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纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度 被引量:2
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作者 刘颖达 刘海媛 +5 位作者 苏娜 李庆辉 刘佳 TUYATSETSEG Jambel 伊丽 吉日木图 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期291-299,共9页
酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容... 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。 展开更多
关键词 竞争性酶联免疫吸附实验 纳米抗体 多聚化 灵敏度增强方法
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快速定量分析牛乳中α-乳白蛋白的竞争酶联免疫吸附法 被引量:2
2
作者 宋宏新 程妮 +1 位作者 薛海燕 杜枘宣 《中国科学院大学学报(中英文)》 CSCD 北大核心 2016年第3期360-364,共5页
建立一种灵敏度高和特异性好的直接竞争ELISA法来定性和定量检测牛乳中α-乳白蛋白(α-LA).通过使用牛乳α-LA多次免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并采用过碘酸钠氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的α-LA,建立检测α-LA的直接竞... 建立一种灵敏度高和特异性好的直接竞争ELISA法来定性和定量检测牛乳中α-乳白蛋白(α-LA).通过使用牛乳α-LA多次免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并采用过碘酸钠氧化法制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的α-LA,建立检测α-LA的直接竞争ELISA法.所制备的多克隆抗体特异性较高,无明显交叉反应,效价为1∶80 920.酶标抗原的标记率达66.67%.直接竞争ELISA法标准曲线相关系数为0.998 57,回收率在86.00%-117.50%之间,重复性高,变异系数〈5%.与国标电泳方法进行样品检测比较,结果显示该方法可有效地用于食品中α-LA的快速定性和定量检测. 展开更多
关键词 定量分析 蛋白质 竞争酶联免疫吸附实验 Α-乳白蛋白 免疫试验
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豆粕中胰蛋白酶抑制剂间接竞争酶联免疫吸附检测方法的研究 被引量:2
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作者 邢春芳 葛向阳 《饲料工业》 北大核心 2010年第10期58-60,共3页
研究以胰蛋白酶抑制剂(TI)的多克隆抗体为核心试剂,建立间接竞争ELISA检测方法,检测饲料及豆制品中TI的含量。建立的标准曲线方程为:y=16.18x+57.183,R2=0.9986,IC50为0.36μg/ml,最低检出限IC15为2ng/ml。选择0.05M、pH值8.2Tris-HCl... 研究以胰蛋白酶抑制剂(TI)的多克隆抗体为核心试剂,建立间接竞争ELISA检测方法,检测饲料及豆制品中TI的含量。建立的标准曲线方程为:y=16.18x+57.183,R2=0.9986,IC50为0.36μg/ml,最低检出限IC15为2ng/ml。选择0.05M、pH值8.2Tris-HCl缓冲液为样品浸提液,以0.8、1.6、2.4μg/ml的浓度添加到豆粕中时,其回收率为93.7%~104.9%,变异系数为2.8%~5.1%。本研究成功建立了检测TI的间接竞争ELISA方法,可以代替酶化学方法来检测TI,从而解决了酶化学方法检测发酵豆粕过程中因出现白色絮状物而不能检测TI这一问题。 展开更多
关键词 胰蛋白抑制剂(TI) 酶联免疫吸附实验 豆粕
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鲶爱德华氏菌间接酶联免疫快速检测法的建立 被引量:10
4
作者 李重实 李强 +2 位作者 刘海燕 叶仕根 李华 《广东海洋大学学报》 CAS 2010年第4期17-21,共5页
用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1... 用鲶爱德华氏菌兔抗血清作为一抗,碱性磷酸酶(AP)标记的羊抗兔IgG作为酶标二抗,建立黄颡鱼"红头病"病原菌—鲶爱德华氏菌的间接酶联免疫(ELISA)快速检测法,并优化检测条件。抗原最佳包被浓度为107/mL,一抗工作的最佳稀释度为1∶211,病原菌的检测灵敏度为105/mL,交叉反应实验证明该方法特异性强,与迟钝爱德华氏菌、弧菌等13种标准菌株无交叉。应用上述技术对人工感染发病鱼中分离的优势菌进行检测,结果表明阳性检出率为80%;对自然发病黄颡鱼体内分离获得的20株优势菌检测结果表明,12株菌为鲶爱德华氏菌。 展开更多
关键词 鲶爱德华氏菌 酶联免疫吸附实验(ELISA) 黄颡鱼 “红头病” 多克隆抗体
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基于酶联免疫分析的大豆蛋白复合纤维鉴定方法 被引量:1
5
作者 张世伟 王云发 +3 位作者 王士峰 姚添淇 冯荣虎 杨国武 《毛纺科技》 CAS 北大核心 2019年第7期47-51,共5页
不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得... 不同蛋白来源的改性纤维成本差异较大,为区分纤维的蛋白来源,建立了一种简单、准确的大豆蛋白复合纤维鉴定方法。根据大豆蛋白现有的氨基酸序列和蛋白交联的位点设计一段特征肽半抗原,将该特征肽段偶联载体蛋白,免疫实验动物,并制备得到特异性单克隆抗体。将优化浓度的抗原包被于酶标版,抗体偶联辣根过氧化物酶,建立针对大豆蛋白复合纤维的酶联免疫吸附实验(ELISA)。该方法采用7M尿素作为提取剂,检出限为1.8%氨基酸含量的大豆蛋白复合纤维,检测时间不超过70 min(含前处理)。该方法对常见的纤维无非特异性识别,纤维染色不会对检测结果造成干扰。 展开更多
关键词 大豆蛋白复合纤维 酶联免疫吸附实验 纤维鉴定 特征肽段
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实验兔出血症病毒检测方法的建立与免疫效果调查 被引量:1
6
作者 周文伟 刘月环 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第4期59-62,共4页
目的检测全省六个实验兔场的兔子所携带的兔出血症病毒(RHDV)情况,调查实验兔RHDV抗体水平,评价不同疫苗的免疫效果,比较HAI与ELISA两种方法的符合率。方法采用HAI、ELISA方法对1168份实验兔RHDV抗体进行了检测,并与RT-PCR方法的检测结... 目的检测全省六个实验兔场的兔子所携带的兔出血症病毒(RHDV)情况,调查实验兔RHDV抗体水平,评价不同疫苗的免疫效果,比较HAI与ELISA两种方法的符合率。方法采用HAI、ELISA方法对1168份实验兔RHDV抗体进行了检测,并与RT-PCR方法的检测结果进行对比分析。结果我省实验兔免疫情况较好,不同饲养场的实验兔免疫合格率虽有不同,但未发生疫情。通过比较发现ELISA法检测的抗体合格率明显高于HAI法。结论LISA、HAI和RT-PCR方法均适合实验兔RHDV的检测。 展开更多
关键词 兔出血症病毒(RHDV) 血凝抑制实验(HAI) 酶联免疫吸附实验(ELISA) 反转录聚合链式扩增(RT-PCR)
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新冠疫情下医学免疫学居家实验教学探索与实践 被引量:3
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作者 杨敬 徐勇 +7 位作者 朱慧芬 林传友 欧阳兴飚 杨真荣 宗义强 吴雄文 郑芳 梁智辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第18期2265-2268,共4页
疫情期间根据教育部停课不停学的要求,我中心开展了“双向琼脂糖凝胶免疫扩散实验”和“酶联免疫吸附实验”的居家实验课教学,将实验材料寄至学生家中,让学生自主完成实验,形成教师线上指导,学生自主探究的学习方式,以培养学生独立操作... 疫情期间根据教育部停课不停学的要求,我中心开展了“双向琼脂糖凝胶免疫扩散实验”和“酶联免疫吸附实验”的居家实验课教学,将实验材料寄至学生家中,让学生自主完成实验,形成教师线上指导,学生自主探究的学习方式,以培养学生独立操作技能、科学思维和创新能力。本实验取得了良好教学效果,保障了教学进度和教学质量,为居家免疫学实验的规模化、常态化开展提供了参考和依据。 展开更多
关键词 疫情 双向琼脂糖免疫扩散实验 酶联免疫吸附实验 居家实验
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兔出血症病毒抗体的实验室检测能力验证结果评价 被引量:11
8
作者 付瑞 王洪 +4 位作者 王淑菁 李晓波 王吉 卫礼 岳秉飞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期188-190,198,共4页
目的通过兔出血症病毒抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过筛选血清制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加... 目的通过兔出血症病毒抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过筛选血清制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果来自14个省市自治区的20个实验室报名参加本次比对实验,均在规定时间内反馈了检测结果,17个实验室检测结果为合格或优秀,占参加比对实验室的85%。在20个实验室中,14个实验室采用了酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,6个实验室采用血凝抑制实验(HAI)方法。结论全国各实验动物检测机构兔出血症病毒抗体总体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 能力验证 酶联免疫吸附实验 血凝抑制实验
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实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的实验室检测能力验证结果评价 被引量:10
9
作者 王吉 付瑞 +6 位作者 李晓波 王淑菁 卫礼 邢进 冯育芳 王洪 岳秉飞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期183-187,共5页
目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给... 目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。 展开更多
关键词 呼肠孤病毒Ⅲ型 检测能力验证 酶联免疫吸附实验 免疫荧光实验
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牙周炎临床检测指标与龈沟液Ⅰ型胶原羧基端交联肽的关系 被引量:7
10
作者 薛毅 吴仲寅 +1 位作者 赵进 李凤和 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期223-226,共4页
目的:探讨龈沟液中I型胶原羧基端交联肽(C-terminal telopeptides of type I collagen,CTX)水平与常用牙周炎临床检测指标的相关性。方法:选择就诊牙周病患者60例的77颗牙齿,采用酶联免疫吸附法测定其龈沟液中CTX水平,并对临床牙周检查... 目的:探讨龈沟液中I型胶原羧基端交联肽(C-terminal telopeptides of type I collagen,CTX)水平与常用牙周炎临床检测指标的相关性。方法:选择就诊牙周病患者60例的77颗牙齿,采用酶联免疫吸附法测定其龈沟液中CTX水平,并对临床牙周检查的常用几个指标菌斑指数(PL)、牙龈指数(GI)、牙周袋探诊深度(PD)、附着丧失(AL)进行记录,用SPSS 11.0软件秩和检验分析各指标与龈沟液中CTX的相关性。结果:PL、GI、PD、AL与龈沟液中CTX浓度的Sperman秩相关系数分别为0.386(P<0.01),0.366(P<0.05),0.382(P<0.05)和0.314(P<0.05)。结论:龈沟液中CTX浓度与PL、GI、PD、AL成正相关。 展开更多
关键词 慢性牙周炎 龈沟液(GCF) I型胶原羧基端交肽(CTX) 酶联免疫吸附实验(ELISA)
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血清葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的意义 被引量:8
11
作者 方勇飞 牟方祥 +1 位作者 王欢 戴裕光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期732-734,共3页
目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测108例RA患者、42例系统性... 目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测108例RA患者、42例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、50例其他风湿病患者及112例健康体检者血清GPI浓度,RA患者同时检测了抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP)、类风湿因子(rheuma-toid factor,RF)。结果GPI浓度:RA患者为(1.840±2.821)μg/ml,SLE患者为(0.143±0.426)μg/ml,其他风湿病患者为(0.074±0.279)μg/ml,健康体检者为(0.092±0.232)μg/ml。RA患者血清中GPI浓度显著高于SLE、其他风湿病患者和健康体检者(P<0.01)。Spearman等级相关分析显示RA患者GPI浓度与类风湿因子(RF)浓度呈显著正相关(r=0.622,P<0.01),与其他检测指标无相关性。结论GPI浓度大于0.209μg/ml时对RA的诊断有较高的特异性,其特异性可达93.7%,敏感性为56.5%。表明GPI的变化在RA诊断有较重要的意义。 展开更多
关键词 葡萄糖6-磷酸异构 类风湿关节炎 酶联免疫吸附实验
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K_(88)-K_(99)-^(987)P和K_(88)-K_(99)-F_(41)佐剂苗对鸡免疫效果的比较 被引量:6
12
作者 贾莉 刘昱杉 杨严俊 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第11期2415-2418,共4页
将猪致病性大肠杆菌K88-K999-87P和K88-K99-F412种混合菌液分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝和磷酸缓冲盐溶液)混合制成8种灭活疫苗免疫产蛋鸡4次,经水稀释、絮凝澄清、盐析及亲和层析制备特异性卵黄免疫球蛋白(IgY),用SD... 将猪致病性大肠杆菌K88-K999-87P和K88-K99-F412种混合菌液分别与不同的佐剂(弗氏佐剂、白油佐剂、氢氧化铝和磷酸缓冲盐溶液)混合制成8种灭活疫苗免疫产蛋鸡4次,经水稀释、絮凝澄清、盐析及亲和层析制备特异性卵黄免疫球蛋白(IgY),用SDS-PAGE检测抗体纯度和分子量、酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体滴度。结果表明,与氢氧化铝乳胶苗和水苗相比,弗氏佐剂苗和白油苗均能诱导并产生稳定、高活性卵黄抗体,免疫蛋鸡所制得抗体的滴度比未免疫蛋鸡分别提高32和16倍。IgY在温度低于60℃和pH值4~8时比较稳定,胃蛋白酶在不同pH下对IgY的活性影响显著。抑菌实验表明IgY能有效抑制大肠杆菌的生长。 展开更多
关键词 佐剂 大肠杆菌 鸡卵黄免疫球蛋白 酶联免疫吸附实验 理化性质
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心肌Heidenhain染色诊断早期心肌缺血的实验观察 被引量:4
13
作者 胡志红 吴萍 王庭 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期642-644,共3页
目的探讨铁矾苏木精伊红(Heidenhain)染色对急性心肌缺血早期诊断的可行性,旨在为法医病理学鉴定提供简便实用的检测方法和客观确凿的形态学依据。方法应用结扎家兔心脏左冠状动脉制作急性心肌缺血动物模型,采用Heidenhain染色,镜检观... 目的探讨铁矾苏木精伊红(Heidenhain)染色对急性心肌缺血早期诊断的可行性,旨在为法医病理学鉴定提供简便实用的检测方法和客观确凿的形态学依据。方法应用结扎家兔心脏左冠状动脉制作急性心肌缺血动物模型,采用Heidenhain染色,镜检观察心肌缺血后不同时间段心肌形态变化,结合血清中检测脂肪酸结合蛋白含量变化,研究其与心肌缺血时间、范围之间的相关性。结果在冠状动脉结扎15 min时,血清中心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)含量即有升高,Heidenhain染色显示缺血心肌点状黑染,主要分布于心室壁心外膜下浅肌层,随着心肌缺血时间延长,血清中H-FABP含量逐渐增高,Heidenhain染色显示黑染着色区域扩大,冠状动脉结扎3 h后,结扎区域大部分或心肌全层心肌纤维黑染,呈片状、团块状分布。结论心肌Heidenhain染色形态观察对早期心肌缺血有诊断价值,效果优于HE染色。 展开更多
关键词 心肌缺血 Heidenhain染色 心型脂肪酸结合蛋白 酶联免疫吸附实验
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甲状腺肿瘤端粒酶活性的检测及其临床意义 被引量:1
14
作者 刘红 王陈 杨秀芳 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期120-122,126,共4页
目的 探讨甲状腺肿瘤组织以及同组织细针穿刺标本中端粒酶活性的表达及其临床价值。方法 应用端粒重复序列扩增法结合酶联免疫吸附实验 (TRAP -PCR -ELISA)半定量方法对经病理确诊的 12例甲状腺癌、12例甲状腺腺瘤、8例甲状腺增生性... 目的 探讨甲状腺肿瘤组织以及同组织细针穿刺标本中端粒酶活性的表达及其临床价值。方法 应用端粒重复序列扩增法结合酶联免疫吸附实验 (TRAP -PCR -ELISA)半定量方法对经病理确诊的 12例甲状腺癌、12例甲状腺腺瘤、8例甲状腺增生性结节、12例正常甲状腺组织标本及其细针穿刺标本中端粒酶活性进行检测。结果 甲状腺癌组织及其细针穿刺标本中端粒酶活性水平和阳性率均显著高于腺瘤、增生性结节和正常甲状腺组织及细针穿刺标本的端粒酶活性水平和阳性率 (P <0 .0 1)。结论 端粒酶活性在甲状腺癌中高度表达提示其可能是一个特异性较强的甲状腺恶性肿瘤标记物 ,甲状腺细针穿刺标本中端粒酶活性的检测有助于手术前鉴别诊断甲状腺瘤的良恶性 。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 端粒 鉴别诊断 端粒重复序列扩增法 酶联免疫吸附实验
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CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶快速检测方法的建立 被引量:1
15
作者 郭小兵 代志峰 +3 位作者 宋海容 张傅山 叶亚菲 明亮 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第1期66-69,共4页
目的:建立一种CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的快速检测方法。方法:采用梅花形双向琼脂扩散实验检测酶蛋白与抗体反应最适比;根据双抗体夹心法原理设计酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒;平行测定30次BL21-pET-28a-CTX-M-38转化... 目的:建立一种CTX-M-38型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的快速检测方法。方法:采用梅花形双向琼脂扩散实验检测酶蛋白与抗体反应最适比;根据双抗体夹心法原理设计酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒;平行测定30次BL21-pET-28a-CTX-M-38转化子表达产物,检测批内变异;分别采用所建立的ELISA法与PCR技术对146株产ESBLs大肠埃希菌进行检测,评价方法特异性;对27株非产CTX-M-38型产酶大肠埃希菌进行检测,计算假阳性率;对产CTX-M-38型ESBLs菌株不同时间段培养液进行检测,明确最适检测时间。结果:抗体与4 h培养物反应最适比为1∶64;批内检测结果变异系数为1.525%;PCR及所建立的ELISA法检测产CTX-M-38型ESBLs菌株的检出率分别为4.11%和7.53%(χ2=2.286,P=0.131);交叉反应中存在假阳性现象(1/27);产酶菌株培养4 h后进行ESBLs检测较为合适。结论:所建立的方法适用于临床产CTX-M-38型ESBLs菌株的检测。 展开更多
关键词 CTX-M-38 超广谱Β-内酰胺 酶联免疫吸附实验 CTX-M-38
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检测可溶性晚期氧化蛋白产物的夹心ELISA的建立
16
作者 侯晓睿 朱平 +2 位作者 郭勇晖 富宁 刘北一 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第5期1208-1214,共7页
目的:建立检测可溶性晚期氧化蛋白产物(AOPPs)的双抗体夹心ELISA法。方法:以次氯酸钠氧化的小鼠白蛋白为免疫原,免疫BALB/c鼠,制备抗AOPPs单克隆抗体(单抗)。间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性,竞争ELISA鉴定该单抗与前期工作获... 目的:建立检测可溶性晚期氧化蛋白产物(AOPPs)的双抗体夹心ELISA法。方法:以次氯酸钠氧化的小鼠白蛋白为免疫原,免疫BALB/c鼠,制备抗AOPPs单克隆抗体(单抗)。间接ELISA和Western blot检测单抗的特异性,竞争ELISA鉴定该单抗与前期工作获得的另一株单抗3F2所识别表位是否相同。建立双抗体夹心ELISA方法,比较夹心ELISA与氯胺T法的特异度和敏感度,验证双单抗夹心ELISA的重复性。结果:获得一株特异性识别AOPPs的单抗AP-4C5,建立了两种可特异性检测可溶性AOPPs的夹心ELISA。双单抗夹心ELISA(单抗3F2为捕获抗体,AP-4C5为检测抗体)可检测0.25~2μg/mL AOPPs(R^(2)=0.99180);多单抗夹心ELISA(羊抗人白蛋白多抗为捕获抗体,AP-4C5为检测抗体)可检测1.5~25μg/ml AOPPs(R^(2)=0.96875)。与氯胺T法比较,双单抗夹心ELISA灵敏度更高、特异度更强。双单抗夹心ELISA重复性好(批内CV:3.23%~4.51%,批间CV:3.08%~5.29%)。结论:建立了两种检测可溶性AOPPs的夹心ELISA,有望用于临床标本检测及AOPPs致病机制研究。 展开更多
关键词 晚期氧化蛋白产物(AOPPs) 单克隆抗体 氧化应激 酶联免疫吸附实验
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大豆11S球蛋白用作新型免疫原载体的可行性
17
作者 陈蕾 李琳 +2 位作者 何小维 苏健裕 刘晓云 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期110-114,共5页
为探讨大豆11S球蛋白代替牛血清白蛋白(BSA)作为酶联免疫检测的新型免疫原载体的可行性,分别采用不同方法将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)同大豆11S球蛋白、大豆7S球蛋白和BSA交联起来作为免疫原,得到抗SDM-大豆11S球蛋白、SDM-大豆7S球蛋白和SDM... 为探讨大豆11S球蛋白代替牛血清白蛋白(BSA)作为酶联免疫检测的新型免疫原载体的可行性,分别采用不同方法将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)同大豆11S球蛋白、大豆7S球蛋白和BSA交联起来作为免疫原,得到抗SDM-大豆11S球蛋白、SDM-大豆7S球蛋白和SDM-BSA的多克隆抗体;然后采用间接ELISA法检测3种抗血清的效价及纯化所得抗体的特异性,建立SDM对3种抗体的标准抑制曲线.结果表明,同SDM-BSA相比,SDM-11S具有较好的免疫原性和特异性,抗SDM-11S的多克隆抗体对其他磺胺类物质的交叉反应性良好,均低于0.01%.因此,在免疫检测中,大豆11S球蛋白可以尝试替代牛血清白蛋白(BSA)作为一种新型的免疫原载体. 展开更多
关键词 免疫原载体 磺胺二甲氧嘧啶 牛血清白蛋白 酶联免疫吸附实验
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兔脑创伤后早期血清β淀粉样前体蛋白动态变化的实验研究
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作者 黄海能 罗起胜 +5 位作者 赵邦 谭源福 邓元央 黄华东 符黄德 李传玉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期22-23,30,共3页
目的探讨兔脑创伤后血清β淀粉样前体蛋白(β-APP)含量与损伤程度及其时间动态变化相关性。方法将24只大白兔随机分为对照组和轻、中、重度脑损伤组,各组于不同时间点(0.5h、2h、6h、24h)采集标本,检测血清β-APP的含量。结果采用完全... 目的探讨兔脑创伤后血清β淀粉样前体蛋白(β-APP)含量与损伤程度及其时间动态变化相关性。方法将24只大白兔随机分为对照组和轻、中、重度脑损伤组,各组于不同时间点(0.5h、2h、6h、24h)采集标本,检测血清β-APP的含量。结果采用完全随机设计多因素重复测量方差分析和组间两两比较的LSD检验进行统计学分析。结果脑损伤后血清β-APP均升高。中、重度损伤组各时间点血清β-APP含量较对照组和轻度损伤组升高(P<0.05),重度损伤组血清β-APP含量各时间点均高于同时间点的中度损伤组,但差异无统计学意义(P>0.05);轻度损伤组血清β-APP含量与对照组相比在统计学上无显著性差异(P>0.05)。结论脑损伤后血清β-APP含量升高,且损伤越重血清β-APP含量越高。血清β-APP含量可作为早期判断颅脑损伤程度指标之一。 展开更多
关键词 创伤性脑损伤 酶联免疫吸附实验 Β淀粉样前体蛋白
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实验动物中新型冠状病毒的感染情况调查
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作者 李晓波 王吉 +8 位作者 付瑞 王莎莎 王淑菁 李威 秦骁 黄宗文 贺争鸣 岳秉飞 林更涛 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第9期21-24,共4页
目的对实验动物中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的感染情况进行初步调查。方法采用双抗原夹心ELISA方法对2020年各实验动物生产单位送检的实验动物血清中新型冠状病毒抗体进行检测,包括25个品系的小鼠90只,5个品系的大鼠38只,豚鼠20只,3个... 目的对实验动物中新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的感染情况进行初步调查。方法采用双抗原夹心ELISA方法对2020年各实验动物生产单位送检的实验动物血清中新型冠状病毒抗体进行检测,包括25个品系的小鼠90只,5个品系的大鼠38只,豚鼠20只,3个品系的兔27只,比格犬5只。结果对2020年各实验动物生产单位送检的90只小鼠,38只大鼠,20只豚鼠,27只兔及5只比格犬采用双抗原夹心ELISA检测新型冠状病毒抗体,其结果均为阴性。结论初步研究还不能证实实验动物中存在新型冠状病毒。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 实验动物 酶联免疫吸附实验
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利用牛奶过敏者血清检验牛奶中过敏原酶解程度的研究 被引量:4
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作者 白振宇 庞广昌 +1 位作者 刘瑞玲 张喆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期46-49,共4页
利用对牛奶过敏者和对牛奶不过敏者的血清作为“一抗”,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,检测牛奶水解后对牛奶过敏者血清的结合能力,从而确定牛奶中过敏原蛋白的最佳水解消除条件,降低牛奶及奶制品对牛奶过敏者的致敏性,达到牛奶过... 利用对牛奶过敏者和对牛奶不过敏者的血清作为“一抗”,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,检测牛奶水解后对牛奶过敏者血清的结合能力,从而确定牛奶中过敏原蛋白的最佳水解消除条件,降低牛奶及奶制品对牛奶过敏者的致敏性,达到牛奶过敏人群可以饮用的标准。结果表明:胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶共同水解牛奶的最佳条件是酶与底物质量比W(E/S)=4%,pH1.5(胃蛋白酶)和pH8.0(胰蛋白酶和木瓜蛋白酶),温度40℃(胃蛋白酶和胰蛋白酶)和45℃(木瓜蛋白酶),水解时间3h,用酶标仪在492nm测得其水解后奶样与过敏者血清结合的OD值已降到了牛奶不过敏者血清与未水解牛奶结合的OD值水平,达到了消除过敏原的效果。 展开更多
关键词 牛奶过敏 酶联免疫吸附实验 过敏原 HRP-羊抗人IgE
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