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用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体
被引量：
3
1
作者
管政
沈茜
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期1014-1017,共4页
目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片...
目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段，再将两片段混合，在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入引物进行目的片段指数扩增，将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES。结果：成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体。结论：优化后的重叠延伸PCR法（OE—PCR）克服了传统方法的诸多弊端，非常适合于构建中间缺失突变体，值得推广。
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关键词
重叠延伸pcr法
中间缺失突变体
MHCⅡ类分子反式激活因子
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职称材料
嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立
被引量：
2
2
作者
魏明敏
邱德文
+3 位作者
曾洪梅
黄建新
杨秀芬
袁京京
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期91-94,102,共5页
构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用...
构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用电激法将同源重组载体DNA转化到供体细菌,再利用二亲本结合转移方法将供体细菌中的载体转化到受体细菌CB6菌株。结果成功地扩增了Xna基因的左右同源臂及卡那抗性基因的全长融合片段、构建了Xna基因的同源重组载体,并建立了嗜线虫致病杆菌北京变种的遗传转化体系。
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关键词
嗜线虫致病杆菌
同源重组载体
重叠
延伸
引物
pcr
法
结合转移
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职称材料
题名
用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体
被引量：
3
1
作者
管政
沈茜
机构
第二军医大学长海医院实验诊断科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第9期1014-1017,共4页
基金
上海市科委联合利华研究与发展基金(200305)~~
文摘
目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段，再将两片段混合，在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入引物进行目的片段指数扩增，将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES。结果：成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体。结论：优化后的重叠延伸PCR法（OE—PCR）克服了传统方法的诸多弊端，非常适合于构建中间缺失突变体，值得推广。
关键词
重叠延伸pcr法
中间缺失突变体
MHCⅡ类分子反式激活因子
Keywords
overlap extension by polymerase chain reaction
middle fragment deletion mutant
MHC class Ⅱ molecule transaetivator
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立
被引量：
2
2
作者
魏明敏
邱德文
曾洪梅
黄建新
杨秀芬
袁京京
机构
西北大学生命科学学院
中国农业科学院植物保护研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期91-94,102,共5页
基金
中国农业科学院植保所基本科研业务费用专项资金资助项目
文摘
构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用电激法将同源重组载体DNA转化到供体细菌,再利用二亲本结合转移方法将供体细菌中的载体转化到受体细菌CB6菌株。结果成功地扩增了Xna基因的左右同源臂及卡那抗性基因的全长融合片段、构建了Xna基因的同源重组载体,并建立了嗜线虫致病杆菌北京变种的遗传转化体系。
关键词
嗜线虫致病杆菌
同源重组载体
重叠
延伸
引物
pcr
法
结合转移
Keywords
Xenorhabdus nematophila Homologous recombinant vector Overlap extension
pcr
Conjugation
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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出处
发文年
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1
用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体
管政
沈茜
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
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职称材料
2
嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立
魏明敏
邱德文
曾洪梅
黄建新
杨秀芬
袁京京
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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