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人釉原蛋白亮氨酸富集片段的冷冻电子显微镜观察及其引导矿化性能研究 被引量:2
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作者 田鲲 冯小云 +2 位作者 杜芹 廖楚航 任小华 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期63-67,共5页
目的采用冷冻电子显微镜观察体外重组的人釉原蛋白富亮氨酸片段(LRAP),分析其细微结构和聚集状态,结合矿化实验评估LRAP体外引导羟磷灰石生长的定向成核能力。方法人工合成LRAP基因,与原核表达载体p Cold-SUMO行质粒构建,于宿主菌大肠杆... 目的采用冷冻电子显微镜观察体外重组的人釉原蛋白富亮氨酸片段(LRAP),分析其细微结构和聚集状态,结合矿化实验评估LRAP体外引导羟磷灰石生长的定向成核能力。方法人工合成LRAP基因,与原核表达载体p Cold-SUMO行质粒构建,于宿主菌大肠杆菌BL21plys中诱导表达并纯化,在冷冻电子显微镜下观察LRAP在p H值从3.5到8.0的环境中聚合自组装的过程,并在人工唾液中通过透射电镜观察羟磷灰石晶体的生长规律。结果通过原核表达成功得到纯度90%以上的LRAP蛋白提取物,当p H值为8.0时,LRAP能聚集成多聚体和纳米小球等功能结构,在人工唾液中能诱导羟磷灰石晶体生长成熟。结论作为简化的釉原蛋白功能域,LRAP兼备了自组装为纳米小球和c轴诱导晶体矿化的特性,可作为运用釉基质蛋白多聚物行无细胞修复牙体硬组织缺损的备选材料之一。 展开更多
关键词 冷冻电子显微镜 蛋白 釉原蛋白亮氨酸富集片段 羟磷灰石
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人釉原蛋白全长及其功能片段的体外自组装和矿化行为的研究 被引量:1
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作者 钟秀 赖婷婷 +1 位作者 陈亮 田鲲 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期419-424,共6页
目的探讨人釉原蛋白(AM)全长及其N端酪氨酸富集段(TRAP)、C端亮氨酸富集段(LRAP)体外自组装的动态过程及其在羟磷灰石(HA)晶体形成中的作用。方法体外重组、纯化人AM全长及其功能片段TRAP、LRAP,在三氨基甲烷(Tris-HCl)中配制成100μg&#... 目的探讨人釉原蛋白(AM)全长及其N端酪氨酸富集段(TRAP)、C端亮氨酸富集段(LRAP)体外自组装的动态过程及其在羟磷灰石(HA)晶体形成中的作用。方法体外重组、纯化人AM全长及其功能片段TRAP、LRAP,在三氨基甲烷(Tris-HCl)中配制成100μg·mL^(-1)、pH=8的蛋白溶液,室温孵育1~15 min,透射电镜(TEM)下观察比较AM全长、TARP和LRAP的自组装行为;在人工唾液中加入AM全长孵育3 d,扫描电镜(SEM)观察诱导形成的新生晶体形貌,继续加入TARP和LRAP孵育3 d后再次观察。结果pH为8时,人AM全长及TRAP自发启动组装,15 min后均可形成“纳米球”结构,其中TRAP形成的“纳米球”孤立存在,大小均匀,没有明显内部结构;而AM全长分级组装,形成“纳米球”后进一步各向延伸趋势,形成链状结构,随后聚集成网;LRAP的自组装行为不明显,蛋白多以单体形式存在,无“纳米球”生成,仅可见少量低聚物。AM全长诱导3 d后形成棒状HA晶体,加入TRAP和LRAP蛋白继续诱导3 d后晶体在c轴明显伸长,而a、b平面生长欠佳。结论人AM全长、TRAP和LRAP的自组装和矿化行为与体内HA晶体定向生长的机制契合,为它们在HA晶体生长、成熟过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 蛋白 富集 富集 自组装 体外矿化
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PELP1在胃癌中的致瘤作用 被引量:1
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作者 颜洪竹 孙燕玲 +8 位作者 吴喆 孙元鹏 刘于思 韦先明 马梓 刘尚勤 肖武汉 宁志丰 刘复兴 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期536-544,共9页
目的探讨谷氨酸-脯氨酸-亮氨酸富集蛋白1(proline-,glutamic acid-,and leucine-rich protein 1,PELP1)在胃癌中的生物学功能及临床意义。方法通过生物信息学方法分析PELP1在胃癌中的表达,并在胃癌细胞系和胃癌临床样本中予以验证,Kapla... 目的探讨谷氨酸-脯氨酸-亮氨酸富集蛋白1(proline-,glutamic acid-,and leucine-rich protein 1,PELP1)在胃癌中的生物学功能及临床意义。方法通过生物信息学方法分析PELP1在胃癌中的表达,并在胃癌细胞系和胃癌临床样本中予以验证,Kaplan-Meier生存分析探讨PELP1表达与胃癌患者生存预后的关系。以siRNA敲降胃癌细胞AGS中的PELP1表达,以CCK-8实验、平板克隆形成实验、EdU细胞增殖实验检测细胞增殖活性;流式细胞术测定细胞周期;细胞划痕实验、Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力。Western blot和qRT-PCR检测敲降PELP1表达的AGS细胞中Src-Erk通路信号分子表达情况。结果PELP1在胃癌组织中表达相对较高,生存分析显示PELP1高表达的患者生存期更短;敲降PELP1表达后的胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为均受到抑制;敲降PELP1表达的AGS细胞,其Src-Erk通路关键信号分子c-Src、PI3K和Erk的表达均降低。结论PELP1在胃癌的发生发展中起致瘤作用,可能是胃癌潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 -脯-富集蛋白1 癌基因 胃癌 Src-Erk通路
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