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利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究被引量：12: 1; 作者雒丽娜王盛王玉炯《安徽农业科学》 CAS 2012年第10期5779-5781,共3页; [目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[... 展开更多; 关键词重叠延伸pcr技术定点突变 rPA基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

重叠延伸PCR技术及其在生物学中的应用被引量：9: 2; 作者李守宇《生物学教学》 2013年第4期65-66,共2页; 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的DNA基因片段的方法。该技术高效、快捷、经济,在基因功能研究方面显示良好的应用前景。; 关键词重叠延伸pcr技术片段基因合成融合基因构建基因定点诱变; 在线阅读下载PDF 职称材料

利用改良SOE-PCR技术定点突变TuMVC4-VPg基因被引量：3: 3; 作者李国亮钱伟 +7 位作者张淑江李菲章时蕃张慧谢露露武剑王晓武孙日飞《中国蔬菜》北大核心 2017年第10期39-44,共6页; 芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)是白菜类蔬菜生产上的重要病害,其中Tu MV VPg基因在Tu MV侵染白菜类蔬菜的过程中起着至关重要的作用,且不同Tu MV株系的致病性不同。本试验采用改良的重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术,以Tu MV C4-VP... 展开更多; 关键词白菜类蔬菜芜菁花叶病毒 VPg基因重叠延伸pcr技术单点突变; 在线阅读下载PDF 职称材料

吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达被引量：2: 4; 作者王蓓李桂欢 +4 位作者鲁义善汤菊芬黄郁葱吴灶和简纪常《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期137-142,共6页; 利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein,Sip)基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因通过Linker序列融合,构... 展开更多; 关键词无乳链球菌 Sip-GAPDH融合基因重叠延伸pcr技术原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究被引量：3: 5; 作者谭虎杨天德 +5 位作者粟永萍艾国平黄岚陶军刘晓宏楼淑芬《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第17期1650-1653,共4页; 目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-... 展开更多; 关键词胰高血糖素样肽-2 基因克隆 pcr重叠延伸技术肠上皮细胞增殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究被引量：12: 1; 作者雒丽娜王盛王玉炯; 机构宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 2012年第10期5779-5781,共3页; 基金国家自然科学基金资助项目(31160032); 文摘 [目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。; 关键词重叠延伸pcr技术定点突变 rPA基因; Keywords Overlap extension pcr Site-directed mutagenesis Human Tissue Plasminogen Activator（Reteplase）; 分类号 S126 [农业科学—农业基础科学] Q936 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重叠延伸PCR技术及其在生物学中的应用被引量：9: 2; 作者李守宇; 机构江苏省宜兴第一中学; 出处《生物学教学》 2013年第4期65-66,共2页; 文摘重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的DNA基因片段的方法。该技术高效、快捷、经济,在基因功能研究方面显示良好的应用前景。; 关键词重叠延伸pcr技术片段基因合成融合基因构建基因定点诱变; 分类号 Q503 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用改良SOE-PCR技术定点突变TuMVC4-VPg基因被引量：3: 3; 作者李国亮钱伟张淑江李菲章时蕃张慧谢露露武剑王晓武孙日飞; 机构中国农业科学院蔬菜花卉研究所; 出处《中国蔬菜》北大核心 2017年第10期39-44,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31372069) "十二五"国家科技支撑计划项目(2013BAD01B04-03) 农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目; 文摘芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)是白菜类蔬菜生产上的重要病害,其中Tu MV VPg基因在Tu MV侵染白菜类蔬菜的过程中起着至关重要的作用,且不同Tu MV株系的致病性不同。本试验采用改良的重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术,以Tu MV C4-VPg基因序列为模板,定点突变Tu MV C4-VPg与Tu MV CDN1-VPg基因间5个差异核苷酸位点(决定5个氨基酸差异)。结果表明:通过SOE-PCR技术获得了5个Tu MV C4-VPg基因的单点突变体,即Tu MV C4-VPg-Ⅰ、Tu MV C4-VPg-Ⅱ、Tu MV C4-VPg-Ⅲ、Tu MV C4-VPg-Ⅳ和Tu MV C4-VPg-Ⅴ。; 关键词白菜类蔬菜芜菁花叶病毒 VPg基因重叠延伸pcr技术单点突变; Keywords Brassica rapa L. ssp. pekinensis Turnip mosaic virus(TuMV) VPg gene Splicing by overlap extension pcr(SOE-pcr) Single point mutant; 分类号 S436.34 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达被引量：2: 4; 作者王蓓李桂欢鲁义善汤菊芬黄郁葱吴灶和简纪常; 机构广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室仲恺农业工程学院; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期137-142,共6页; 基金国家自然科学基金青年基金项目(31302226) 广东省科技计划农业攻关项目(2012B020308009) 广东省2012年鱼病防治专项(2130108); 文摘利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein,Sip)基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因通过Linker序列融合,构建成为Sip-GAPDH融合基因。将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果表明,重组质粒pET-32a-Sip-GAPDH在大肠杆菌BL21(DE3)中表达后所获得的融合蛋白Sip-GAPDH分子量为102.01 kD,表达最佳条件为37℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导5 h。Western blot鉴定结果表明融合基因得到了成功表达。; 关键词无乳链球菌 Sip-GAPDH融合基因重叠延伸pcr技术原核表达; Keywords Streptococcus agalactiae Sip-GAPDH fusion gene SOEing pcr Prokaryotic expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究被引量：3: 5; 作者谭虎杨天德粟永萍艾国平黄岚陶军刘晓宏楼淑芬; 机构第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室第三军医大学新桥医院麻醉科第三军医大学新桥医院全军心血管病研究所; 出处《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第17期1650-1653,共4页; 基金国家自然科学基金重点项目(30230360) 国家自然科学基金面上项目(30470527) +1 种基金创伤烧伤与复合伤国家重点实验室开放课题(2003)~~; 文摘目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响。结果克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组。结论PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建。构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用。; 关键词胰高血糖素样肽-2 基因克隆 pcr重叠延伸技术肠上皮细胞增殖; Keywords glucagon-like peptid-2 gene clone splicing proliferation by overlap extension intestine epithelium cell; 分类号 R329.25 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学] R394-33 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究	雒丽娜王盛王玉炯	《安徽农业科学》 CAS	2012	12	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重叠延伸PCR技术及其在生物学中的应用	李守宇	《生物学教学》	2013	9	在线阅读下载PDF 职称材料
3	利用改良SOE-PCR技术定点突变TuMVC4-VPg基因	李国亮钱伟张淑江李菲章时蕃张慧谢露露武剑王晓武孙日飞	《中国蔬菜》北大核心	2017	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达	王蓓李桂欢鲁义善汤菊芬黄郁葱吴灶和简纪常	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2014	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究	谭虎杨天德粟永萍艾国平黄岚陶军刘晓宏楼淑芬	《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	3	在线阅读下载PDF 职称材料