游同源臂为 3.3kb从 β- 酪蛋白外显子 6至外显子 9的基因组片段。rPA小基因起始密码子位于 β- 酪蛋白信号肽编码区下游。将载体瞬时转染C12 7小鼠乳腺癌细胞 ,并通过激素进行诱导 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)检测细胞培养上清中的rPA表达量来验证载体表达功能。将载体通过电穿孔的方法转染同基因型的山羊胎儿成纤维细胞。利用G4 18和GANC进行药物筛选 ,并通过PCR和southern杂交的方法进行基因组DNA检测。结果 :获得了一株定点整合的细胞克隆 ,绝对基因打靶效率为 2× 10 7。结论 :本实验结果为后续利用核移植技术制备乳腺生物反应器提供了坚实的实验基础。
关键词
体细胞
基因打靶
胎儿成纤维细胞
乳腺生物反应器
重组人瑞替普酶
Keywords
Somatic cell
Gene targeting
Fetal fibroblasts
Mammary gland bioreactor
rPA
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
重组人瑞替普酶基因在山羊胎儿成纤维细胞β-酪蛋白基因座的定点整合
王宏
沈子龙
奚涛
李治国
刘红如
赵周英
吴国祥
成国祥
《中国药科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
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