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BPI_(23)-Fcγ1重组蛋白原核表达载体的构建、表达和生物学活性的测定 被引量：3
1
作者 安云庆 柯岩 杨贵贞 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期511-516,共6页
目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，转化大肠杆菌 DH5α，诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术，从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc（ Fcγ 1）的基因；通过连接反应构建... 目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，转化大肠杆菌 DH5α，诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术，从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc（ Fcγ 1）的基因；通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体；转化感受态大肠杆菌 DH5α，通过温控诱导表达 BPI23- Fcγ 1重组蛋白；测定 BPI23- Fcγ 1重组蛋白的抗菌及免疫学活性。结果 (1)RT- PCR获得预期的扩增产物— BPI600bp和 Fcγ 1 700bp基因片段； (2)成功构建 pUC18- BPI180、 pUC18- BPI420和 pUC18- Fcγ 1700重组克隆载体， DNA测序结果与文献报道一致； (3)成功构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，酶切图谱分析与预期结果相符； (4)BPI23- Fcγ 1重组蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的 20％； (5)复性后重组蛋白具有抗菌活性和激活补体、介导调理吞噬等作用。结论 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体构建成功，并在大肠杆菌中得到表达，获得具有 BPI和 IgGFc双重生物学活性的重组抗菌蛋白。 展开更多
关键词 pBV-BPI600-Fcγ1700 重线表达载体 RT-PCR
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