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osw2对酿酒酵母孢子固定化酶影响的分析
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作者 赵强 李子杰 +1 位作者 中西秀树 高晓冬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期845-852,共8页
构建了α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转入酿酒酵母野生型AN120及osw2△突变株并进行固定化酶活性测定。实验分别选取蜜二糖、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)3种低聚寡糖作为Mel1p的底物,检测两种菌株孢子固定化酶对... 构建了α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转入酿酒酵母野生型AN120及osw2△突变株并进行固定化酶活性测定。实验分别选取蜜二糖、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)3种低聚寡糖作为Mel1p的底物,检测两种菌株孢子固定化酶对这3种底物的催化活性,结果表明野生型AN120酵母孢子壁的孔径最大只允许介于三糖和四糖之间的底物通过,四糖不能通过;而osw2△突变株酵母孢子壁的孔径可以允许四糖通过。通过孢子固定化酶保护性实验,发现孢子固定化酶可以完全抵抗2%SDS的处理,也可部分抵抗10%SDS的处理。通过8 mol/L尿素处理后,酶活检测发现野生型AN120酵母孢子可阻挡尿素对孢子固定化酶的影响,而osw2△孢子不能;蛋白免疫印迹分析进一步表明,尿素处理后野生型AN120酵母孢子固定化酶的含量几乎不变,而osw2△突变株孢子固定化酶的含量明显降低,说明尿素可进入osw2△突变株孢子内部溶解并降低固定化酶的含量,但对AN120酵母孢子无影响。本研究也在多种突变株孢子中表达Mel1p,并进行活性比较,发现osw2△,osw2△ydl186w△及osw2△ydr326c△突变株固定化酶均有很高的催化活性。 展开更多
关键词 酿酒酵母孢子 Α-半乳糖苷 固定化
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酿酒酵母孢子固定化聚对苯二甲酸乙二醇酯水解酶的酶学性质研究
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作者 白佳文 王亚森 +4 位作者 杜祥坤 佀辰钰 兰周格 中西秀树 李子杰 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第5期78-84,共7页
基于酿酒酵母孢子表面展示系统,实现聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)水解酶FAST-PETase的孢子固定化。使用整合型质粒pRS306-TEF1pr-ss-FAST-PETase,将编码FAST-PETase的基因插入到酿酒酵母dit1Δ缺陷型菌株的基... 基于酿酒酵母孢子表面展示系统,实现聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate,PET)水解酶FAST-PETase的孢子固定化。使用整合型质粒pRS306-TEF1pr-ss-FAST-PETase,将编码FAST-PETase的基因插入到酿酒酵母dit1Δ缺陷型菌株的基因组中,使蛋白更加稳定的表达。以双-2-(羟乙基)对苯二甲酸酯[bis(2-hydroxyethyl)terephthalate,BHET]为底物,对孢子固定化FAST-PETase的最适反应条件、热稳定性、pH耐受性、洗涤剂/有机试剂耐受性和重复使用能力进行研究。孢子固定化FAST-PETase的最适反应条件为50℃,pH 8.0。在30~80℃孵育12 h后,能保留82%以上的活性。同样地,在pH 5.0~9.0孵育12 h后,也能保持78%以上的活性。与游离酶相比,孢子固定化FAST-PETase对有机试剂也有一定的抗性,在重复使用7次后仍然保留初始活性的35%。该研究利用酿酒酵母孢子表面展示系统成功实现孢子固定化FAST-PETase,并将其应用于BHET的水解中,为PET塑料的长期降解提供了新的平台。 展开更多
关键词 酿酒酵母 孢子表面展示 FAST-PETase BHET降解 学性质
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固定化酶新技术——酿酒酵母孢子微胶囊固定化酶技术 被引量:3
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作者 孔军 李子杰 +1 位作者 中西秀树 高晓冬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期257-265,共9页
随着固定化酶技术的日新月异,微胶囊技术得到了长足的发展。与传统微胶囊生产技术不同,文章介绍了一种"天然的"微胶囊固定化酶生产新技术——酿酒酵母孢子微胶囊固定化酶技术,详述了该固定化技术原理及实例。该技术优点在于:... 随着固定化酶技术的日新月异,微胶囊技术得到了长足的发展。与传统微胶囊生产技术不同,文章介绍了一种"天然的"微胶囊固定化酶生产新技术——酿酒酵母孢子微胶囊固定化酶技术,详述了该固定化技术原理及实例。该技术优点在于:固定化酶的组装"自然"完成,具有天然抗逆性,大小均一,可重复使用,绿色环保,可实现多种酶的共同固定。最后,对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 固定化 微胶囊技术 酿酒酵母孢子固定化酶 “一孢多”法
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酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示乙醛脱氢酶以及检测乙醛的应用 被引量:1
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作者 杜祥坤 费康清 +3 位作者 王亚森 白佳文 中西秀树 李子杰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期318-326,共9页
乙醛是对人体有毒的化合物,乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)能将乙醛氧化为无毒的乙酸,同时将NAD(P)+转化为NAD(P)H。目前检测乙醛的方法繁琐且耗时费力,该研究采用酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示热带假丝酵母(Candida tr... 乙醛是对人体有毒的化合物,乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)能将乙醛氧化为无毒的乙酸,同时将NAD(P)+转化为NAD(P)H。目前检测乙醛的方法繁琐且耗时费力,该研究采用酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示热带假丝酵母(Candida tropicalis)LBBE-W1来源的乙醛脱氢酶,建立一种新颖快速检测乙醛的方法。首先,基于蛋白质免疫印迹与荧光结果证实ALDH能够在孢子中表达且定位在孢子壁上。然后,测定了孢子表面展示ALDH与游离ALDH的酶学性质。结果显示,孢子表面展示ALDH和游离酶的最适温度与pH值分别为40℃和9.0;与游离酶相比,孢子表面展示ALDH具有更高的活性,以及更佳的温度与pH稳定性。此外,孢子表面展示ALDH对十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、蛋白酶K具有更强的耐受性;孢子表面展示ALDH与游离乙醛脱氢酶的最适底物都是乙醛,并且孢子表面展示ALDH具有良好的重复使用性能。最后,将孢子表面展示ALDH作为生物传感器检测乙醛,结果表明在0~500μmol/L的乙醛浓度范围内具有良好的线性关系,其R2值为0.9992。该研究成功构建一种新颖的生物传感器,为乙醛的检测提供一种新的方法。 展开更多
关键词 孢子表面展示 乙醛脱氢 生物传感器 酿酒酵母 乙醛检测
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kre1Δ酿酒酵母孢子固定肌酐酶体系的构建及其酶学分析 被引量:1
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作者 潘华平 中西秀树 +1 位作者 孔军 高晓冬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期1-7,共7页
酵母孢子固定化酶是一种利用酵母孢子对酶进行包埋固定的新型酶固定化技术。研究表明,利用有孢子壁缺陷的osw2Δ酿酒酵母孢子作为酶固定化载体,不仅能大幅提高酶活,而且具有较强的抗逆性及较好的可重复利用性。为了研究新发现的kre1Δ... 酵母孢子固定化酶是一种利用酵母孢子对酶进行包埋固定的新型酶固定化技术。研究表明,利用有孢子壁缺陷的osw2Δ酿酒酵母孢子作为酶固定化载体,不仅能大幅提高酶活,而且具有较强的抗逆性及较好的可重复利用性。为了研究新发现的kre1Δ孢子是否具有类似的性能,将肌酐酶转入酵母孢子,并对其酶学性能进行分析。实验结果表明,kre1Δ孢子固定的肌酐酶活性与osw2Δ孢子相近,都显著高于野生型孢子。与游离酶相比,kre1Δ孢子固定的肌酐酶与osw2Δ一样,都有较好的可重复利用性和较强的抗逆性。同时,kre1Δ孢子与osw2Δ孢子肌酐酶活的最适温度均为60℃,最适pH值均为6.0,且kre1Δ孢子与osw2Δ孢子一样都表现出较好的耐高温性及较广范围的pH耐受性。因此,kre1Δ孢子也是综合性能较好的酶固定化载体。 展开更多
关键词 肌酐 固定化 酿酒酵母 孢子 孢子
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木糖异构酶酿酒酵母孢子“微胶囊”的构建及酶学性质分析 被引量:2
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作者 李毅 李子杰 +1 位作者 中西秀树 高晓冬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期6-11,共6页
将来源于嗜热细菌Thermus thermophilus HB8的木糖异构酶(XI)基因xyl A与SPR1信号肽序列(ss)融合后连接到p RS424-TEFpr表达载体上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-xyl A转化酿酒酵母AN120野生型菌株、osw2Δ缺陷型菌株以及dit1Δ缺陷型菌... 将来源于嗜热细菌Thermus thermophilus HB8的木糖异构酶(XI)基因xyl A与SPR1信号肽序列(ss)融合后连接到p RS424-TEFpr表达载体上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-xyl A转化酿酒酵母AN120野生型菌株、osw2Δ缺陷型菌株以及dit1Δ缺陷型菌株并进行产孢。通过荧光定位、蛋白免疫印迹分析以及酶活测定,表明酿酒酵母孢子"微胶囊"固定化酶系统构建成功。由于该固定化酶的最佳反应温度为85℃,避免了酿酒酵母孢子在D-葡萄糖为底物条件下萌发的弊端。同时,根据蛋白免疫印迹分析和重复利用性结果,表明二酪氨酸层的存在对于酶的包埋,对高温的耐受性都表现出了较好的特性。此外对野生型和osw2Δ孢子固定的XI的酶学性质进行了研究,相对于游离酶,孢子固定化酶更加稳定。在p H为6的酸性条件或p H为9的碱性条件下,固定化酶相对酶活能达到60%以上,同时在温度95℃时,固定化的酶相对酶活也能达到60%以上。与野生型孢子相比,osw2Δ孢子展现出了潜在的优势,既可以有效阻止酶的释放,又提高了底物分子的通透性。 展开更多
关键词 酿酒酵母 孢子 木糖异构 固定化
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某些添加物对固定化酵母的影响 被引量:1
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作者 朱仁华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1991年第5期1-6,共6页
在海藻酸钙固定化酵母中,添加0.25%明胶,再与戊二醛交联,使胶粒的机械强度大增,使细胞泄漏率明显减少.在固定化酵母中添加甾醇、吐温和不饱和脂酸,使发酵速度加快,细胞存活率提高.
关键词 固定化 添加物 酿酒 酵母
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