重叠区扩增法合成抗菌肽B基因 被引量：9

1

作者 桑春果 张开春 张军科 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第1期65-67,共3页

人工设计并合成了抗菌肽 B基因的 4个寡聚核苷酸片段 ,通过重叠区扩增法 ,扩增出了相当于抗菌肽基因全长的寡聚核苷酸片段。经克隆测序 ,证明成功地实现了抗菌肽基因的人工合成、拼接和克隆。

关键词 重叠区扩增法 抗菌肽 基因合成 基因克隆

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改良重叠区扩增法构建Rac1相关质粒 被引量：2

2

作者 段桂华 沈姗姗 诸葛宇征 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期177-182,共6页

采用改良重叠区扩增法实现Rac1基因定点突变,构建人Rac1基因相关真核表达质粒,观察EGFP-Rac1融合蛋白在人正常肝细胞LO2中的表达。利用RT-PCR的方法得到Rac1基因,使用改良重叠区扩增法实现Rac1基因的定点突变,获得Rac1突变基因。将Rac1... 采用改良重叠区扩增法实现Rac1基因定点突变,构建人Rac1基因相关真核表达质粒,观察EGFP-Rac1融合蛋白在人正常肝细胞LO2中的表达。利用RT-PCR的方法得到Rac1基因,使用改良重叠区扩增法实现Rac1基因的定点突变,获得Rac1突变基因。将Rac1基因及Rac1突变基因通过限制性酶切技术及DNA连接技术插入真核表达载体pEGFP-C1中,获得重组质粒pEGFP-C1-Rac1,pEGFP-C1-Rac1V12和pEGFP-C1-Rac1N17。将上述质粒瞬时转染入LO2细胞中,采用荧光技术及Westernblotting检测目的基因的表达。结果显示,限制性酶切及基因测序证实质粒构建正确,转染LO2细胞后,融合蛋白EGFP-Rac1在细胞中高效表达。成功构建真核表达质粒,在LO2细胞中,该质粒能成功表达融合蛋白EGFP-Rac1。 展开更多

关键词 RAC1 重叠区扩增法 基因定点突变 融合蛋白

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重叠区扩增基因拼接法在构建膜锚定金黄色葡萄球菌肠毒素A融合基因上的应用 被引量：4

3

作者 易平勇 余海 +2 位作者 马文学 孙文均 姜槐 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第5期412-414,共3页

目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼... 目的 :将超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)基因与人胎盘碱性磷酸酶 (h PL AP- 1) C末端信号肽序列进行拼接 ,形成融合基因。方法 :利用重叠区扩增基因拼接法 ,分别扩增 h PLAP- 1C末端信号肽序列和 SEA基因序列。然后 ,将二段基因拼接并与 p GEM- T克隆载体连接 ,酶切和测序鉴定。结果 :成功扩增出 h PLAP- 1C末端信号肽序列 131bp和 SEA基因序列 796 bp;经测序证实 ,二段基因序列成功拼接 (90 1bp)。结论 :重叠区扩增基因拼接法能将 SEA基因与 h PL AP- 1C末端信号肽序列拼接 ,形成融合基因。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素A 碱性磷酸酶 重叠区扩增基因拼接法

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SOEing法构建EGFP真核表达载体及其在杜氏盐藻中的表达 被引量：1

4

作者 李杰 闫红霞 +3 位作者 曲东京 刘红涛 鲁照明 薛乐勋 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期546-551,共6页

通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5′-上游序列(Pnr)and 3′-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻。利用改进的SOEing法,... 通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOEing)构建含有杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶(NR)基因5′-上游序列(Pnr)and 3′-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体,并将其转化杜氏盐藻。利用改进的SOEing法,将杜氏盐藻NR基因Pnr与报告基因EGFP cDNA融合,并与pEGM-7zf克隆载体连接,顺序将盐藻NR基因Tnr序列与融合片段相连,构建含Pnr-EGFP-Tnr表达盒的盐藻真核表达载体p7NET。电击法转化杜氏盐藻,在盐藻转化株中观察到了EGFP的瞬时表达。此研究为转基因杜氏盐藻研究和成功建立杜氏盐藻生物反应器奠定了实验基础。 展开更多

关键词 杜氏盐藻 重叠区扩增基因拼接法(SOEing) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 真核表达载体

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C型乙型肝炎病毒基因SOEing法引入228位点突变

5

作者 徐晓雪 房凯 +3 位作者 钟连生 潘忠诚 吴土焕 赵雨杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期736-738,共3页

目的为获取乙型肝炎病毒(HBV)基因分型芯片病毒靶序列,对C型HBV第228位碱基进行点突变。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对分析,显示基因型A,C,D,G在228位上的碱基为G,而基因型B,E,F,H为A,所以检测该位点的碱基类型可以实现HBV... 目的为获取乙型肝炎病毒(HBV)基因分型芯片病毒靶序列,对C型HBV第228位碱基进行点突变。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对分析,显示基因型A,C,D,G在228位上的碱基为G,而基因型B,E,F,H为A,所以检测该位点的碱基类型可以实现HBV基因型的初步分型。结果将C型乙肝病毒第228位上的单位碱基由G突变为A,经测序后证明突变成功。结论重叠区扩增基因拼接法(SOEing)是一种简便引入点突变的方法,可以应用此法制备HBV基因分型芯片检测基因片段序列。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 基因分型 重叠区扩增基因拼接法

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膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达 被引量：6

6

作者 颜宏利 孙树汉 +1 位作者 陈蕊雯 杨湘越 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期378-380,共3页

目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物... 目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。 展开更多

关键词 膜联蛋白32 低相对分子质量单链尿激酶 基因拼接 基因表达 重叠区扩增法 大肠杆菌

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鹅FSH全基因的合成

7

作者 李鹏 陈红 武淑琴 《中国畜禽种业》 2013年第6期120-121,共2页

为了合成鹅的FSH基因,本实验通过重叠区扩增法(PCR-baseda ccurate synthesis,PAS)人工合成鹅的FSH基因。根据GenBank中鹅FSH-α和β基因序列,分别设计并合成12条引物,人工合成鹅FSH基因并构建其克隆载体。经过鉴定和测序结果证实PAS合... 为了合成鹅的FSH基因,本实验通过重叠区扩增法(PCR-baseda ccurate synthesis,PAS)人工合成鹅的FSH基因。根据GenBank中鹅FSH-α和β基因序列,分别设计并合成12条引物,人工合成鹅FSH基因并构建其克隆载体。经过鉴定和测序结果证实PAS合成序列为FSH的基因序列。该基因的合成为后续研究FSH基因对鹅产蛋性能的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅 FSH 基因序列 克隆载体 基因合成 鉴定测序 重叠区扩增法

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抗菌肽天蚕素B基因及其串联体在毕赤酵母中的表达 被引量：20

8

作者 王秀青 张素芳 +2 位作者 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期120-123,共4页

通过重叠区扩增基因拼接法(SOE)合成抗菌肽天蚕素B基因,并在其N端引入Kex2酶切位点。亚克隆天蚕素B并将3个亚克隆串联在一起,每个单体前都加上Kex2酶切位点,将天蚕素B以及串联体克隆至表达载体pPICZαA上,用SacⅠ酶切使之线性化,采用电... 通过重叠区扩增基因拼接法(SOE)合成抗菌肽天蚕素B基因,并在其N端引入Kex2酶切位点。亚克隆天蚕素B并将3个亚克隆串联在一起,每个单体前都加上Kex2酶切位点,将天蚕素B以及串联体克隆至表达载体pPICZαA上,用SacⅠ酶切使之线性化,采用电击法转化毕赤酵母SMD1168,转化子用小瓶发酵。经Tricine-SDS-PAGE检测,在α信号因子的引导下,表达产物可以分泌到培养基中,且具有明显抑菌活性。 展开更多

关键词 天蚕素B 抗菌肽 毕赤酵母 表达 抑菌活性 重叠区扩增基因拼接法(SOE)

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乙型肝炎病毒基因生物信息学分析及特异片段的制备 被引量：2

9

作者 徐晓雪 房凯 +4 位作者 钟连声 潘忠诚 李超 胥威 赵雨杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期583-585,共3页

目的制备HBV基因分型芯片模板。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对,选取6个碱基位点作为分型位点,应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing法)对C型HBV片段进行点突变。结果在所选位点上成功引入点突变。结论SOEing法是一种简便引入点... 目的制备HBV基因分型芯片模板。方法通过不同基因型HBV全基因组的序列比对,选取6个碱基位点作为分型位点,应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing法)对C型HBV片段进行点突变。结果在所选位点上成功引入点突变。结论SOEing法是一种简便引入点突变的方法,可以应用此法制备HBV基因分型检测基因所需的模板DNA。 展开更多

关键词 重叠区扩增基因拼接法 乙型肝炎病毒 基因分型

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抗菌肽Japonicin Ⅱ基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达 被引量：3

10

作者 尹佳 詹冬玲 +1 位作者 崔敬爱 陈晓平 《中国酿造》 CAS 北大核心 2009年第12期23-25,共3页

采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-P... 采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,构建出的重组质粒pPICZαA-Jap,经电击法转化至GS115宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,用Tricine-SDS-PAGE确定了产物的正确性;利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物具有抗菌活性。 展开更多

关键词 抗菌肽Japonicin Ⅱ 重叠区基因扩增法 克隆 表达 毕赤酵母菌

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β-甘露聚糖酶基因高效表达体系的构建 被引量：2

11

作者 李斌 刘正初 +1 位作者 王溪森 石岩 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第8期1807-1810,共4页

为构建β-甘露聚糖酶基因高效表达体系,采用重叠区扩增基因拼接法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC S-层蛋白启动子和欧文氏杆菌(Erwinia carotovora)CXJZ95-198 β-甘露聚糖酶基因完整开放阅读框定向连接,得到基因拼接体sl... 为构建β-甘露聚糖酶基因高效表达体系,采用重叠区扩增基因拼接法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CTC S-层蛋白启动子和欧文氏杆菌(Erwinia carotovora)CXJZ95-198 β-甘露聚糖酶基因完整开放阅读框定向连接,得到基因拼接体slp-man。将slp-man克隆到高效表达载体pET-28a+上,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中。结果表明,β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建成功,重组菌发酵11h酶活达到671.3U·mL-1,是欧文氏杆菌CXJZ95-198的1.48倍。 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶基因 欧文氏杆菌 重叠区扩增基因拼接法

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