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重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽抑制人胆管癌细胞生长作用及其机制研究 被引量:11
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作者 葛贤秀 曹鹏 +4 位作者 卢悟广 季国忠 李全鹏 谢睿 缪林 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第4期343-347,共5页
目的重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(recommbinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)是从东亚钳蝎中提取纯化出的单体,已证明其具有明显的抗肿瘤活性。文中主要探讨rAGAP对体外培养的人胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)细胞株HuCC-T1的毒... 目的重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(recommbinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)是从东亚钳蝎中提取纯化出的单体,已证明其具有明显的抗肿瘤活性。文中主要探讨rAGAP对体外培养的人胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)细胞株HuCC-T1的毒性作用,并探讨其抗肿瘤的机制。方法不同浓度的rAGAP刺激细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增长率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力的变化;Hoechst荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果①rAGAP可抑制HuCC-T1细胞的增殖和迁移,并呈时间和剂量依赖性。②Hoechst33342染色结果显示rAGAP处理组细胞形态发生改变,见细胞核染色质边集、核固缩;流式细胞术证实rAGAP可诱导HuCC-T1细胞凋亡。③Western blot结果显示:随着rAGAP浓度的增加,Bcl-2表达下调;Bax表达上调;而Bcl-2/Bax减小。结论 rAGAP可抑制CCA细胞HuCC-T1的生长与迁移,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与Bcl-2/Bax信号通路有关。 展开更多
关键词 重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽 胆管癌细胞 凋亡 BCL-2 BAX
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重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽协同5-氟尿嘧啶对小鼠H22肝癌的抑制作用 被引量:5
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作者 赵向阳 石永强 +1 位作者 缪林 陈跃 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期44-47,共4页
目的:探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,r AGAP)增强5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对肝癌H22细胞的抑制作用及机制。方法:SPF级雄性小鼠120只,采用接种H22肝癌小鼠腹水方法建立模型,随机分为4... 目的:探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,r AGAP)增强5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对肝癌H22细胞的抑制作用及机制。方法:SPF级雄性小鼠120只,采用接种H22肝癌小鼠腹水方法建立模型,随机分为4组:r AGAP组(予r AGAP 0.03 mg/kg)、5-FU组(予5-FU 10 mg/kg)、联合组(予r AGAP 0.03 mg/kg,5-FU 10 mg/kg),模型组(予等体积生理盐水),每4 d腹腔注射1次,用药持续24 d。用药结束后取出肿瘤组织标本,检测各组瘤体组织重量和抑瘤率,Western blot方法检测PI3K、AKT、PTEN蛋白表达。结果:与模型组相比,其他各组小鼠瘤体组织重量均明显降低(P<0.05);联合组抑瘤率明显高于r AGAP组和5-FU组(P<0.05)。与模型组相比,其他各组PI3K、p-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P<0.05);与5-FU组、r AGAP组相比,联合组PI3K、p-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P<0.05)。结论:r AGAP能增强5-FU对肝癌组织的抑制作用,其机制可能与影响PI3K/AKT/PTEN信号通路,进而抑制肝癌细胞的增殖有关。 展开更多
关键词 重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽 5-氟尿嘧啶 肝癌H22
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重组CD_(13)单链抗体和蝎毒素多肽AGAP融合蛋白真核表达及对NB4细胞的靶向杀伤作用 被引量:1
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作者 倪吴花 骆超 +1 位作者 俞康 吴建波 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第11期1231-1236,共6页
目的:本研究应用基因工程技术方法,构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide,AGAP)融合蛋白基因的表达载体,并研究CD13-AGAP融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4影响。方法:克隆东亚钳蝎活性... 目的:本研究应用基因工程技术方法,构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide,AGAP)融合蛋白基因的表达载体,并研究CD13-AGAP融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4影响。方法:克隆东亚钳蝎活性肽AGAP的基因,插入真核表达载体pSecTag2/CD13/RFP,得到pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体。酶切及测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染293T细胞,通过RT-PCR和免疫印迹方法检测融合基因和蛋白的表达。纯化融合蛋白,作用NB4细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:酶切及测序结果证实pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体构建成功,转染293T细胞后,RT-PCR和免疫印迹方法结果证实重组质粒得到有效表达,并纯化真核表达融合蛋白CD13-AGAP对血液肿瘤CD13阳性白血病细胞NB4有一定的生长抑制作用,并且使细胞周期G1期阻滞,S期减少。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pSecTag2/CD13/AGAP,并在293T细胞中成功表达,进一步证实融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4有杀伤作用。 展开更多
关键词 东亚钳蝎 蝎毒活性 肿瘤缬精甘 CD_(13)单链 融合蛋白
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人源化抗ROR1抗体及其AGAP偶联物对卵巢癌生物学特性的影响 被引量:3
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作者 龚丹丹 高梦云 +7 位作者 冯恬 王怡雯 周婷婷 王一荃 吴立英 朱进 张慧林 童华 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期331-341,共11页
目的:制备酪氨酸激酶样孤儿受体1(tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1)的全分子抗体(ROR1-IgG1)及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体(fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tum... 目的:制备酪氨酸激酶样孤儿受体1(tyrosine-kinase-like orphan receptor1,ROR1)的全分子抗体(ROR1-IgG1)及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体(fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti-tumor polypeptide IgG1,IgG1-AGAP),检测ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法:以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1-IgG1和IgG1-AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S),收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)等评估IgG1-AGAP和ROR1-IgG1的免疫学活性。通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮细胞-间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达,评估ROR1-IgG1和IgG1-AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:成功制备出ROR1-IgG1和IgG1-AGAP,且能够与ROR1蛋白特异性结合;IgG1-AGAP与ROR1-IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且IgG1-AGAP组的抑制作用显著高于ROR1-IgG1组,而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明,在空白对照组、ROR1-IgG1组和IgG1-AGAP组中,Snail的表达量呈现递减趋势,而E-cadherin表达量递增,提示ROR1-IgG1和IgG1-AGAP可通过调控Snail和E-cadherin而抑制HO8910细胞发生EMT,进而抑制其迁移和侵袭能力。结论:IgG1-AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞,并具有显著的抗肿瘤活性,IgG1-AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。 展开更多
关键词 ROR1 IGG1 卵巢癌 东亚钳蝎镇痛肿瘤
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人源抗c-Met抗体与rAGAP偶联物对卵巢癌细胞生物学特性的影响
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作者 冯恬 龚丹丹 +5 位作者 王露瑶 王怡雯 周婷婷 朱进 张慧林 童华 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期817-825,共9页
目的:制备人源抗c-Met的全分子抗体(c-Met-IgG1)及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)偶联的新型抗体(c-Met-IgG1-rAGAP),分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法... 目的:制备人源抗c-Met的全分子抗体(c-Met-IgG1)及其与重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽(recombinant analgesic-antitumor peptide,rAGAP)偶联的新型抗体(c-Met-IgG1-rAGAP),分析它们的生物学特性,检测其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法:以本实验室保存的人源抗c-Met抗体基因为模板,构建c-Met-IgG1-rAGAP真核表达载体并转染真核细胞,表达并纯化抗体偶联物。通过亲和力检测、免疫荧光、流式细胞术等方法,评估c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP的生物学特性。通过CCK-8、划痕实验、Transwell侵袭实验检测抗体对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:成功制备出能够与c-Met蛋白特异性结合的c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP两种抗体;一系列实验证明了c-Met-IgG1和c-Met-IgG1-rAGAP均可抑制c-Met阳性的卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且c-Met-IgG1-rAGAP对卵巢癌细胞的抑制作用要强于c-Met-IgG1,而在c-Met阴性的IOSE386细胞中并未观察到这些作用。结论:研究结果表明c-Met-IgG1-rAGAP可靶向作用于c-Met阳性的卵巢癌细胞并具有抗肿瘤活性,可为探索卵巢癌的分子靶向治疗奠定研究基础。 展开更多
关键词 C-MET 体药物偶联物 重组东亚钳蝎镇痛肿瘤 卵巢癌
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