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题名GoldenBraid酶切连接反应体系的优化
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作者
徐美慧
张耀杰
唐克轩
苗志奇
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机构
上海交通大学农业与生物学院
不详
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第9期266-274,共9页
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基金
国家重点研发计划(2018YFA0900600)。
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文摘
旨在获得更为高效稳定的GoldenBraid(GB)酶切连接组装反应体系。通过优化GB反应中酶切时间、缓冲体系、限制性内切酶和底物配伍来提高有效克隆的效率,确定最佳反应体系。结果显示,4 min酶切时间,1μL FastDigest Buffer(10×)缓冲体系,1 mmol/L ATP,0.5μL FastDigest Esp3I或FastDigest Eco31I,元件供体载体与受体载体的摩尔比3∶1时,有效克隆比例接近99%,是优化前(BsmBI 8%、BsaI 23%)的4倍以上,此时酶切连接效率接近100%。与原始方案相比,通过体系的优化,可以在更少内切酶用量(原方案为1μL)的情况下,显著提高有效克隆比例,表明本方法能提高GB系统的酶切连接效率和实用性。
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关键词
GoldenBraid
优化
有效克隆
酶切连接效率
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Keywords
GoldenBraid
optimization
effective cloning
efficiency of enzyme digestion and ligation
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分类号
Q789
[生物学—分子生物学]
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