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题名重组人中期因子的原核表达、纯化及生物学活性鉴定
被引量：4
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作者
钱海华
康晓燕
殷正丰
王翠红
李瑾
吴孟超
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机构
第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室
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出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期394-397,共4页
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基金
国家自然科学基金 ( 3 0 2 70 5 2 3 )
国家重点基础研究规划 ("973"计划 ) ( 2 0 0 2 CB5 13 10 0 )
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文摘
目的 :表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法 :应用 RT- PCR从人肝细胞癌组织总 RNA中扩增中期因子 c DNA,将其克隆到表达载体 p ET- 2 4 a,在大肠杆菌中诱导表达 ,经肝素 -琼脂糖亲和层析柱纯化 ,应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。 结果 :构建的重组质粒 p ET- HMK能在大肠杆菌中高表达 ,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中 ,经肝素 -琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带 ,特异性抗体反应证实是重组人中期因子 ,细胞增殖试验显示其能有效促进 NIH 3T3细胞生长 ,并且具有剂量依赖性。结论
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关键词
重组人中期因子
原核表达
纯化
生物学活性
鉴定
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Keywords
midkine
prokaryotic expression
affinity chromatography
cell proliferation
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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