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短短芽胞杆菌分支酸合成酶基因BbaroC的鉴定及转录因子调控分析
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作者 车建美 赖恭梯 +6 位作者 许恒 贺丽媛 李思雨 陈冰星 王阶平 刘波 赖呈纯 《福建农业科技》 CAS 2024年第1期8-17,共10页
分支酸合成酶AroC是莽草酸途径中芳香族化合物合成的关键酶,探明短短芽胞杆菌aroC基因的特征及转录调控因子可为短短芽胞杆菌作用机理研究奠定基础。从短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX中克隆了aroC基因,进行生物信息学分析和转录因子预测。... 分支酸合成酶AroC是莽草酸途径中芳香族化合物合成的关键酶,探明短短芽胞杆菌aroC基因的特征及转录调控因子可为短短芽胞杆菌作用机理研究奠定基础。从短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX中克隆了aroC基因,进行生物信息学分析和转录因子预测。短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX中aroC基因序列长度为1 164 bp, GenBank登录号为OR475562。短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX与Brevibacillus brevis NBRC 100599的aroC基因序列同源性最高,为98.88%,与Brevibacillus brevis HNCS-1的AroC氨基酸序列同源性最高,为100%;其编码的蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,定位于细胞质。靶向BbaroC的转录因子共有23个,分别来自10个物种,Escherichia coli(Strain K12 MG1655)和Bacillus subtilis(Strain 168)分别预测到12个和3个转录因子。BbaroC在短短芽胞杆菌抑菌活性物质产生中可能发挥着重要作用,这为其在农业上的广泛应用提供依据。 展开更多
关键词 短短芽胞杆菌 分支酸合成酶 氨基 莽草途径 转录因子
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脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响
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作者 秦祎 胡文洁 +4 位作者 方小伟 郭骞 田篮鑫 刘芳 方春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期670-679,共10页
本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株,探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体... 本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株,探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体形态的影响,Western blot试验探究亲本株EGDe-prfA、缺失株ΔltaS对InlA和InlB在细菌表面的锚定情况;使用鸡胚成纤维DF-1细胞进行细胞黏附侵袭试验、小鼠RAW264.7细胞进行吞噬试验与巨噬细胞内增殖试验测定ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌侵染能力的影响;小鼠脏器细菌载量和小鼠存活试验评估ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响。结果显示:利用同源重组技术成功构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株,生长曲线试验和光学显微镜观察发现ltaS基因不影响产单核细胞李氏杆菌在BHI中正常生长和细菌形态,通过Western blot试验验证ltaS基因缺失导致细菌表面毒力的InlA和InlB锚定量降低。细胞黏附侵袭试验结果表明,ΔltaS对DF-1的黏附率极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01)并且侵袭率也极显著低于亲本株EGDe-prfA(P<0.01);吞噬试验结果显示,小鼠巨噬细胞RAW264.7对ΔltaS的吞噬率与亲本株EGDe-prfA相比无显著性差异(P>0.05);而在增殖试验中,ΔltaS在RAW264.7中增殖量与亲本株EGDe-prfA存在显著差异(P<0.05)。小鼠致病力试验结果显示,经ΔltaS感染的小鼠的肝、脾内细菌载量均显著低于EGDe-prfA(P<0.01)并且EGDe-prfA感染后的小鼠96 h内全部死亡,而缺失株ΔltaS感染的小鼠存活率为80%,测定出亲本株EGDe-prfA半数致死量LD 50为1.7×104 CFU,缺失株ΔltaS半数致死量LD 50为7.49×106 CFU。综上所述,ltaS基因缺失显著减少表面InlA和InlB的锚定量,减弱产单核细胞李氏杆菌对DF-1细胞的黏附侵袭能力与RAW264.7内细菌增殖能力,并且降低对小鼠的致病性。 展开更多
关键词 产单核细胞李氏杆菌 磷壁 脂磷壁酸合成酶 基因缺失 致病性
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胸苷酸合成酶抑制剂雷替曲塞的合成 被引量:9
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作者 虞心红 毛庆华 +2 位作者 张卫东 陈振杰 孙乐盈 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期184-188,共5页
以L-谷氨酸二乙酯为手性元,采用汇聚合成法分别以2-氨基-5-甲基-苯甲酸为原料经环合、溴化制得2-甲基-6-溴甲基-3-氢-喹唑啉-4-酮(4),收率为69.1%;以2-噻吩甲醛为原料经硝化、氧化、酰氯化、缩合、还原及N-甲基化制得N-[5-(N-甲氨基)-2... 以L-谷氨酸二乙酯为手性元,采用汇聚合成法分别以2-氨基-5-甲基-苯甲酸为原料经环合、溴化制得2-甲基-6-溴甲基-3-氢-喹唑啉-4-酮(4),收率为69.1%;以2-噻吩甲醛为原料经硝化、氧化、酰氯化、缩合、还原及N-甲基化制得N-[5-(N-甲氨基)-2-噻吩甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(3),收率为25.4%;2-噻吩甲醛以硝酸-乙酸酐硝化后再经过氧化氢氧化制备5-硝基噻吩-2-甲酸,收率为62.2%;N-(5-氨基-噻吩-2-甲酰基)-L-谷氨酸二乙酯(10)的N-甲烷化反应中采用胺与碘甲烷摩尔比1∶1.1,一次性加入碘甲烷,收率为79.9%。化合物3与化合物4缩合生成N-[5-[N-[(3,4-二氢-2-甲基-4-氧-6-喹唑啉基)-甲基]-N-甲氨基]-2-噻吩甲酰基]-L-谷氨酸二乙酯(2),继而水解即得目标化合物雷替曲塞(1),总收率为22.5%。其结构经红外光谱、核磁共振谱、高分辨质谱及元素分析确证。 展开更多
关键词 药物化学 胸苷酸合成酶抑制剂 雷替曲塞 合成
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拟南芥乙酰羟基酸合成酶与磺酰脲的相互作用以及CoMFA研究 被引量:6
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作者 班树荣 牛聪伟 +3 位作者 陈文彬 任晓白 余志红 席真 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期543-547,共5页
在分子水平上较为详尽地研究了85个磺酰脲类化合物与植物源野生型拟南芥AHAS酶的离体相互作用,测定了这些化合物对AHAS酶的抑制常数Kiapp.采用比较分子力场方法(CoMFA)对这些化合物与AHAS酶的相互作用进行了三维构效关系研究,用此模型... 在分子水平上较为详尽地研究了85个磺酰脲类化合物与植物源野生型拟南芥AHAS酶的离体相互作用,测定了这些化合物对AHAS酶的抑制常数Kiapp.采用比较分子力场方法(CoMFA)对这些化合物与AHAS酶的相互作用进行了三维构效关系研究,用此模型预测了检验组10个化合物的pKiapp值,模型的预测结果与测试结果一致. 展开更多
关键词 乙酰羟基酸合成酶 拟南芥 磺酰脲 比较分子力场分析(CoMFA)
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茶氨酸合成酶基因的全长cDNA克隆及序列分析 被引量:6
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作者 李娟 邓婷婷 +4 位作者 吴扬 刘硕谦 李勤 刘仲华 黄建安 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期411-418,共8页
采用SMART RACE技术成功克隆了安吉白茶茶氨酸合成酶基因(TS)的全长cDNA序列,并将其登录Genbank,登录号为JN226569。TS基因的cDNA全长为1 503 bp,开放阅读框(ORF)为1 071 bp,编码356个氨基酸。经生物信息学分析,TS蛋白的氨基酸残基数为3... 采用SMART RACE技术成功克隆了安吉白茶茶氨酸合成酶基因(TS)的全长cDNA序列,并将其登录Genbank,登录号为JN226569。TS基因的cDNA全长为1 503 bp,开放阅读框(ORF)为1 071 bp,编码356个氨基酸。经生物信息学分析,TS蛋白的氨基酸残基数为356,分子量为39 250.3 Da,理论等电点(PI)为5.79,其氨基酸序列中可能不存在卷曲螺旋结构。TS蛋白不存在信号肽序列,不发生跨膜运动,属于亲水性的非分泌蛋白,其磷酸化位点有26个。通过亚细胞定位预测,安吉白茶TS蛋白是一种细胞质蛋白。克隆茶氨酸合成酶基因的全长cDNA序列,对于利用生物技术手段改良茶树品种,以调控茶树中茶氨酸的含量具有重要意义。 展开更多
关键词 茶氨酸合成酶 全长CDNA克隆 序列分析
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胸苷酸合成酶免疫组化染色在标记前列腺基底细胞中的应用 被引量:4
6
作者 郭睿 田怡 +4 位作者 金雪媛 黄莺 强磊 黄小钟 杨军 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第5期658-663,共6页
目的评估胸苷酸合成酶(thymidylate systhase,TS)作为前列腺基底细胞分子标志的敏感性和特异性及其在前列腺癌诊断中的临床价值。方法应用免疫组化En Vision法检测TS、P63、CK-H(抗体克隆号:34βE12)、P504S在108例前列腺组织样本中的表... 目的评估胸苷酸合成酶(thymidylate systhase,TS)作为前列腺基底细胞分子标志的敏感性和特异性及其在前列腺癌诊断中的临床价值。方法应用免疫组化En Vision法检测TS、P63、CK-H(抗体克隆号:34βE12)、P504S在108例前列腺组织样本中的表达,其中正常和前列腺增生样本27例、前列腺非典型上皮内瘤变样本18例、前列腺腺癌样本63例,并比较TS与前列腺基底细胞特异性标志物P63、CK-H之间的一致性。结果 TS能特异性地高表达于前列腺基底细胞胞核内,且其表达模式和强度与P63的表达完全一致,CK-H在基底细胞胞质中呈强阳性表达。统计学分析结果显示,TS在前列腺基底细胞中的表达与P63和CK-H具有高度一致性(Kappa≥0. 75),而且,TS作为前列腺基底细胞分子标志的特异性和敏感性均为100%。同时,TS在3例(16. 7%)前列腺上皮内瘤变样本中弱阳性表达于腺泡细胞胞质内,TS在25例(39. 7%)前列腺腺癌细胞胞质内呈不同强度阳性表达。P63和CK-H在前列腺腺泡细胞和腺癌细胞胞质中不表达。P504S在前列腺腺癌细胞质中呈强阳性表达。结论胸苷酸合成酶能特异性表达于前列腺基底细胞核内,因而,可作为一种新的前列腺基底细胞的特异性分子标志而用于前列腺良恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断。 展开更多
关键词 胸苷酸合成酶 前列腺癌 基底细胞 分子标志物 免疫组化
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水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸 被引量:2
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作者 徐礼生 高贵珍 +5 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 陈军 宋曼 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期547-552,共6页
本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影... 本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影响。有机溶剂包括二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯和辛醇,表面活性剂包括吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)、CTAB和Trion X-100,金属离子包括Mg2+、Ca2+、Cu2+、Co2+和Zn2+。结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为甲苯,甲苯体积分数为2%,反应温度为40℃,水相p H为8,底物L-丝氨酸浓度为150mmol/L,表面活性剂Trion X-100质量分数为2%,金属离子Ca2+浓度为0.1 mmol/L,色氨酸合成酶酶促反应5 h,2-甲基-L-色氨酸的质量浓度为21.17 g/L。重组大肠杆菌DM206可作为2-甲基-L-色氨酸生产菌,具有较好的2-甲基-L-色氨酸生产潜力。 展开更多
关键词 色氨酸合成酶 2-甲基-L-色氨 L-丝氨 2-甲基吲哚
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γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶、转化生长因子β1在吸烟大鼠肺组织中的表达 被引量:7
8
作者 许建英 孙丽娜 庞敏 《山西医科大学学报》 CAS 2009年第2期103-107,192,共6页
目的观察不同吸烟时间大鼠支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞和肺组织中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及其蛋白的表达水平以及二者的相关性,探讨TGF-β1在吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)氧化/抗氧化失... 目的观察不同吸烟时间大鼠支气管上皮细胞、肺泡巨噬细胞和肺组织中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及其蛋白的表达水平以及二者的相关性,探讨TGF-β1在吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)氧化/抗氧化失衡中的作用。方法自制大鼠实验性被动吸烟装置,建立吸烟引起COPD的动物模型,将40只大鼠随机分为不吸烟组、吸烟1月组、吸烟2月组、吸烟3月组,每组各10只。分别采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交半定量技术检测支气管上皮细胞及肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)和TGF-β1mRNA及其蛋白的表达水平。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测肺组织匀浆中γ-GCSh和TGF-β1mRNA的表达水平。结果吸烟3月组大鼠出现了肺气肿的病理改变。①吸烟1月、2月和3月组大鼠支气管上皮细胞γ-GCSh和TGF-β1mRNA及蛋白表达水平、肺泡巨噬细胞γ-GCSh和TGF-β1蛋白表达水平明显高于不吸烟组(均P<0.01)。②吸烟1月、2月和3月组大鼠肺组织匀浆中γ-GC-Sh和TGF-β1mRNA表达水平明显高于不吸烟组(均P<0.05)。③吸烟1月组和吸烟3月组大鼠支气管上皮细胞γ-GCShmRNA及其蛋白的表达水平与TGF-β1表达水平呈直线正相关,肺泡巨噬细胞γ-GCSh蛋白表达水平与TGF-β1表达呈直线正相关;吸烟3月组肺组织匀浆中γ-GCShmRNA表达水平与TGF-β1表达呈直线正相关。结论随着吸烟时间的延长,支气管肺组织中γ-GCS和TGF-β1的mRNA及其蛋白表达水平逐渐增高,并且二者呈正相关;提示TGF-β1在吸烟所致COPD氧化/抗氧化失衡中可能发挥一定的作用。 展开更多
关键词 吸烟 慢性阻塞性肺疾病 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 转化生长因子Β1
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酿酒酵母苏氨酸合成酶缺失对高级醇生成量的影响 被引量:4
9
作者 石钰 陈叶福 +1 位作者 郭学武 肖冬光 《酿酒科技》 北大核心 2014年第7期26-30,共5页
通过构建酿酒酵母苏氨酸合成酶基因(THR4)缺失的工程菌株,研究该基因对酿酒酵母高级醇生成量的影响。以质粒pUC-19为载体,KanMX抗性基因为筛选标记,构建了重组质粒pUC-TABK,经PCR扩增得到YAKanMX-YB重组盒,并以酿酒酵母AY15单倍体α5为... 通过构建酿酒酵母苏氨酸合成酶基因(THR4)缺失的工程菌株,研究该基因对酿酒酵母高级醇生成量的影响。以质粒pUC-19为载体,KanMX抗性基因为筛选标记,构建了重组质粒pUC-TABK,经PCR扩增得到YAKanMX-YB重组盒,并以酿酒酵母AY15单倍体α5为出发菌株,通过醋酸锂转化和G418抗性筛选,获得THR4基因缺失的突变株α5-T7。将转化子和亲本菌株分别进行模拟酒精发酵及酒精浓醪发酵,发酵结束后进行发酵性能和高级醇生成量的测定。结果显示,与亲本菌株相比,突变株正丙醇生成量分别提高了1.61倍和2.6倍,异戊醇生成量分别提高了0.27倍和0.24倍,而异丁醇生成量没有明显差异,表明THR4基因缺失会使酿酒酵母高级醇特别是正丙醇生成量提高。 展开更多
关键词 酿酒酵母 苏氨酸合成酶 THR4基因 高级醇
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不同分子量透明质酸对人腹膜间皮细胞透明质酸合成酶mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 郭群英 叶任高 +1 位作者 黄文生 汪涛 《中国中西医结合肾病杂志》 2002年第6期320-322,331,共4页
目的 :了解不同分子量透明质酸对人腹膜间皮细胞透明质酸合成酶 (HAS)的调节作用及对透明质酸合成的影响。方法 :分离培养的人腹膜间皮细胞 (HPMCs)随机分为 3组 :正常对照组 (对照组 ) ;高分子量透明质酸组(分子量为 1,6 0 0 ,0 0 0道... 目的 :了解不同分子量透明质酸对人腹膜间皮细胞透明质酸合成酶 (HAS)的调节作用及对透明质酸合成的影响。方法 :分离培养的人腹膜间皮细胞 (HPMCs)随机分为 3组 :正常对照组 (对照组 ) ;高分子量透明质酸组(分子量为 1,6 0 0 ,0 0 0道尔顿 ,浓度 0 .0 1%,HHA组 ) ;低分子量透明质酸组 (分子量为 2 80 ,0 0 0道尔顿 ,浓度 0 .0 1%,LHA组 )。给予上述刺激后继续培养 2 4h后 ,以RT -PCR法检测HAS - 2mRNA和HAS - 3mRNA的表达 ;微粒排除法观察细胞基质的面积。结果 :LHA组HAS - 2mRNA及HAS - 3mRNA表达均较对照组增强 (P值均 <0 .0 5 ) ;HHA组HAS - 2mRNA表达较对照组增强 ,而HAS - 3mRNA表达与对照组无显著差异。各组细胞胞衣样结构面积与细胞体面积的比值的比较 ,HHA组较对照组有增加趋势 ,但未达统计学差异 (P >0 .0 5 ) ,LHA组与对照组间无显著性差异。结论 :LHA和HHA均促进HPMCsHAS - 2mRNA表达 ,LHA对与炎症反应相关的HAS - 3mRNA表达也有增强作用 ,而HHA则没有这一作用。因此 ,从选择腹膜保护剂的角度分析 ,我们倾向于选择更具生物相容性的HMW -HA。 展开更多
关键词 腹膜间皮细胞 透明质酸合成酶 MRNA表达 分子量 腹膜透析 透明质 实验研究 HPMCs HAS
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培美曲塞单药二线治疗晚期肺腺癌的疗效及其与血清胸苷酸合成酶的关系 被引量:2
11
作者 温宁笑 余晓龙 袁红梅 《山东医药》 CAS 2014年第4期57-59,共3页
目的 探讨培美曲塞单药二线治疗晚期肺腺癌的疗效及其与血清胸苷酸合成酶(TS)的关系.方法 应用培美曲塞单药二线治疗48例(KPS≥60分)晚期肺腺癌患者,至少2个周期后进行疗效评价;治疗前1~2d取静脉血,ELISA法检测血清TS,分析其与培... 目的 探讨培美曲塞单药二线治疗晚期肺腺癌的疗效及其与血清胸苷酸合成酶(TS)的关系.方法 应用培美曲塞单药二线治疗48例(KPS≥60分)晚期肺腺癌患者,至少2个周期后进行疗效评价;治疗前1~2d取静脉血,ELISA法检测血清TS,分析其与培美曲塞单药二线治疗疗效的关系.结果 48例患者缓解率为10.4%,疾病控制率为56.2%;疾病控制患者血清TS为(57.27±38.05) pg/mL,进展患者为(99.38±59.07) pg/mL,P<0.05.结论 培美曲塞单药二线治疗晚期肺腺癌具有一定疗效,血清TS水平可作为判断其疗效的预测指标. 展开更多
关键词 肺腺癌 培美曲塞 疗效 胸苷酸合成酶 酶联吸附试验法
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胸苷酸合成酶基因多态性与晚期非小细胞肺癌化疗敏感性的关系 被引量:1
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作者 张婷婷 于壮 +4 位作者 崔莲花 李静波 张超英 陈晓光 张娟 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第21期1-3,共3页
目的探讨胸苷酸合成酶(TS)基因多态性与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类为基础的化疗敏感性的关系。方法 101例晚期NSCLC患者采用顺铂或卡铂为主的方案化疗,2~3个周期后进行临床疗效评价。应用PCR方法分析患者TS 5′-非翻译区(... 目的探讨胸苷酸合成酶(TS)基因多态性与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者对铂类为基础的化疗敏感性的关系。方法 101例晚期NSCLC患者采用顺铂或卡铂为主的方案化疗,2~3个周期后进行临床疗效评价。应用PCR方法分析患者TS 5′-非翻译区(UTR)基因多态性,以非条件logistic回归模型分析不同基因型与化疗敏感性的关系。结果 101例患者的总有效率为30.7%。携带TS 5′-UTR 2R等位基因患者的化疗敏感性是携带TS 5′-UTR 3R/3R基因型患者的1.54倍(95%CI=0.65~3.68,P=0.331),但无统计学差异。携带3R/3R基因型患者粒细胞减少和恶心、呕吐的化疗毒性反应程度低于3R/2R和2R/2R基因型患者(P〈0.05)。结论 TS 5′-UTR基因可能不是NSCLC铂类药物化疗的独立敏感性预测因子。 展开更多
关键词 非小细胞肺 胸苷酸合成酶 多态性 单核苷 化学疗法 药物敏感性
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植物半胱氨酸合成酶复合体(SAT/OAS-TL)研究进展 被引量:6
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作者 刘明坤 刘关君 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第24期10344-10347,共4页
综述了植物半胱氨酸的合成调节和半胱氨酸合成酶复合体的结构、调节机理及其植物转基因的研究进展。
关键词 乙酰丝氨转移酶 O-乙酰丝氨硫解酶 半胱氨酸合成酶复合体 转基因
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脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的共表达 被引量:1
14
作者 周长林 杨毅刚 窦洁 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期367-370,共4页
目的:构建共表达载体pETDuet-aroB-qutB,在大肠杆菌中同时表达奎尼酸合成途径中的关键酶脱氢奎尼酸合成酶(DHQase)和奎尼酸脱氢酶(QDHase)。方法:分别以大肠杆菌(B21)和构巢曲霉(ATCC 24919)基因组为模板,采用PCR法扩增得到脱氢奎尼酸... 目的:构建共表达载体pETDuet-aroB-qutB,在大肠杆菌中同时表达奎尼酸合成途径中的关键酶脱氢奎尼酸合成酶(DHQase)和奎尼酸脱氢酶(QDHase)。方法:分别以大肠杆菌(B21)和构巢曲霉(ATCC 24919)基因组为模板,采用PCR法扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB和奎尼酸脱氢酶基因qutB,克隆接入pETDuet-1载体中,转化入大肠杆菌BL21,在宿主菌中共表达脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶。结果:获得了包含pETDuet-aroB-qutB共表达载体的重组大肠杆菌。IPTG(0.5 mmol/L)诱导重组菌4 h后,脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶表达量分别占菌体总蛋白的18.7%和30.5%,酶活力为70.4 U/L、40.2 U/L,分别提高了14.1倍和22.3倍。结论:实现了脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效共表达,为基因工程法生物合成奎尼酸奠定了基础。 展开更多
关键词 脱氢奎尼酸合成酶 奎尼脱氢酶 奎尼 生物合成
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酵母γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因的克隆与原核高效表达
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作者 李莉 陈庆富 王华芳 《酿酒科技》 北大核心 2008年第12期30-34,共5页
谷胱甘肽是生物体内重要的抗氧化物质,γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是合成谷胱甘肽的关键酶。从酿酒酵母基因组中克隆了γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因,测序验证后在大肠杆菌工程菌中表达了约81kDa蛋白。
关键词 微生物 谷胱甘肽 Γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 克隆 表达
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猪链球菌2型表面蛋白分支酸合成酶通过p38MAPK和NF-κB通路促进TLR4依赖的炎性反应 被引量:6
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作者 刘建涛 张强 +4 位作者 宋娅静 闫树仙 于君平 张安定 金梅林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1866-1873,共8页
在大肠杆菌中表达与纯化猪链球菌表面蛋白分支酸合成酶,研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞分泌细胞因子的影响,并试图解释其分子机制。以SC19基因组为模板,PCR扩增aroC基因,构建表达质粒,转化到BL21(DE3)中并诱导表达,所得融合蛋白主要... 在大肠杆菌中表达与纯化猪链球菌表面蛋白分支酸合成酶,研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞分泌细胞因子的影响,并试图解释其分子机制。以SC19基因组为模板,PCR扩增aroC基因,构建表达质粒,转化到BL21(DE3)中并诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,以8 mol·L-1尿素(含有50 mmol·L-1Tris,pH8.0)为变性剂,对构建于pET-28a(+)的猪链球菌aroC基因在大肠杆菌BL21中表达的包涵体进行变性、复性、纯化、去除LPS以及除菌。以aroC蛋白体外刺激RAW264.7细胞,共同孵育4h后用real-time PCR的方法分析IL-1β、TNF-α的mRNA转录量。用ERK1/2、JNK、NF-κB和P38的抑制剂以及TLR2和TLR4的特异性抗体来解释其引起炎性反应的分子基础。结果显示成功对aroC蛋白进行了变性、复性及纯化,该蛋白具有刺激巨噬细胞表达细胞因子的能力,用NF-κB的抑制剂以及TLR4的特异性抗体预处理细胞后能明显降低aroC导致的IL-1β、TNF-αmRNA的转录,用P38的抑制剂预处理细胞后能明显降低aroC导致的TNF-αmRNA的转录量。结果证明aroC在RAW264.7中通过p38MAPK和NF-κB通路促进TLR4依赖的炎性反应。 展开更多
关键词 猪链球菌 分支酸合成酶 细胞因子 P38MAPK NF-ΚB TLR4
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对羟基杏仁酸合成酶三维结构模建及其与底物的分子对接研究 被引量:2
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作者 刘海春 邹建卫 +3 位作者 张兵 庄树林 蒋勇军 俞庆森 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期852-856,共5页
以对羟基苯丙酮酸双氧化酶(HPPD)的晶体结构为模板,利用同源模建方法构建了与其高度同源、底物相同但催化功能存在明显差别的对羟基杏仁酸合成酶(HMS)的三维结构,并对模建结构的合理性进行了分析.在模建结果的基础上,对HPPD和HMS分别与... 以对羟基苯丙酮酸双氧化酶(HPPD)的晶体结构为模板,利用同源模建方法构建了与其高度同源、底物相同但催化功能存在明显差别的对羟基杏仁酸合成酶(HMS)的三维结构,并对模建结构的合理性进行了分析.在模建结果的基础上,对HPPD和HMS分别与底物羟苯基丙酮酸(HPP)进行分子对接计算,比较了二者结合模式的异同,为两种同源酶在催化方面差异性的合理阐释提供了一些有益的信息. 展开更多
关键词 对羟基杏仁酸合成酶 对羟基苯丙酮双氧化酶 同源模建 分子对接
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脱氢奎尼酸合成酶基因aroB在大肠杆菌中的克隆表达及酶活力测定 被引量:3
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作者 杨毅刚 周长林 +1 位作者 窦洁 陈新 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期378-380,共3页
目的:在大肠杆菌中高效表达脱氢奎尼酸合成酶。方法:以大肠杆菌基因组为模板,采用PCR扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并在大肠杆菌中进行表达。结果:在浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后aroB基因表达量占菌体总可溶性蛋白40.0%,SDS-P... 目的:在大肠杆菌中高效表达脱氢奎尼酸合成酶。方法:以大肠杆菌基因组为模板,采用PCR扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB,并在大肠杆菌中进行表达。结果:在浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后aroB基因表达量占菌体总可溶性蛋白40.0%,SDS-PAGE显示重组菌诱导后表达的脱氢奎尼酸合成酶蛋白分子量约为38 kDa,发酵液中脱氢奎尼酸合成酶的酶活力达到178 U/L,为宿主菌的35.6倍。结论:脱氢奎尼酸合成酶在大肠杆菌中实现了高效表达。 展开更多
关键词 脱氢奎尼酸合成酶 生物合成 克隆与表达 奎尼
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对虾白斑综合征病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因的系统进化分析 被引量:2
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作者 李嵚 杨丰 +1 位作者 张景海 陈英杰 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期145-149,155,共6页
目的为了对对虾白斑综合征病毒 (whitespotsyndromevirus,WSSV)中最为保守的胸腺嘧啶核苷酸合成酶 (WSV TS)基因 ,进行该病毒的系统发育学研究。方法通过GenBankTM 数据库和DNAMAN分析系统 ,对不同生物来源的胸腺嘧啶核苷酸合成酶进行... 目的为了对对虾白斑综合征病毒 (whitespotsyndromevirus,WSSV)中最为保守的胸腺嘧啶核苷酸合成酶 (WSV TS)基因 ,进行该病毒的系统发育学研究。方法通过GenBankTM 数据库和DNAMAN分析系统 ,对不同生物来源的胸腺嘧啶核苷酸合成酶进行同源性比较并构建了该基因的系统发育进化树。结果 :WSV TS的氨基酸序列与来自高等生物 ,特别是同哺乳动物有着很高的同源性 ,而与多种病毒的同源性较低。结论WSV ts基因是WSSV基因组中最为保守的基因 ,其进化树的构建对于理解WSSV的进化地位有重要的帮助。 展开更多
关键词 胸腺嘧啶核苷酸合成酶 对虾白斑综合征病毒 同源性分析 系统进化分析
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脑胶质瘤组织中透明质酸合成酶2表达变化及其与临床病理参数和预后的关系 被引量:1
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作者 薛正淳 孙强 +3 位作者 孟祥龙 张健 张墨轩 衡雪源 《山东医药》 CAS 2023年第8期61-64,共4页
目的观察脑胶质瘤组织中透明质酸合成酶2(HAS2)的表达变化,探讨HAS2表达与脑胶质瘤临床病理参数及预后的关系。方法收集行脑胶质瘤切除术患者的胶质瘤组织标本70例纳入病例组,肿瘤WHO分级1~2级32例、3~4级38例。另收集同期行颅内减压术... 目的观察脑胶质瘤组织中透明质酸合成酶2(HAS2)的表达变化,探讨HAS2表达与脑胶质瘤临床病理参数及预后的关系。方法收集行脑胶质瘤切除术患者的胶质瘤组织标本70例纳入病例组,肿瘤WHO分级1~2级32例、3~4级38例。另收集同期行颅内减压术的脑外伤患者的脑组织标本10例纳入对照组。分别采用免疫组化法及Western blotting法检测两组HAS2蛋白,分析HAS2表达与脑胶质瘤临床病理参数的关系。采用Logistic回归分析胶质瘤组织中HAS2表达量的影响因素。绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较不同HAS2表达水平的脑胶质瘤患者的预后。结果免疫组化检测结果与Western blotting检测结果均显示,病例组HAS2表达高于对照组,且3~4级脑胶质瘤组织中HAS2表达高于1~2级脑胶质瘤组织(P均<0.05)。WHO分级3~4级、突变型p53、Ki-67高表达脑胶质瘤组织中HAS2高表达率分别高于1~2级、野生型p53、Ki-67低表达的肿瘤组织(P均<0.05)。将WHO分级、Ki-67表达、p53分型、年龄、性别、肿瘤部位和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达作为自变量,将HAS2表达作为因变量,纳入Logistic回归模型分析,结果显示WHO分级、Ki-67表达与p53分型是脑胶质瘤患者HAS2表达的独立影响因素(P均<0.05)。HAS2高表达患者的平均生存时间、总生存率低于HAS2低表达患者(P均<0.01)。结论HAS2在脑胶质瘤组织中高表达,HAS2高表达与脑胶质瘤恶性程度有关,并影响患者预后。 展开更多
关键词 透明质酸合成酶2 脑胶质瘤 KI-67 P53
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