1株表达新城疫病毒F蛋白重组乳酸菌的安全性评价

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作者 张甜甜 翟延庆 《现代畜牧兽医》 2025年第7期22-27,共6页

研究旨在对1株表达新城疫病毒(NDV) F蛋白的重组乳酸菌LP3-2进行安全性评价。将菌株LP3-2接种于MRS平板培养后进行革兰氏染色、镜检,观察其菌落、菌体形态;之后通过血平板培养检测其溶血性,采用最低抑菌浓度测定法(MIC)评估菌株LP3-2对... 研究旨在对1株表达新城疫病毒(NDV) F蛋白的重组乳酸菌LP3-2进行安全性评价。将菌株LP3-2接种于MRS平板培养后进行革兰氏染色、镜检,观察其菌落、菌体形态;之后通过血平板培养检测其溶血性,采用最低抑菌浓度测定法(MIC)评估菌株LP3-2对7种常用抗生素的敏感性;通过经口灌胃(每日每只小鼠5.0×10^(7)~5.0×10^(9) CFU/0.2 mL,持续28 d)的方式感染小鼠,分析菌株LP3-2的动物致病性。结果显示,LP3-2在血平板上无溶血现象,对测试抗生素均表示敏感。经口灌胃悬菌液的小鼠均未出现明显的临床症状,小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均无肉眼可见病变,各试验组小鼠血清肌酐(CREA)含量均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,该株表达NDV F蛋白的重组乳酸菌具有较好的安全性,试验结果为其在新型疫苗研发等领域的进一步应用提供了安全基础,但仍需进一步深入研究其长期安全性及潜在风险。 展开更多

关键词 重组乳酸菌 新城疫病毒 致病性 溶血性 药物敏感性

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表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸菌口服免疫小鼠特异性免疫应答分析 被引量：7

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作者 唐丽杰 魏颖 +4 位作者 葛俊伟 任晓峰 汪淼 徐义刚 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期523-527,共5页

将表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌pNZ8112-Sa/NZ9000经口服免疫BALB/c小鼠,在免疫后的不同时间收集免疫鼠粪便样品,断尾采血收集血液样品并分离血清,用间接ELISA技术检测血清中的IgG抗体及血清和粪便中的IgA抗体的动态产... 将表达猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的重组乳酸乳球菌pNZ8112-Sa/NZ9000经口服免疫BALB/c小鼠,在免疫后的不同时间收集免疫鼠粪便样品,断尾采血收集血液样品并分离血清,用间接ELISA技术检测血清中的IgG抗体及血清和粪便中的IgA抗体的动态产生规律;在加强免疫后流式细胞仪检测分析外周血T细胞的变化情况及无菌收集免疫鼠的肠黏液,经中和试验检测其抗体的中和能力。结果表明重组菌株口服免疫小鼠后血清中的IgG和IgA抗体产生能力由于非特异性干扰不能确定,外周血中T细胞百分数在实验组和对照组间变化不显著;粪便中的IgA抗体水平产生效果明显;黏液的抗体具有一定的中和能力,其效价检测结果为1:36。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白 重组乳酸菌 小鼠口服免疫 特异性免疫应答

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猪传染性胃肠炎病毒S基因重组乳酸菌免疫小鼠的研究 被引量：5

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作者 刘义 陈中秋 +1 位作者 董丽娜 胡桂学 《中国兽药杂志》 2011年第4期1-4,共4页

将含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌PNZ8149/NZ3900口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,第3次加强免疫后10 d捕杀小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用T淋巴细胞增殖试验及间接ELISA方法,检查免疫小鼠对外源基因表达产物的应答情况。结... 将含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌PNZ8149/NZ3900口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,第3次加强免疫后10 d捕杀小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用T淋巴细胞增殖试验及间接ELISA方法,检查免疫小鼠对外源基因表达产物的应答情况。结果表明,含有S基因的重组乳酸菌经口服免疫小鼠后,血清中的IgG、粪便中的sIgA与对照组有明显的差异(P<0.05)。结果说明,含有猪传染性胃肠炎病毒S基因的重组乳酸菌,可以诱导小鼠产生良好的针对猪传染性胃肠炎病毒的全身体液和黏膜免疫应答。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒S基因 重组乳酸菌 小鼠

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表面展示C型产气荚膜梭菌α，β毒素蛋白重组乳酸菌的构建及反应原性分析 被引量：2

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作者 李超 刘孟宇 +2 位作者 刘琼 王春凤 倪宏波 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第6期23-28,共6页

构建表达C型产气荚膜梭菌α,β1和β2毒素蛋白的重组乳酸菌,并对表达蛋白反应原性进行鉴定。通过PCR构建pSIP409-pgsA’-α,pSIP409-pgsA’-β1以及pSIP409-pgsA’-β2质粒,并将三种质粒电转入植物乳杆菌NC8后诱导表达,通过Western-blo... 构建表达C型产气荚膜梭菌α,β1和β2毒素蛋白的重组乳酸菌,并对表达蛋白反应原性进行鉴定。通过PCR构建pSIP409-pgsA’-α,pSIP409-pgsA’-β1以及pSIP409-pgsA’-β2质粒,并将三种质粒电转入植物乳杆菌NC8后诱导表达,通过Western-blot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。构建的NC8-pSIP409-pgsA’-α,NC8-pSIP409-pgsA’-β1以及NC8-p SIP 409-pgsA’-β2三种重组乳酸菌能成功表达C型产气荚膜梭菌α,β1和β2毒素蛋白,三种表达的融合蛋白大小分别为61 kDa、52 kDa以及46 kDa。三种重组乳酸菌表达了C型产气荚膜梭菌α,β1和β2毒素蛋白且与制备的多抗具有良好的反应原性,为C型产气荚膜梭菌口服疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 pSIP409-pgsA’ C型产气荚膜梭菌 重组乳酸菌 反应原性

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表达猪传染性胃肠炎S-AD片段的重组乳酸菌对小鼠的免疫原性影响 被引量：3

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作者 黄海楠 黄海鸥 +8 位作者 刘云志 杨金生 邵洪泽 许志林 任锐 程荣华 吕雪峰 李昱洁 丁志杰 《养殖与饲料》 2016年第7期9-11,共3页

将已证实能稳定复制猪传染性胃肠炎S基因AD片段的重组乳酸菌口服免疫BALB/c小鼠,每组于免疫前和免疫后的第7天、第14天、第21天分别取3只小鼠眼球采血、取肠道内容物、分离脾细胞,于免疫的第28天将剩下的小鼠全部取眼球采血、取肠道内... 将已证实能稳定复制猪传染性胃肠炎S基因AD片段的重组乳酸菌口服免疫BALB/c小鼠,每组于免疫前和免疫后的第7天、第14天、第21天分别取3只小鼠眼球采血、取肠道内容物、分离脾细胞,于免疫的第28天将剩下的小鼠全部取眼球采血、取肠道内容物、分离脾细胞,用于ELISA抗体、肠黏膜SIgA水平及淋巴细胞增殖的检测。经细胞免疫和体液免疫检测,该乳酸菌口服疫苗具有良好的免疫效果。 展开更多

关键词 重组乳酸菌 SIGA 淋巴细胞 增殖 免疫原性

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猪产毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因重组乳酸菌对小鼠免疫性能的影响 被引量：1

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作者 程福亮 王春凤 +4 位作者 聂兆晶 姜艳萍 王丽荣 刘洋庆 谷巍 《畜禽业》 2013年第9期8-11,共4页

目的为获得临床对猪大肠杆菌病较好的预防方法,研究猪产毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因的重组乳酸菌对小鼠免疫性能的影响。方法将重组乳酸菌经口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,加强免疫后7 d处理小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用试剂盒... 目的为获得临床对猪大肠杆菌病较好的预防方法,研究猪产毒素大肠杆菌K88黏附素FaeG基因的重组乳酸菌对小鼠免疫性能的影响。方法将重组乳酸菌经口服(灌胃)免疫BALB/C小鼠,加强免疫后7 d处理小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后采用试剂盒及间接ELISA方法,检查小鼠免疫性能变化情况。结果重组乳酸菌经口服免疫小鼠后,提高了小鼠生长初期的脾脏指数及细胞因子(IL-2)的含量,加强免疫后粪便中的sIgA与对照组相比,差异极显著(P<0.01),血清中猪ETEC(K88)的特异性抗体水平高于对照组,差异性达到了统计学上的显著水平(P<0.05)。结论含有猪ETEC K88黏附素FaeG基因的重组乳酸菌,可以诱导小鼠产生良好的针对猪产毒素大肠杆菌的全身体液和黏膜免疫应答。 展开更多

关键词 大肠杆菌 重组乳酸菌 小鼠 免疫性能

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表达禽β-防御素6重组乳酸菌的构建及其免疫调节活性检测 被引量：2

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作者 王婷婷 王志浩 +10 位作者 米洁兰 王文骞 高玉龙 刘长军 祁小乐 张艳萍 李凯 高立 潘青 王笑梅 崔红玉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期931-937,共7页

为构建表达禽β-防御素6(AvBD6)的重组乳酸菌并检测重组蛋白AvBD6(rAvBD6)的免疫调节活性,本研究根据GenBank AvBD6的参考序列,经过密码子优化后合成了AvBD6:AvBD6(G4S)3 AvBD6(G4S)3 AvBD6(G4S)3 AvBD6(4×AvBD6)串联基因序列,构... 为构建表达禽β-防御素6(AvBD6)的重组乳酸菌并检测重组蛋白AvBD6(rAvBD6)的免疫调节活性,本研究根据GenBank AvBD6的参考序列,经过密码子优化后合成了AvBD6:AvBD6(G4S)3 AvBD6(G4S)3 AvBD6(G4S)3 AvBD6(4×AvBD6)串联基因序列,构建了表达rAvBD6的食品级乳酸菌表达菌株。经western blot检测显示,目的蛋白呈可溶性表达于乳酸菌细胞质中。以重组乳酸菌裂解上清为重组蛋白,与鸡外周血单个核细胞进行体外相互作用试验,荧光定量PCR结果显示,经rAvBD6刺激鸡外周血单个核细胞能够显著提高IL-10(p<0.0001)、IL-12p70(p<0.05)转录水平;重组蛋白与鸡巨噬细胞体外相互作用试验的荧光定量PCR结果显示,经rAvBD6处理的鸡巨噬细胞也能够提高IL-10、IL-12p70的转录水平(p<0.05);重组蛋白刺激干扰素调节因子IRF信号激活报告细胞系774-DualTM,结果显示rAvBD6显著激活了该巨噬细胞的IRF信号通路(p<0.05);SPF鸡注射重组蛋白两周后,采用ELISA检测鸡血清IFN-γ、IL-2和IL-10表达水平,结果显示其IFN-γ、IL-10和IL-2的含量显著高于空菌对照组(p<0.05)。上述结果表明:rAvBD6在体内外显示了较强的免疫激活和免疫调节特性,具有作为免疫佐剂或免疫增强剂的潜力。本研究为新型食品安全级动物免疫佐剂或免疫增强剂的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 禽β-防御素6 重组乳酸菌 免疫调节活性 免疫佐剂 免疫增强剂

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基因重组乳酸菌r-L.Lactis-VP2-RCK对IBDV母源抗体不同水平雏鸡的免疫效果

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作者 张靖飞 张园 陈瑞 《动物医学进展》 北大核心 2020年第5期125-129,共5页

母源抗体是早期干扰活疫苗免疫效果的重要因素,通过研究商品蛋鸡法氏囊母源抗体的消长规律,并且在母源抗体达到最高峰的时候,观察免疫重组乳酸菌r-L.Lactis-VP2-RCK的免疫效果是否受到母源抗体的干扰。结果显示,母源抗体在3日龄~6日龄... 母源抗体是早期干扰活疫苗免疫效果的重要因素,通过研究商品蛋鸡法氏囊母源抗体的消长规律,并且在母源抗体达到最高峰的时候,观察免疫重组乳酸菌r-L.Lactis-VP2-RCK的免疫效果是否受到母源抗体的干扰。结果显示,母源抗体在3日龄~6日龄的时候达到最高峰,随后开始逐渐衰减;在6日龄母源抗体达到最高峰时,对低、中等和高水平的母源抗体雏鸡免疫重组乳酸菌r-L.Lactis-VP2-RCK。3个免疫组都能在免疫后1周迅速产生较高的中和抗体。研究表明,重组乳酸菌r-L.Lactis-VP2-RCK免疫雏鸡不受母源抗体干扰,并能产生显著的免疫应答,该研究结果为进一步研制商品化的重组乳酸菌活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组乳酸菌 母源抗体 免疫评价 传染性法氏囊病病毒

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表达禽流感病毒NP和M2融合基因重组乳酸菌的构建及鉴定 被引量：1

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作者 李琼燕 杨桂连 +4 位作者 张成赛 赵金辉 晋玉北 杨文涛 王春凤 《中国兽药杂志》 2018年第12期9-15,共7页

为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV) NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入p SIP409-pgsA'-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA'-NP-M2,再将重组质... 为了在乳酸菌中表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV) NP和M2基因并检测其反应原性,先以pMD19-T-M2质粒作为模板,采用PCR方法克隆M2全长基因,然后将M2基因亚克隆入p SIP409-pgsA'-NP质粒中,构建重组质粒pSIP409-pgsA'-NP-M2,再将重组质粒pSIP409-pgsA'-NP-M2通过电转化的方法转入植物乳杆菌Lb.plantarum NC8中,制备重组菌NC8-p SIP409-pgsA'-NP-M2并诱导表达,最后通过流式细胞术、免疫荧光和免疫印迹技术验证。结果表明,重组菌NC8-pSIP409-pgsA'-NP-M2能够经诱导表达NP-M2融合蛋白,并且与兔源NP单克隆抗体和抗M2的小鼠血清具有反应原性。试验为后续研究禽流感广谱口服疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 NP基因 M2基因 原核表达 重组乳酸菌

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表达γ干扰素的重组乳酸菌辅助治疗猫感染性腹泻

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作者 孙培文 王瑜琪 +6 位作者 张丹辉 王威 王煜煜 庞坤 高利华 华进联 李娜 《动物医学进展》 2025年第10期137-140,共4页

2岁豹猫常年顽固性腹泻,粪便稀软,因近日突然大便失禁,粪便不成形且有鲜血和黏膜样物排出而入院诊治。临床检查显示其基本生命体征正常,体格检查显示除轻度脱水外未见其他异常,粪便镜检呈现寄生虫、细菌、真菌阳性,通过瑞士染色镜检发... 2岁豹猫常年顽固性腹泻,粪便稀软,因近日突然大便失禁,粪便不成形且有鲜血和黏膜样物排出而入院诊治。临床检查显示其基本生命体征正常,体格检查显示除轻度脱水外未见其他异常,粪便镜检呈现寄生虫、细菌、真菌阳性,通过瑞士染色镜检发现呈“笑脸”状的贾第虫滋养体,因此确诊为寄生虫及细菌混合感染性腹泻。通过口服表达IFN-γ的重组乳酸菌、甲硝唑和碱式碳酸铋等药物对患猫进行治疗。患猫在治疗7 d后粪便形态恢复正常,停药3 d后复查粪便结果显示正常。表达IFN-γ的乳酸菌相较于常规益生菌可以有效辅助猫寄生虫和细菌性腹泻的治疗,帮助患猫在更短的时间内痊愈,并促进肠道健康和菌群稳态。 展开更多

关键词 重组乳酸菌 IFN-γ 猫 贾第虫

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重组猪抗菌肽乳酸菌的构建及其应用效果 被引量：3

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作者 刘东旭 沙万里 +1 位作者 尹柏双 李国江 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期35-38,I0003,共5页

为研制防治仔猪腹泻的无抗添加剂,本试验以乳酸菌为表达载体,重组猪β-防御素及PR-39抗菌肽,构建重组乳酸菌pNZ8148-β-PR-39、pNZ8148-β及pNZ8148-PR-39,并饲喂21日龄断奶仔猪。结果显示:仔猪基础日粮中添加重组乳酸菌可降低肠道中大... 为研制防治仔猪腹泻的无抗添加剂,本试验以乳酸菌为表达载体,重组猪β-防御素及PR-39抗菌肽,构建重组乳酸菌pNZ8148-β-PR-39、pNZ8148-β及pNZ8148-PR-39,并饲喂21日龄断奶仔猪。结果显示:仔猪基础日粮中添加重组乳酸菌可降低肠道中大肠杆菌数量(P<0.05);重组乳酸菌pNZ8148-β-PR-39可有效抑制仔猪肠道的金黄色葡萄球菌及肠球菌(P<0.05),仔猪腹泻率降低39.62%,腹泻指数降低33.07%,差异显著(P<0.05)。结果表明仔猪基础日粮中添加本试验构建的重组乳酸菌,能够显著提高仔猪的生产性能,降低肠道有害菌含量,并降低仔猪腹泻率。 展开更多

关键词 重组乳酸菌 抗菌肽 防御素 仔猪腹泻

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表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其表达的优化 被引量：8

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作者 张旺 刘琳琳 +9 位作者 祁小乐 高玉龙 王永强 高宏雷 李凯 高立 刘长军 张艳萍 王笑梅 崔红玉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期825-828,共4页

鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(L.lactis)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌L.lactis/p NZ-VP... 鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(L.lactis)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌L.lactis/p NZ-VP2。经正交试验对诱导条件进行优化,重组VP2蛋白(r VP2)表达量比优化前明显提高,最终得到最佳诱导条件为:OD600nm=0.5开始诱导,Nisin终浓度为2 ng/m L,诱导时间为5 h,r VP2表达量达到最大值38μg/m L。经western blot检测,r VP2能够持续性表达并具有良好的抗原性。该重组乳酸菌的构建为进一步体内免疫实验奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病毒 重组乳酸菌 VP2蛋白

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过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌构建及发酵性能 被引量：1

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作者 朱龙宝 葛飞 +1 位作者 李婉珍 陶玉贵 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期245-249,共5页

乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连... 乳酸脱氢酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途径中的关键酶,通过构建过量表达乳酸脱氢酶的重组干酪乳杆菌,提高干酪乳杆菌发酵产乳酸的能力。根据干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的基因序列设计引物,PCR扩增获得乳酸脱氢酶基因(ldh),将其连接到乳酸杆菌穿梭质粒pMG36e,构建重组质粒pMG-ldh,电转入L.casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,获得表达乳酸脱氢酶的重组菌L.casei pMG-ldh,SDS-PAGE和酶活分析结果表明成功表达了一个约37kD的乳酸脱氢酶蛋白,重组酶活力最高达95U/mL,较原始菌23U/mL提高了近3.1倍。为进一步提高其产乳酸能力,添加4mmol/L激活剂FBP和8mg/L烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前体物烟酸,结果表明:重组菌L.caseipMG-ldh乳酸积累128.2g/L,生产强度达到3.04g/(L.h),较原始菌株L.casei分别提高了35%和53%,发酵周期缩短6h。 展开更多

关键词 乳酸脱氢酶 重组干酪乳酸菌 高效表达 发酵特性

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2011年《中国兽药杂志》第45卷总目次(卷终)

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《中国兽药杂志》 2011年第12期56-60,共5页

关键词 兽药残留检测 灭活疫苗 《中华人民共和国兽药典》 中兽药散剂 重组乳酸菌 猪瘟流行 杂志 目次 中华人民共和国

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