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一种自剪切内含肽重组酿酒酵母表达优化研究
1
作者
王晶晶
张旭
+1 位作者
刘建平
王洪海
《科学技术与工程》
北大核心
2015年第4期11-16,共6页
自剪切内含肽纯化系统在大肠杆菌中已经得到很好的应用。为了在真核生物中应用该系统,以酿酒酵母为宿主,p HR质粒为表达载体,构建微型内含肽ΔI-CM intein酿酒酵母表达系统。以猪免疫球蛋白Ig G的Fc domain为亲和标签,绿色荧光蛋白gfp...
自剪切内含肽纯化系统在大肠杆菌中已经得到很好的应用。为了在真核生物中应用该系统,以酿酒酵母为宿主,p HR质粒为表达载体,构建微型内含肽ΔI-CM intein酿酒酵母表达系统。以猪免疫球蛋白Ig G的Fc domain为亲和标签,绿色荧光蛋白gfp为报告蛋白,在酿酒酵母GPD强启动子作用下,表达出融合的Fc-intein-gfp蛋白。检测发现融合序列在起始密码子ATG前加入一段Kozak序列有利于gfp表达。在此基础上,将微型内含肽ΔI-CM intein序列替换成密码子优化的ΔI-CMintein-O序列,显著促进gfp蛋白的表达量,初步实现了ΔI-CM intein融合蛋白的高效表达。为新型自剪切内含肽酿酒酵母表达系统的建立和重组蛋白高效纯化的实现奠定了基础。
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关键词
微型内含肽
自剪切
酿酒酵母表达系统
KOZAK序列
密码子优化
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职称材料
家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究
被引量：
4
2
作者
于海彦
周志峰
+1 位作者
贾俊强
桂仲争
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期577-586,共10页
ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基...
ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基组成的分子质量为41.5 k D的蛋白质。将该基因克隆到p YES2.0载体,构建重组表达载体p YBm FAD3-like及重组酿酒酵母工程菌株YBm FAD3-like后进行诱导表达,收集菌体提取脂肪酸,经气相色谱检测表明异源表达的重组Bm FAD3-like能够将诱导表达体系中加入的外源底物亚油酸(LA)转化为α-亚麻酸(ALA)。半定量RT-PCR检测Bm FAD3-like基因mRNA几乎在家蚕5龄第3天幼虫的所有组织中都有转录,在5龄幼虫期、蛹期和蛾期的转录水平较高,并且其转录水平受低温(0℃)和真菌(球孢白僵菌Beauveria bassiana)侵染(6~36 h)诱导显著上调。对家蚕蛹体注射siRNA沉默目的基因12~72 h后,Bm FAD3-like mRNA转录水平显著下调。研究结果表明,Bm FAD3-like的表达产物能催化LA在ω3位脱氢生成ALA,并且该基因在蚕体受到低温诱导和真菌侵染等胁迫时显著上调表达,外源siRNA能够介导该基因的沉默,显著下调其转录水平。
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关键词
家蚕
ω3-脂肪酸脱氢酶
基因克隆
酿酒酵母表达系统
表达
谱
多不饱和脂肪酸合成
诱导
表达
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职称材料
题名
一种自剪切内含肽重组酿酒酵母表达优化研究
1
作者
王晶晶
张旭
刘建平
王洪海
机构
复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室
出处
《科学技术与工程》
北大核心
2015年第4期11-16,共6页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)(2007AA02Z107)资助
文摘
自剪切内含肽纯化系统在大肠杆菌中已经得到很好的应用。为了在真核生物中应用该系统,以酿酒酵母为宿主,p HR质粒为表达载体,构建微型内含肽ΔI-CM intein酿酒酵母表达系统。以猪免疫球蛋白Ig G的Fc domain为亲和标签,绿色荧光蛋白gfp为报告蛋白,在酿酒酵母GPD强启动子作用下,表达出融合的Fc-intein-gfp蛋白。检测发现融合序列在起始密码子ATG前加入一段Kozak序列有利于gfp表达。在此基础上,将微型内含肽ΔI-CM intein序列替换成密码子优化的ΔI-CMintein-O序列,显著促进gfp蛋白的表达量,初步实现了ΔI-CM intein融合蛋白的高效表达。为新型自剪切内含肽酿酒酵母表达系统的建立和重组蛋白高效纯化的实现奠定了基础。
关键词
微型内含肽
自剪切
酿酒酵母表达系统
KOZAK序列
密码子优化
Keywords
mini-intein self-cleaving Saccharomyces cerevisiae expression system Kozak sequence codon optimization
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究
被引量：
4
2
作者
于海彦
周志峰
贾俊强
桂仲争
机构
江苏科技大学生物技术学院
中国农业科学院蚕业研究所
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期577-586,共10页
基金
公益性行业(农业)科研专项(No.201403064)
文摘
ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基组成的分子质量为41.5 k D的蛋白质。将该基因克隆到p YES2.0载体,构建重组表达载体p YBm FAD3-like及重组酿酒酵母工程菌株YBm FAD3-like后进行诱导表达,收集菌体提取脂肪酸,经气相色谱检测表明异源表达的重组Bm FAD3-like能够将诱导表达体系中加入的外源底物亚油酸(LA)转化为α-亚麻酸(ALA)。半定量RT-PCR检测Bm FAD3-like基因mRNA几乎在家蚕5龄第3天幼虫的所有组织中都有转录,在5龄幼虫期、蛹期和蛾期的转录水平较高,并且其转录水平受低温(0℃)和真菌(球孢白僵菌Beauveria bassiana)侵染(6~36 h)诱导显著上调。对家蚕蛹体注射siRNA沉默目的基因12~72 h后,Bm FAD3-like mRNA转录水平显著下调。研究结果表明,Bm FAD3-like的表达产物能催化LA在ω3位脱氢生成ALA,并且该基因在蚕体受到低温诱导和真菌侵染等胁迫时显著上调表达,外源siRNA能够介导该基因的沉默,显著下调其转录水平。
关键词
家蚕
ω3-脂肪酸脱氢酶
基因克隆
酿酒酵母表达系统
表达
谱
多不饱和脂肪酸合成
诱导
表达
Keywords
Bombyx mori
Omega3-fatty acid desaturase
Gene cloning
Saccharomyces cerevisiae expression system
Expression profile
Polyunsaturated fatty acid synthesis
Induced expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S881.24 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种自剪切内含肽重组酿酒酵母表达优化研究
王晶晶
张旭
刘建平
王洪海
《科学技术与工程》
北大核心
2015
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究
于海彦
周志峰
贾俊强
桂仲争
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
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