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原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究被引量：12: 1; 作者高红伟李素波 +6 位作者鲍国强檀英霞王玲燕金泗虎王颖丽季守平宫锋《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期503-507,共5页; 本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷... 展开更多; 关键词基因重组α-半乳糖苷酶血型改造 B→O血型改造; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组α-半乳糖苷酶酶解大豆低聚糖研究被引量：3: 2; 作者王璇琳李素波 +3 位作者高红伟田曙光宫锋章扬培《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期222-226,共5页; 本研究应用本实验室基因重组咖啡豆α-半乳糖苷酶对棉籽糖和水苏糖进行了酶解,应用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)法检测了酶解前后大豆低聚糖的变化情况,结合大豆制品传统加工工艺,提出了酶的添加方式和工艺。; 关键词大豆低聚糖肠胃胀气基因重组α-半乳糖苷酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

新型基因重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性研究被引量：2: 3; 作者高红伟李素波 +5 位作者艾雪李妙王颖丽让文亮季守平宫锋《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期201-204,共4页; 观察脆弱类杆菌来源的新型重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株的遗传稳定性。在有选择压力(Kan+)条件下,将重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素... 展开更多; 关键词重组α-半乳糖苷酶遗传稳定性传代; 在线阅读下载PDF 职称材料

α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：4: 4; 作者刁文涛向凌云 +5 位作者宁萌王雪妍马焕冯菲陈国参周伏忠《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第8期60-66,共7页; 利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,成功异源表达了一株链球菌(Streptococcus)S1的α-半乳糖苷酶基因,重组α-半乳糖苷酶经镍柱纯化后,测定其酶学性质。重组α-半乳糖苷酶最适pH值为6.5,最... 展开更多; 关键词链球菌大肠杆菌异源表达重组α-半乳糖苷酶酶学性质; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定被引量：2: 5; 作者邓木兰周泓宇 +7 位作者郑可欣李昭阳郭婉怡王艳苹梁志成李芳红穆云萍赵子建《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期774-781,共8页; 目的运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galactosidase A, rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖... 展开更多; 关键词重组人α-半乳糖苷酶法布雷病酶替代疗法悬浮CHO-S细胞溶酶体贮积症基因工程; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究被引量：12: 1; 作者高红伟李素波鲍国强檀英霞王玲燕金泗虎王颖丽季守平宫锋; 机构军事医学科学院野战输血研究所; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期503-507,共5页; 文摘本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造。在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的最佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化。利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞。结果表明细菌α-半乳糖苷酶最佳诱导表达条件为:37℃、起始D600为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时。纯化后α-半乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg。该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞。结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶。; 关键词基因重组α-半乳糖苷酶血型改造 B→O血型改造; Keywords gene recombinant α-galactosidase blood group conversion B to O blood group conversion; 分类号 R457.11 [医药卫生—治疗学] Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组α-半乳糖苷酶酶解大豆低聚糖研究被引量：3: 2; 作者王璇琳李素波高红伟田曙光宫锋章扬培; 机构军事医学科学院野战输血研究所; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期222-226,共5页; 文摘本研究应用本实验室基因重组咖啡豆α-半乳糖苷酶对棉籽糖和水苏糖进行了酶解,应用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)法检测了酶解前后大豆低聚糖的变化情况,结合大豆制品传统加工工艺,提出了酶的添加方式和工艺。; 关键词大豆低聚糖肠胃胀气基因重组α-半乳糖苷酶; Keywords soy oligosaccharides flatulence recombinant α-galactosidase; 分类号 Q814 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新型基因重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性研究被引量：2: 3; 作者高红伟李素波艾雪李妙王颖丽让文亮季守平宫锋; 机构军事医学科学院野战输血研究所; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期201-204,共4页; 文摘观察脆弱类杆菌来源的新型重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株的遗传稳定性。在有选择压力(Kan+)条件下,将重组α-半乳糖苷酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗性、平板传代及诱导过程中的质粒稳定性、限制酶切图谱、测序、表达量和酶活力检测。结果表明细菌形态、生长速度和抗生素抗性等与原始种子库无明显差异;LB固体培养基上传60代后质粒稳定性接近100%,但诱导过程中质粒易丢失。第20、40和60代提取质粒进行酶切检查,酶切图谱没有改变。DNA测序未见α-半乳糖苷酶基因变异。原代菌株及第20、40和60代菌株经诱导培养,其α-半乳糖苷酶表达水平、酶活力及菌体蛋白的SDS-PAGE图谱均无明显差异。; 关键词重组α-半乳糖苷酶遗传稳定性传代; Keywords Recombinant α-galactosidase Heredity stability Generations; 分类号 R392 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究被引量：4: 4; 作者刁文涛向凌云宁萌王雪妍马焕冯菲陈国参周伏忠; 机构河南省科学院生物研究所有限责任公司河南省微生物工程重点实验室; 出处《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第8期60-66,共7页; 基金河南省科学院2018重大科技突破专项（18ZP05001）河南省科学院基本科研业务费（18JK16011）河南省科学院助推科技成果转化专项（18ZT05017）; 文摘利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,成功异源表达了一株链球菌(Streptococcus)S1的α-半乳糖苷酶基因,重组α-半乳糖苷酶经镍柱纯化后,测定其酶学性质。重组α-半乳糖苷酶最适pH值为6.5,最适温度为50℃,在碱性环境中(pH 7.5~10.0)及在40℃以下温度条件下该酶较为稳定;酶催化动力学结果显示,该酶在最适条件下水解硝基苯-α-D-半乳糖苷(pNPG)的最大水解速率(Vmax)为508.38μmol/(min·mg),米氏常数(Km)值为1.2 mmol/L;通过薄层层析(TLC)法检测到该重组α-半乳糖苷酶可以高效地水解天然底物蜜二糖、棉籽糖和水苏糖中的α-半乳糖苷键。; 关键词链球菌大肠杆菌异源表达重组α-半乳糖苷酶酶学性质; Keywords Streptococcus Escherichia coli heterologous expression recombinantα-galactosidase enzymatic property; 分类号 Q556.2 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定被引量：2: 5; 作者邓木兰周泓宇郑可欣李昭阳郭婉怡王艳苹梁志成李芳红穆云萍赵子建; 机构广东工业大学生物医药学院; 出处《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期774-781,共8页; 基金国家重点研发计划项目(No 2018YFA0800603) 广东省重点领域研发计划项目(No 2019B020201015) +1 种基金国家自然科学基金青年项目(No 82100064)。; 文摘目的运用无血清可高密度悬浮培养的中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO-S)表达体系,分泌表达并纯化重组人α-半乳糖苷酶(recombinant human α-galactosidase A, rhα-Gal A),验证其对法布雷病贮积底物神经酰胺三己糖苷(globotriaosylceramide, Gb3 or GL3)的清除效果。方法构建人α-半乳糖苷酶基因gla融合6×His标签的表达载体pcDNA4-GLA,将其转染至悬浮CHO-S细胞中,表达纯化并检测rhα-Gal A糖基化形式、表达量及酶活性;通过与人皮肤成纤维细胞共孵育,观察rhα-Gal A是否能被摄取到胞内并有效清除Gb3。结果研究结果显示,rhα-Gal A成功在CHO-S细胞中表达,表达量最高可达(100±20.6) mg·L^(-1),且rhα-Gal A被糖基化修饰,酶活与商品酶Fabrazyme酶活相近,为(59±9.1) kU·g^(-1);此外,rhα-Gal A能被有效摄取到人成纤维细胞胞内并靶向溶酶体进而有效清除Gb3。结论利用瞬时转染技术在悬浮CHO-S细胞中成功表达并纯化出rhα-Gal A,具有良好的生物学活性且可有效清除Gb3,为我国法布雷病的酶替代疗法提供新的选择。; 关键词重组人α-半乳糖苷酶法布雷病酶替代疗法悬浮CHO-S细胞溶酶体贮积症基因工程; Keywords recombinant humanα-galactosidase A Fabry disease enzyme replacement therapy suspension CHO-S lysosomal storage disease genetic engineering; 分类号 R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R345.62 [医药卫生—基础医学] R394.2 [医药卫生—医学遗传学] R589 [医药卫生—内分泌] R977.3 [医药卫生—药品]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究	高红伟李素波鲍国强檀英霞王玲燕金泗虎王颖丽季守平宫锋	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2011	12	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组α-半乳糖苷酶酶解大豆低聚糖研究	王璇琳李素波高红伟田曙光宫锋章扬培	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2008	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	新型基因重组α-半乳糖苷酶工程菌菌种稳定性研究	高红伟李素波艾雪李妙王颖丽让文亮季守平宫锋	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究	刁文涛向凌云宁萌王雪妍马焕冯菲陈国参周伏忠	《中国酿造》 CAS 北大核心	2019	4	在线阅读下载PDF 职称材料
5	重组人α-半乳糖苷酶在悬浮CHO-S细胞中的表达、纯化及功能活性鉴定	邓木兰周泓宇郑可欣李昭阳郭婉怡王艳苹梁志成李芳红穆云萍赵子建	《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心	2023	2	在线阅读下载PDF 职称材料