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重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区: 1; 作者郭豫杰鲁维飞 +1 位作者韩立强杨国宇《河北渔业》 2006年第10期13-15,48,共4页; 蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠... 展开更多; 关键词中华绒螯蟹基因组DNA 蜕皮抑制激素基因1 重叠延伸拼接法; 在线阅读下载PDF 职称材料

以PCR为基础的定点诱变方法研究进展被引量：3: 2; 作者黃春晓段学军《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第12期5-8,共4页; 以PCR为基础的定点诱变技术是近年来得到极大发展的分子生物学方法,不仅用于基因和蛋白质的结构与功能的基础研究,还用于定点改造目的基因。综述了以PCR为基础的定点诱变的各种方法,并介绍了国内外最新的研究进展,重点介绍并分析了单管... 展开更多; 关键词 PCR 定点诱变重叠延伸法大引物法多位点环状诱变 TAMS技术; 在线阅读下载PDF 职称材料

用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体被引量：3: 3; 作者管政沈茜《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1014-1017,共4页; 目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片... 展开更多; 关键词重叠延伸PCR法中间缺失突变体 MHCⅡ类分子反式激活因子; 在线阅读下载PDF 职称材料

人角质细胞生长因子的植物表达载体构建被引量：3: 4; 作者苏勇波邵寒娟 +2 位作者沈明山王鸣刚陈亮《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期25-28,共4页; 人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子．以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3；合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1．应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaM... 展开更多; 关键词角质细胞生长因子植物表达载体重叠延伸法; 在线阅读下载PDF 职称材料

人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析: 5; 作者王宝利戴芳 +4 位作者梁晖张瑞吴亚锋郭刚张镜宇《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-34,共5页; 骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白... 展开更多; 关键词重叠延伸法骨保护素表达活性分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

蛋白质体外定向进化策略研究进展被引量：4: 6; 作者付畅林海龙 +1 位作者李海莹王得江《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期36-40,共5页; 定向进化已广泛应用于蛋白质的分子改造,是改善蛋白质特性的最有效策略之一。为了获得更高的突变效率,构建含有更多突变体的文库,不断地发明创新各种高效的蛋白质体外定向进化方法。对近年来出现的几种定向进化方法三核苷酸突变(TriNex... 展开更多; 关键词定向进化三核苷酸突变序列饱和突变随机链交换突变法重叠延伸蛋白域文库法迭代饱和突变法; 在线阅读下载PDF 职称材料

嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立被引量：2: 7; 作者魏明敏邱德文 +3 位作者曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期91-94,102,共5页; 构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用... 展开更多; 关键词嗜线虫致病杆菌同源重组载体重叠延伸引物PCR法结合转移; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区: 1; 作者郭豫杰鲁维飞韩立强杨国宇; 机构河南农业大学牧医工程学院; 出处《河北渔业》 2006年第10期13-15,48,共4页; 文摘蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠延伸拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)将中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1Eriocheir sinensismolt-inhibiting hormone-1(Ers-MIH1)成熟肽基因的编码区连接起来,克隆到pMD18-T载体中,随机挑取3个阳性克隆测序,测序结果与已知的Ers-MIH1基因编码区的序列相一致。从基因组DNA中克隆该基因的方法有效地解决了取材不便给研究中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因所带来的限制等问题。; 关键词中华绒螯蟹基因组DNA 蜕皮抑制激素基因1 重叠延伸拼接法; Keywords Eriocheir japonica sinensis genomic DNA molt- inhibiting hormone- 1 gene splicing by overlap extension （SOE）; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名以PCR为基础的定点诱变方法研究进展被引量：3: 2; 作者黃春晓段学军; 机构中原工学院能源与环境学院; 出处《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第12期5-8,共4页; 文摘以PCR为基础的定点诱变技术是近年来得到极大发展的分子生物学方法,不仅用于基因和蛋白质的结构与功能的基础研究,还用于定点改造目的基因。综述了以PCR为基础的定点诱变的各种方法,并介绍了国内外最新的研究进展,重点介绍并分析了单管大引物法、一步重叠延伸PCR、多位点环状诱变PCR及TAMS定点诱变等新方法,比较了不同方法的优缺点,分析了存在的问题并提出解决对策。; 关键词 PCR 定点诱变重叠延伸法大引物法多位点环状诱变 TAMS技术; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体被引量：3: 3; 作者管政沈茜; 机构第二军医大学长海医院实验诊断科; 出处《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1014-1017,共4页; 基金上海市科委联合利华研究与发展基金(200305)~~; 文摘目的：以构建缺失第109～226位氨基酸密码子的MHCII类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ molecule transactivator，CIITA）突变体为例探索一种简便、稳定的构建中间缺失突变体的方法。方法：首先按照传统重叠延伸PCR方法的原理扩增缺失片段两端的基因片段，再将两片段混合，在不加入外围引物的情况下进行8次PCR循环以有效完成重叠延伸，然后再加入引物进行目的片段指数扩增，将扩增产物直接克隆至真核表达载体pIRES。结果：成功地构建出缺失第109～226位氨基酸密码子的CⅡTA突变体。结论：优化后的重叠延伸PCR法（OE—PCR）克服了传统方法的诸多弊端，非常适合于构建中间缺失突变体，值得推广。; 关键词重叠延伸PCR法中间缺失突变体 MHCⅡ类分子反式激活因子; Keywords overlap extension by polymerase chain reaction middle fragment deletion mutant MHC class Ⅱ molecule transaetivator; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人角质细胞生长因子的植物表达载体构建被引量：3: 4; 作者苏勇波邵寒娟沈明山王鸣刚陈亮; 机构厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室; 出处《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期25-28,共4页; 基金福建省自然科学基金(No.B0210002)。; 文摘人角质细胞生长因子(KGF)有3个外显子,2个内含子．以人 DNA 为模板,PCR 扩增获得角质细胞生长因子外显子2和外显子3；合成单链的寡核苷酸,经链延伸和 PCR 扩增从而获得外显子1．应用延伸 PCR 将3个外显子连接得 KGF 编码序列,并连接 CaMV35S 启动子和 NOS 终止子后克隆至植物表达质粒 pBI 1301．; 关键词角质细胞生长因子植物表达载体重叠延伸法; Keywords kerationcyte growth factor plant expressing vector splicing by overlap extension; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析: 5; 作者王宝利戴芳梁晖张瑞吴亚锋郭刚张镜宇; 机构天津医科大学内分泌研究所卫生部激素与发育重点实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期30-34,共5页; 基金国家自然科学基金项目 (No.3 0 3 0 0 171) 天津市自然科学基金资助项目 (No .0 43 60 6811)~~; 文摘骨保护素 (OPG)成熟肽N端D1～D4结构域仅由 2个外显子编码 .以人基因组DNA作为模板 ,采用重叠延伸PCR得到N端D1～D4域编码序列 ,并在其上游引入 2×His密码子序列 ,然后克隆入载体pQE 30进行表达 ,SDS PAGE表明 8×His融合蛋白主要以包涵体形式存在 ,可被抗OPG抗体识别 .变性条件下通过Ni NTA金属螯合亲和层析对表达产物进行纯化后再经梯度透析进行复性 ,采用破骨细胞样细胞 (osteoclast likecell ,OLC)诱导分化实验来检测重组蛋白的生物活性 ,证实单核巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和破骨细胞分化因子 (ODF)可协同促进多核OLC的生成 ,但加入重组OPG片段后 ,OLC生成显著减少 .; 关键词重叠延伸法骨保护素表达活性分析; Keywords overlapping extension,osteoprotegerin,expression,bioactivity analysis; 分类号 Q589 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名蛋白质体外定向进化策略研究进展被引量：4: 6; 作者付畅林海龙李海莹王得江; 机构哈尔滨师范大学生命科学与技术学院、分子细胞遗传与遗传育种黑龙江省重点实验室中国长江三峡集团中国水利电力对外公司中水东北勘测设计研究有限责任公司; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期36-40,共5页; 基金国家自然科学青年基金项目(51108146) 教育部高等学校博士学科点专项科研基金联合资助课题(20102329120002); 文摘定向进化已广泛应用于蛋白质的分子改造,是改善蛋白质特性的最有效策略之一。为了获得更高的突变效率,构建含有更多突变体的文库,不断地发明创新各种高效的蛋白质体外定向进化方法。对近年来出现的几种定向进化方法三核苷酸突变(TriNex)、序列饱和突变(SeSaM)、随机链交换突变法(RAISE)、重叠延伸蛋白域文库法(PDLGO)和迭代饱和突变法(ISM)的原理、特点及应用进行综述。; 关键词定向进化三核苷酸突变序列饱和突变随机链交换突变法重叠延伸蛋白域文库法迭代饱和突变法; Keywords Directed evolution TriNex SeSaM RAISE PDLGO ISM; 分类号 Q51 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立被引量：2: 7; 作者魏明敏邱德文曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京; 机构西北大学生命科学学院中国农业科学院植物保护研究所; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期91-94,102,共5页; 基金中国农业科学院植保所基本科研业务费用专项资金资助项目; 文摘构建嗜线虫致病杆菌Xna基因的同源重组载体和建立该细菌的遗传转化体系。扩增嗜线虫致病杆菌XNA基因的左右同源片段及质粒PEASY-T1上的卡那抗性基因Km;利用重叠延伸引物PCR法将这3个片段连接起来,然后将其克隆至自杀性载体PJQ200。采用电激法将同源重组载体DNA转化到供体细菌,再利用二亲本结合转移方法将供体细菌中的载体转化到受体细菌CB6菌株。结果成功地扩增了Xna基因的左右同源臂及卡那抗性基因的全长融合片段、构建了Xna基因的同源重组载体,并建立了嗜线虫致病杆菌北京变种的遗传转化体系。; 关键词嗜线虫致病杆菌同源重组载体重叠延伸引物PCR法结合转移; Keywords Xenorhabdus nematophila Homologous recombinant vector Overlap extension PCR Conjugation; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区	郭豫杰鲁维飞韩立强杨国宇	《河北渔业》	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	以PCR为基础的定点诱变方法研究进展	黃春晓段学军	《河南农业科学》 CSCD 北大核心	2006	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	用优化的OE-PCR法构建CⅡTA中间缺失突变体	管政沈茜	《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	人角质细胞生长因子的植物表达载体构建	苏勇波邵寒娟沈明山王鸣刚陈亮	《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2006	3	在线阅读下载PDF 职称材料
5	人骨保护素N端片段在大肠杆菌中的表达及其活性分析	王宝利戴芳梁晖张瑞吴亚锋郭刚张镜宇	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2005	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	蛋白质体外定向进化策略研究进展	付畅林海龙李海莹王得江	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2012	4	在线阅读下载PDF 职称材料
7	嗜线虫致病杆菌Xna基因同源重组载体的构建及遗传转化体系的建立	魏明敏邱德文曾洪梅黄建新杨秀芬袁京京	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料